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miR-7靶向调节EGFR基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响
目的 探讨miRNA-7(miR-7)对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响.方法 将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-7抑制剂组、miR-7模拟物组和对照组,分别将miR-7抑制剂或miR-7模拟物转染至miR-7抑制剂组或miR-7模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-time PCR法检测各组细胞miR-7表达水平,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化.Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞EGFR mRNA和蛋白表达水平.结果 与对照组相比,miR-7抑制剂组SKOV3细胞miR-7表达水平显著降低,miR-7模拟物组则显著升高(P＜0.01).与对照组相比,miR-7抑制剂组SKOV3细胞增殖与侵袭能力显著升高,EGFR mRNA及蛋白表达水平显著升高,miR-7模拟物组则均显著降低(P＜0.01).结论 miR-7抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭可能与下调EGFR的表达相关.
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miR-7过表达对肺癌放疗敏感性的影响研究
近年来,miRNAs与肿瘤的关系日益引起关注.miR-7是位于第9染色体中异构核蛋白K基因的第一个内含子miRNA,在不同生物体内均比较保守.目前miRNA与肺癌关系的研究大多集中在与肺癌发生、发展及预后的关系方面,很少有关于miRNA与肺癌放疗敏感性方面的研究.本文研究了miR-7对肺癌细胞A549的放疗敏感性的影响及其可能的作用靶标,为研究肺癌的放疗机制提供理论基础.
关键词： miR-7 EGFR/PI3K/Akt2 肺癌 放疗敏感性 -
实时荧光定量 PCR 检测血清 miR-7方法的建立及临床初步应用
目的：建立 ploy（A）聚合酶加尾的 SYBR Green I 实时荧光定量 PCR 方法检测血清 miR-7，并作临床初步应用。方法用 Trizol 试剂提取血清总 RNA。miR-7 ploy（A）聚合酶加尾逆转录获得 cDNA，进行 SYBR Green I 实时定量 PCR 扩增检测。制作 C．elegans-miR-39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线，绝对定量血清中 miR-7的表达水平。结果该方法能定量检测血清 miR-7表达水平，熔解曲线呈单峰，PCR 扩增产物特异，在103 copies／uL 至106 copies／uL 范围内有良好的线性关系（r 2＝0．995），并且检测重复性好。糖尿病患者血清中 miR-7表达水平明显高于健康体检者（P ＜0．05）。结论所建立的 ploy（A）聚合酶加尾 SYBR Green I 实时荧光定量 PCR 方法能敏感、特异地检测血清中 miR-7的表达水平，为下一步临床应用的研究奠定了方法学基础。
关键词： SYBRGreenI实时荧光定量PCR miR-7 糖尿病 -
MicroRNA-7与肺癌关系的研究进展
MicroRNA-7(miR-7)首先在果蝇(Drosophila melanogaster)体内被发现,参与果蝇翼、卵子等形成. 在人类体内miR-7不但参与细胞增殖、分化等,还参与肿瘤的发生发展,尤其在肺癌中起重要作用. 多数研究报道肺癌组织和肺癌细胞株中miR-7呈低表达,低表达组患者预后差,提高miR-7的表达能抑制肿瘤生长. miR-7作为肿瘤抑制因子,负性调控BCL-2、EGFR等的表达,调节肿瘤细胞对放化疗和靶向治疗的敏感性,有望成为肺癌治疗的新靶点.
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过表达miR-7对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭的影响
目的:探讨miRNA-7(miR-7)过表达对上皮性卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响.方法:从人类基因组中扩增出带有酶切位点的miR-7目的基因,将其连接到pIRES质粒构成重组质粒并予以鉴定.将pIRES-miR-7重组质粒及空质粒转染到SKOV3细胞,用qRT-PCR检测转染的SKOV3细胞miR-7的表达.极限稀释法筛选稳定转染的pIRES-miR-7 SKOV3及pIRES SKOV3细胞克隆.利用CCK8法测定过表达miR-7 SKOV3的增殖能力,Transwell小室法测定过表达miR-7 SKOV3的侵袭能力.结果与结论:成功构建了pIRES-miR-7重组质粒,将其转染SKOV3细胞后筛选出稳定转染pIRES-miR-7的SKOV3细胞克隆,其表达的miR-7水平显著高于pIRES SKOV3组(P＜0.01)及野生型SKOV3组(P ＜0.001),且细胞增殖及侵袭能力pIRES-miR-7 SKOV3组比pIRES SKOV3组下降.
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探讨NDUFA13抑制结肠癌细胞增殖的机制
目的 探讨抑癌基因Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物13(NDUFA13)抑制结肠癌生长的机制.方法 以人结肠正常组织为对照,用实时荧光定量PCR及免疫组织化学方法检测NDUFA13及miR-7在60例人结肠癌中的表达；体外细胞模型研究NDUFA13基因对结肠癌细胞株增殖水平的影响.结果 与人结肠正常组织比较,NDUFA13及miR-7在人结肠癌表达显著下调(P＜0.01),两者的表达呈正相关；在人结肠癌细胞株SW480及HCT-116中高表达NDUFA13能够显著抑制结肠癌细胞的增殖.结论 抑癌基因NDUFA13在人结肠癌中通过促进miR-7的成熟而抑制肿瘤的发生发展.
关键词： 结肠癌 Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物13 miR-7 -
微小RNA-7在内分泌恶性肿瘤中的研究进展
微小RNA(microRNA,miRNA)是一类非编码、内源性RNA分子.许多研究证实miRNA在人类肿瘤中有着异常表达,与多种人类肿瘤的发生、进展以及对治疗的反应有关.微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)是miRNA家族的一个重要成员.目前研究发现,miR-7与甲状腺癌、胰腺癌等内分泌恶性肿瘤的发生、发展、治疗及预后密切相关,表明其可能作为内分泌恶性肿瘤生物治疗的潜在靶分子.文章就miR-7在甲状腺癌等内分泌恶性肿瘤的研究进展作一综述.
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miR-7在口腔鳞状细胞癌中的表达及潜在临床意义
目的 研究miR-7在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及潜在临床意义.方法 获取原发性OSCC患者肿瘤组织53例及正常健康组织27 例,利用qRT-PCR检测各组织中miR-7的表达,并分析其与上皮间质转化的相关性.利用质粒转染技术将含miR-7 序列片段的质粒导入OSCC细胞株SCC9中,通过建立过表达miR-7 的SCC9 细胞进一步验证miR-7与OSCC上皮间质转化的关系.结果 与健康组 织比较,miR-7 在 OSCC 肿瘤组织中的表达显著降低( P ＜0. 01);miR-7的表达与上皮间质转化过程呈显著相关性(P＜0. 001).与对照组细胞比较,过表达miR-7促进SCC9细胞E-cadherin的表达,抑制 Fibronectin 的表达( P ＜0. 01).结论 miR-7在OSCC中低表达,与上皮间质转化过程高度相关.
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上调miR-7对胃癌细胞增殖凋亡的影响及其机制研究
目的 探讨上调miR-7对胃癌细胞增殖凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 利用实时定量PCR(qPCR)检测人正常胃黏膜上皮RGM-1细胞和胃癌BGC823细胞中miR-7表达差异;采用脂质体转染法上调BGC823细胞中miR-7表达,并通过qPCR检测其转染效果;CCK-8法检测转染24 h、48 h和72 h后BGC823细胞的增殖情况;转染48 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡的变化;Western blotting检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白的表达.结果 miR-7在胃癌BGC823细胞中的表达明显低于正常胃黏膜上皮RGM-1细胞(P<0.05).转染miR-7 mimics后,与空白组相比,阴性组中miR-7表达水平无显著差异(P>0.05),干扰组中miR-7表达显著上升(P<0.05).CCK-8检测结果显示,转染24 h、48 h和72 h后,干扰组BGC823细胞中的OD值较空白组显著降低(P<0.05),而阴性组与空白组组间差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞仪检测显示,与空白组相比,阴性组中G1期、S期、G2/M期细胞所占比例和细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),而干扰组中G1期细胞所占比例和细胞凋亡率显著升高,S期和G2/M期细胞所占比例显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05).Western blotting检测结果显示,上调miR-7表达后,BGC823细胞中CDK6、CDK4、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的相对表达水平均显著下降,Cleaved Caspase-3蛋白表达量显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 上调miR-7可抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与上调Cleaved Caspase-3蛋白表达、下调CDK6、CDK4、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达有关.
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miR-7对胃癌细胞SGC7901增殖、迁移及侵袭能力的影响及其与黏着斑激酶相关性研究
目的 探讨miR-7对胃癌细胞SGC7901增殖、迁移及侵袭能力的影响及其与黏着斑激酶(FAK)相关性.方法 培养人胃癌SGC7901细胞,将细胞分为miR-7 mimics组、miR-阴性对照组和空白对照组,分别转染miR-7模拟物(miR-7 mimics)、miR-阴性序列和不做任何处理.Real-time PCR检测miR-7表达,MTT法检测细胞增殖情况,Tran-swell小室检测细胞迁移能力和细胞侵袭能力,Western blot检测FAK和FAK Tyr397蛋白表达,利用Pearson相关分析对变量间相关关系进行分析.结果 miR-7 mimics组细胞中miR-7相对表达量(2.86±0.47),显著高于miR-阴性对照组(1.03±0.15)和空白对照组(1.06±0.17),差异有统计学意义(F=635.985,P＜0.01);miR-7 mimics组24、48、72和96 h细胞生长抑制率均高于miR-阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(均P＜0.05);迁移实验中,miR-7 mim-ics组平均迁移细胞数[(159.52±5.94)/视野],显著低于miR-阴性对照组[(315.42±7.59/视野]和空白对照组[(307.53±8.16)/视野],差异有统计学意义(均P＜0.05);侵袭实验中,miR-7 mimics组平均侵袭细胞数[(29.85±4.52)/视野],显著低于miR-阴性对照组[(85.42±5.59)/视野]和空白对照组[(88.53±6.16)/视野],差异有统计学意义(均P＜0.05);miR-7 mimics组细胞中FAK、FAK Tyr397蛋白表达量均低于miR-阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(均P＜0.05);Pearson相关分析显示,细胞中miR-7表达量与FAK和FAK Tyr397蛋白表达量均呈负相关(r=-0.724和-0.874,均P＜0.01).结论 过表达miR-7可显著抑制胃癌SGC7901细胞增殖、迁移及侵袭过程,可能与负性调控FAK蛋白表达有关.
关键词： miR-7 人胃癌SGC7901细胞 迁移 侵袭 黏着斑激酶 -
miR-7在心肌细胞缺氧复氧模型中的表达及对心肌细胞凋亡的影响
目的 探讨miR-7在心肌细胞缺氧复氧模型中的表达及对心肌细胞凋亡的影响. 方法 构建心肌细胞缺氧复氧模型,RT-PCR检测心肌细胞中miR-7的表达水平.心肌细胞转染miR-7模拟物和抑制物,RT-PCR检测转染效果.流式细胞术检测miR-7模拟物和抑制物对缺氧复氧心肌细胞凋亡的影响,试剂盒检测细胞中乳酸盐脱氢酶(LDH)水平,Westem blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白水平. 结果 缺氧复氧心肌细胞模型中miR-7的表达水平明显高于正常培养的心肌细胞(P＜0.01).miR-7模拟物能够提高心肌细胞中miR-7的表达水平,而miR-7抑制物能够抑制心肌细胞中miR-7的表达.miR-7模拟物能够降低缺氧复氧心肌细胞的凋亡率和细胞中cleaved caspase-3表达,抑制心肌细胞分泌LDH,促进细胞中p-Akt的表达.miR-7抑制物能够促进缺氧复氧心肌细胞凋亡和细胞中cleaved caspase-3表达,促进心肌细胞分泌LDH,抑制细胞中p-Akt的表达. 结论 miR-7在心肌细胞缺氧复氧模型中表达升高.miR-7能够降低缺氧复氧心肌细胞凋亡,干扰miR-7表达能够促进缺氧复氧心肌细胞凋亡,作用机制可能与Akt信号通路有关.
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养正散结汤调控miR-7/EGFR表达抑制胃癌细胞增殖
目的 探讨养正散结汤(YZSJD)对胃癌细胞微小RNA(miRNA)表达谱的影响及YZSJD通过调控miRNA发挥抑制胃癌细胞增殖作用可能的分子机制.方法 SD大鼠灌胃YZSJD(16.4 g·kg-1),每日1次,连续7 d,制备大鼠含药血清.AGS、SGC-7901、HS-746T、MKN-45胃癌细胞给予10%YZSJD大鼠含药血清干预;miRNA芯片检测胃癌细胞的miRNA表达情况;qRT-PCR法检测胃癌细胞miR-7表达.MKN-45细胞转染miR-7 mimic、miR-7 inhibitor后,采用CCK-8法检测细胞增殖;Western Blot法检测MKN-45细胞表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达.结果 YZSJD干预后,胃癌细胞miRNA表达谱发生显著改变,促癌性miRNA发生下调,抑癌性miRNA显著上调.与对照组比较,AGS、SGC-7901、HS-746T和MKN-45胃癌细胞中药组的miR-7相对表达量显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05).与阴性对照组比较,miR-7 mimic能够显著上调MKN-45细胞的miR-7表达,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌细胞MKN-45在转染miR-7 mimic 48,72,96 h后,细胞增殖抑制率显著下调,差异均有统计学意义(P<0.05);在转染miR-7 inhibitor 72,96 h后,细胞增殖促进率显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,中药组的MKN-45细胞EGFR蛋白相对表达水平明显下调,差异有统计学意义(P<0.05).结论 中药复方YZSJD能影响胃癌细胞miRNA表达谱,其可能通过调节miR-7/EGFR表达发挥抑制胃癌细胞增殖的作用.
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养正散结汤对人胃癌癌前病变细胞增殖、 凋亡及抑癌性miRNA表达的影响
目的 探讨养正散结汤对人胃癌癌前病变(PLGC)细胞增殖、 凋亡及抑癌性miRNA表达的影响.方法 采用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)转化的人胃黏膜上皮细胞GES-1(MC细胞)作为PLGC细胞模型,以10%浓度的养正散结汤含药血清处理MC细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡,实时定量PCR检测let-7a和miR-7的表达.结果 养正散结汤组48、72 h的OD值均低于阴性对照组(P<0.01),细胞凋亡率高于阴性对照组(P<0.01);MC细胞let-7a、miR-7的表达均低于GES-1细胞(P<0.05);经养正散结汤大鼠含药血清干预后,let-7a、miR-7的表达显著上调(P<0.01).结论 养正散结汤可能通过上调抑癌性miRNA let-7a、miR-7的表达而抑制MC细胞增殖、诱导其凋亡.
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m iR －7在乳腺非特殊型浸润性导管癌中的表达及意义
目的：探讨乳腺非特殊型浸润性导管癌（ IDC－NOS）中miR－7表达与临床病理因素，分子特性和预后的关系。方法收集132例IDC－NOS病例和20例正常乳腺组织病例的石蜡标本和临床资料。免疫组织化学检测ER、PR、Ki67和c－erbB－2蛋白表达；荧光原位杂交检测Her2基因扩增；qRT－PCR检测miR－7表达。结果肿瘤大小、组织学分级、TNM分期和肿瘤细胞增殖是IDC－NOS的独立预后因子（P＜0.05，P＜0.01）；腋窝淋巴结转移率高者和Her2基因扩增者的生存时间显著缩短（P＜0.05，P＜0.01）。 miR－7在IDC－NOS中表达较正常乳腺组织低（P＜0.01），与淋巴结转移率呈负相关（r＝－0.450）；miR－7表达与肿瘤组织学分级、TNM分期和预后呈显著负相关（ r＝－0.236、－0.215、－0.368），且miR－7高表达较低表达者生存时间显著延长（ P＜0.01）。结论 miR－7表达与IDC－NOS的生物学行为密切相关，可能成为其潜在的预后指标。
关键词： 非特殊型浸润性导管癌 miR-7 预后 -
MiR-7下调LXRβ表达而抑制HepG2细胞脂质生成的作用
目的 初步探讨miR-7对LXRβ的抑制作用及其在肝细胞脂质生成中的作用.方法 生物信息学分析,预测LXRβ mRNA的3'-UTR上miR-7的可能结合位点.在人肝细胞系HepG2中转染miR-7,以Real-time PCR、Western blot检测LXRβ mRNA水平和蛋白水平表达的变化;构建LXRβ 3'-UTR报告基因质粒pMIR/LXRβ,Report assay检测报告基因荧光素酶活性;Real-time PCR检测miR-7对LXRβ激动剂诱导的脂质生成相关靶基因FAS、ACC的表达变化.结果 在人肝细胞中,miR-7能够显著抑制LXRβ的表达(P＜0.05),且miR-7能降低LXRβ重组质粒pMIR/LXRβ的荧光素酶活性(P＜0.05).同时抑制其激动剂对脂质代谢相关靶基因的诱导作用.结论 miR-7可通过结合在LXRβ 3'-UTR区域而抑制其表达,进而抑制FAS、ACC的表达而抑制脂质生成.
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miR-7介导加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞侵袭和相关蛋白MMP2和MMP9表达的影响
目的:研究miR-7是否介导加味四君子汤含药血清对恶性黑色素瘤细胞B16迁移侵袭及其相关机制的研究.方法:37℃、5％ CO2的恒温培养箱中培养B16恶性黑色素瘤细胞,收集对数期细胞,等效剂量为9.22 g/kg的加味四君子汤终浓度10％的小鼠含药血清,作用24 h.实验分为空白对照组、血清对照组、转染阴性对照组、miR-7模拟物组和miR-7抑制物组,每组合5个样本数,应用Real-time PCR法检测miR-7模拟物和miR-7抑制物的转染效率、应用Transwell实验检测B16细胞侵袭能力,应用Realtime PCR和Western Blot方法检测基质金属蛋白酶(metalloprotease,MMP)2和9基因的mRNA和蛋白的表达.结果:miR-7模拟物和miR-7抑制物成功转染到B16恶性黑色素瘤细胞中,与空白对照组、血清对照组和阴性对照组相比,miR-7模拟物组(RelativeConc值为8.47±0.28)和miR-7抑制物组(Relative Conc值为0.19 ±0.01)分别显著升高和显著降低miR-7表达;与空白对照组和血清对照组及阴性对照组相比,miR-7模拟物组的细胞的侵袭能力显著降低,miR-7抑制物组的细胞的迁移侵袭能力显著升高;与空白对照组和血清对照组及阴性对照组相比,miR-7模拟物组MMP2和MMP9mRNA和蛋白表达水平显著降低,miR-7抑制物组MMP2和MMP9mRNA和蛋白表达水平显著升高.结论:miR-7介导加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞迁移侵袭过程,并且能够显著降低与B16恶性黑色素瘤细胞侵袭相关的蛋白MMP2和MMP9表达,提示miR-7可能是加味四君子汤抗恶性黑色素瘤的重要分子之一.
关键词： 加味四君子汤 miR-7 侵袭 MMP B16恶性黑色素瘤细胞 -
miR-7介导加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞增殖和促进凋亡的研究
目的:研究miR-7是否介导加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞增殖和促进B16恶性黑色素瘤细胞凋亡的过程.方法:应用血清药理学方法给药,37℃、5％ CO2的恒温培养箱中培养B16恶性黑色素瘤细胞,收集对数期细胞,终浓度10％的小鼠含药血清,作用24 h.实验分为空白对照组、血清对照组、4.61 g/kg、9.22 g/kg和18.44 g/kg加味四君子汤含药血清组,每组合5个样本数,应用Real-time PCR法检测miR-7的内源性表达;分别转染miR-7模拟物和miR-7抑制物到B16恶性黑色素瘤细胞,应用Real-time PCR法检测miR-7模拟物和miR-7抑制物的转染效率、应用MTT法、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测miR-7对B16恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响.结果:加味四君子汤含药血清作用24h,与空白对照组和血清对照组相比,9.22g/kg和18.44 g/kg加味四君子汤含药血清组B16恶性黑色素瘤细胞中miR-7表达升高;miR-7模拟物和miR-7抑制物成功转染到B16恶性黑色素瘤细胞中,其Relative Conc值分别是(6.47±0.18)和(0.20±0.01),与空白对照组、血清对照组和阴性对照组相比分别显著升高和显著降低;与空白对照组和血清对照组及阴性对照组相比,miR-7模拟物组的抑制率显著升高(53.61±2.11)％,miR-7抑制物组抑制率显著降低(6.76±0.48)％;与空白对照组和血清对照组及阴性对照组相比,miR-7模拟物组的凋亡率显著升高(34.30±2.13)％,miR-7抑制物组凋亡率显著降低(5.80±0.78)％.结论:miR-7介导加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞增殖和促进B16恶性黑色素瘤细胞凋亡的过程,miR-7可能是加味四君子汤抗恶性黑色素瘤的重要分子之一.
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微小RNA-7慢病毒过表达载体的构建及其作用
目的 构建miR-7慢病毒过表达载体,并对人肺癌细胞进行感染,观察其影响效果.方法 设计引物,PCR法扩增miR-7初级序列;纯化、经BamHI和EcoRI双酶切后将其亚克隆入pLVX-shRNA慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定;将构建成功的pLVX-shRNA-miR-7(命名为pLV-miR-7)载体体外转染293T细胞进行包装,在48 h收获上清,用Real-timePCR法测定该慢病毒滴度;将制备好的病毒上清体外感染人肺癌95 D细胞后,用Real-time PCR检测各组中miR-7成熟体表达水平;CCK-8法检测95 D细胞生长变化.结果 菌液PCR和酶切结果显示miR-7目的片段418 bp成功构入载体pLVX-shRNA;同时结合测序结果证明构建miR-7慢病毒过表达载体成功;慢病毒上清滴度为1.53×10 7copies/mL;该病毒感染入肺癌95 D细胞后可有效表达miR-7成熟体,并显著抑制细胞的体外生长(P＜0.05).结论 成功构建miR-7慢病毒过表达载体,为进一步探究miR-7在肺癌发病机制中的作用提供了重要实验基础.
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自身启动子调控miR-7真核表达载体的构建及其意义
目的 构建带有miR-7自身启动子的miR-7重组真核表达载体,研究其对人肺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响.方法 预测miR-7启动子序列,设计含有该序列和miR-7前体序列目的片段的引物,PCR扩增后亚克隆入pGL3.0-Basic载体以构建miR-7自身启动子调控的真核表达载体pGL3.0-Basic-miR-7-promoter(命名为p-miR-7-pro);将所构建载体转染人肺癌95D细胞,Real-time PCR探针法检测95D细胞中miR-7的表达水平;MTT和克隆形成实验分别检测95D细胞的增殖和克隆形成能力;划痕法观察95D细胞体外迁移能力的变化;FACS检测95D细胞的凋亡情况.结果 酶切和测序结果证明成功构建p-miR-7-pro真核表达载体,转染95D细胞后可有效表达miR-7;与对照组相比,p-miR-7-pro转染组95D细胞的体外增殖能力受到明显的抑制(0.60 ±0.03 vs 0.19 ±0.05,P＜0.05);同时其迁移能力也显著降低(473 ±7 vs 99 ±2,P＜0.05);而细胞凋亡则显著增加(9.233 ±0.586％vs 12.967 ±0.643％,P＜0.05).结论 成功构建由自身启动子调控的miR-7真核表达载体,为后续研究miR-7在肺癌基因治疗中的作用提供重要实验基础.
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过表达miRNA-7对乳腺癌4T1细胞体外生长的影响
目的 探讨过表达miRNA-7(miR-7)对乳腺癌4T1细胞体外生长的影响.方法 将真核表达载体pcD-NA3.1-miR-7(p-miR-7)体外瞬时转染乳腺癌4T1细胞后,Real-time PCR探针法检测细胞中miR-7的表达;CCK-8法及克隆形成实验观察细胞的增殖和克隆形成情况;划痕法观察细胞体外迁移能力的变化;Western blot检测细胞Akt与p-Akt蛋白表达的变化.结果 与对照组比较,p-miR-7载体转染组细胞miR-7的表达水平明显上调,差异有统计学意义(P<0.05);细胞增殖和克隆形成能力明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);划痕实验进一步显示p-miR-7载体转染组细胞的体外迁移能力显著削弱,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果显示细胞p-Akt蛋白表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.05).结论 过表达miR-7能明显抑制乳腺癌细胞的体外生长能力,可能与Akt信号通路传递改变有关.
