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幽门螺杆菌细胞微生物学模型的研究
目的建立幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)细胞微生物学研究模型. 方法选择6至8月龄胎儿胃粘膜组织进行原代细胞培养,运用扫描和透射电镜研究了螺杆状和圆球形Hp与人胃粘膜上皮细胞相互作用关系. 结果螺杆状Hp很快与人胃粘膜上皮细胞微绒毛粘附,Hp粘附细胞处形成一个致密纤维样肌动蛋白垫,上皮细胞膜杯状内陷包绕Hp,紧密粘附于宿主细胞,Hp粘附下方细胞内微丝、微管和肌动蛋白呈局灶性聚集.圆球形Hp可出现类似生物学效应,提示两种形态的Hp皆可作用于人胃粘膜上皮细胞.此外,螺杆状Hp还可与宿主细胞膜融合,被细胞内在化,细胞内出现空泡效应.上述病理性改变与Hp感染的胃粘膜活性组织标本的检查结果基本一致. 结论原代胃粘膜上皮细胞与Hp相互作用近似于Hp体内致病的微环境,是Hp细胞微生物学研究的良好模型.
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cagA基因阳性幽门螺杆菌培养滤液对人胃粘膜上皮细胞系GES-1生长的影响
目的研究cagA+幽门螺杆菌(Hp)培养滤液对人胃粘膜上皮细胞(GES-1)的作用及机制. 方法制备Hp培养滤液,PCR鉴定cagA基因.采用倒置显微镜、电镜、细胞生长曲线、克隆形成实验、单细胞微凝胶电泳及流式细胞仪等,观察Hp(cagA+)培养滤液对GES-1细胞的作用. 结果经Hp(cagA+)培养滤液处理的GES-1细胞,细胞核增大、畸形、核染色质变粗、核仁肥大、核分裂.生长曲线可见细胞增生活跃,增殖率195%.克隆形成试验显示细胞克隆形成能力增强,增殖率达到337.5%.流式细胞仪S期细胞比率显著高于对照组.Hp(cagA+)培养滤液可使GES-1细胞形成彗星现象. 结论 Hp(cagA+)培养滤液可以导致GES-1细胞的生长特性改变,呈现肿瘤细胞的形态学及生长特征.DNA损伤可能是cagA诱导GES-1细胞生长特性改变的机制之一.
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药物对乙醇所致胃粘膜损伤的保护作用
随着酒精(乙醇)消费人口的增多,乙醇对人体的损害作用日益引起人们的重视.大量乙醇摄入后可引起机体多系统损害.由于乙醇的局部刺激作用,消化道粘膜损伤较为常见.胃是乙醇较早接触的重要脏器,乙醇对胃粘膜的损伤机制和药物对胃粘膜的保护机制及作用,近年来已成为国内外学者研究的重要课题之一1 对胃粘膜的损伤机制及作用众所周知,正常胃粘膜的完整性是由攻击因子与防御因子的动态平衡来维持的,一旦这种平衡被破坏将会导致胃粘膜损伤.乙醇作为一种攻击因子,可使白细胞浸润于胃粘膜,并释放超氧化物、次氯酸等引起组织损伤[1].夏敏等[2]报道,75%或95%的乙醇灌胃后可引起小鼠胃粘膜上皮细胞不同程度的变性、坏死以及间质血管瘀血.电镜下可见壁细胞核、线粒体等结构异常,且随着乙醇浓度的升高损伤加重,同时伴有MDA升高、钙离子浓度升高和荧光偏振P值升高(提示烃链活动性减小及膜流动性减小).由此推断,乙醇致胃粘膜损伤可能与细胞内钙超载、氧自由基产生过多而引起细胞膜流动性下降有关.
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中医辨证治疗肠上皮化生
肠上皮化生是指胃粘膜上皮细胞被肠型上皮细胞所代替,即胃粘膜中出现类似小肠或大肠粘膜的上皮细胞,是胃粘膜常见病变,见于多种慢性胃病.WHO于1972年提出,胃癌前病变包括胃黏膜上皮异型增生和肠上皮化生等.近年来的研究证实,肠上皮化生为重要的胃癌前病变之一.现就肠上皮化生的特点、病理机制、评价方法、临床干预等方面综述如下.
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穴注黄芪、当归注射液对大鼠胃癌前病变胃粘膜上皮细胞影响的定量分析
目的:探讨穴注黄芪、当归注射液对大鼠慢性萎缩性胃炎(CAG)胃粘膜上皮细胞超微结构的影响.方法:采用N-甲基-N-硝基亚硝基胍(MNNG)诱发大鼠CAG.随机将70只大鼠分为正常组,模型1组(40μg/mLMNNG造模)及模型2组(60 μg/mL MNNG造模),不作任何治疗.穴注1组(40μg/mL MNNG造模+穴注)与穴注2组(60μg/mL MNNG造模+穴注),造模10周开始以黄芪、当归注射液等份混合注入足三里穴.31周时,进行胃粘膜常规病理及胃粘膜上皮细胞主要细胞器的定量分析.结果:1)随造模浓度的增加,胃粘膜损伤及胃粘膜萎缩程度等均相应加重;胃粘膜上皮细胞线粒体退变,粘原颗粒减少,细胞间隙增宽(均P<0.05).2)穴注法可明显改善胃粘膜上皮细胞功能,缩小上皮细胞间隙,保护胃粘膜屏障而逆转CAG(均P<0.05).结论:胃粘膜上皮细胞的损伤与胃壁屏障结构破坏,胃粘膜萎缩发生、进展至癌变密切相关;穴注法可通过改善上皮细胞的结构与功能,保护胃壁屏障而有效防治CAG.
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乙酰胆碱对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞 N受体β亚单位的影响
目的:了解乙酰胆碱(ACh)对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞烟碱型胆碱能受体(N受体)β亚单位的影响及两者间的差异.方法:采用免疫组化法检测培养的人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞膜上N受体β亚单位的数量、数密度和面密度的变化.结果:胃腺癌细胞N受体β亚单位数量、数密度明显高于而面密度低于胃粘膜上皮细胞(P<0.05).10-6mol/L ACh使胃粘膜上皮细胞N受体β亚单位的数目、面密度和数密度增加(P<0.01),该作用未被阿托品阻断.两种浓度的ACh对胃腺癌细胞N受体β亚单位未见显著性影响.结论:低浓度ACh使培养的胃粘膜细胞N受体失敏,但对胃腺癌细胞N受体β亚单位的作用不明显.
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乙酰胆碱对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞N受体α亚单位的影响
目的:了解Ach对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞烟碱型胆碱能受体(N受体)α亚单位数量的影响及两者间的差异.方法:采用免疫组化法检测培养的人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞膜上N受体α亚单位的数量.结果:胃腺癌细胞N受体α亚单位数量、数密度明显高于胃粘膜上皮细胞(P<0.01).Ach使胃粘膜上皮细胞N受体α亚单位的数目、面密度和数密度增加(P<0.01),却使胃腺癌细胞N受体α亚单位数量及面密度减少(P<0.01).结论:Ach对正常细胞和肿瘤细胞的作用机制可能不同.
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乙酰胆碱对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞N受体γ亚单位的影响
目的:了解Ach对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞烟碱型胆碱能受体(nAchRs) γ亚单位的影响及两者间的差异.方法:采用免疫组化法检测培养的人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞膜上nAchRs γ亚单位的数量.结果:Ach使胃粘膜上皮细胞nAchRs γ亚单位的数量、数密度和面密度显著增加(P<0.01),但对胃腺癌细胞nAchRs γ亚单位无影响.结论:胃粘膜上皮细胞nAchRSs对不同浓度的Ach反应性不同,胃腺癌细胞nAchRs γ亚单位对Ach的敏感性降低.
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鱼露致胃粘膜上皮细胞DNA损伤作用
目的 研究鱼露及亚硝化鱼露致胃粘膜上皮细胞DNA的损伤作用.方法 应用改良的单细胞凝胶电泳技术,进行体外和体内试验,观察胃粘膜上皮细胞DNA损伤程度.结果 体外试验测定尾长、尾矩和OLIVE尾矩发现亚硝化鱼露高剂量组[(13.42±3.74),(1.12±0.67),(1.21±0.71),μm]、中剂量组[(12.68±4.44),(1.07±0.68),(1.12±0.69)μm]及低剂量组[(11.79±4.49),(0.98±0.72),(1.05±0.70)μm]均高于阴性对照组[(9.14±2.54),(0.62±0.60),(0.60+0.59)μm],两两比较差异均有统计学意义(X2尾长=296.10;F尾距=27.62;X2 OLIVE尾矩=436.62;P<0.01).体内试验中尾长、尾矩和OLIVE尾矩50%亚硝化鱼露组[(14.51±4.54),(2.76±2.26),(3.03±2.32)μm]、25%亚硝化鱼露组[(13.49±4.42),(2.06±1.86),(2.25±1.98)μm]均高于阴性对照组(11.82±3.80),(1.12±0.80),(1.35±1.19)μm],两两比较差异有统计学意义(X2尾长=88.11;X2尾距=165.83;X2 OLIVE尾矩=198.11;P<0.01).体外试验还发现,亚硝化鱼露浓度越高致DNA损伤作用越强,存在剂量--反应关系(r尾长=0.999,P<0.05;rOLIVE尾矩=0.997,P<0.05).结论 鱼露经亚硝化后对胃粘膜上皮细胞DNA有损伤作用.
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幽门螺杆菌与消化系统疾病的关系
1 幽门螺杆菌(HP)与急性胃炎当人的胃粘膜急性感染HP后,HP可穿透粘液层,紧贴在胃粘膜上皮细胞的表面繁殖.一些细菌粘附于上皮细胞表面,另外一些细菌则穿透上皮细胞进入固有层.由于组织的侵蚀和化学介质的参与将引起强烈的炎症反应,上皮可发生显著的退行性改变,粘液耗损、细胞脱落、合胞体不典型增生,胃小凹里多形核粒细胞浸润,腺窝脓肿形成,表面渗出、浅表糜烂,即发生急性胃炎的组织学改变. 笔者观察发现正常人HP感染率为5.4%,
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消化系统疾病的基因学
一、Helicobacter pylori感染与细胞内信号传递自1983年首次分离培养幽门螺杆菌(H.pylori)以来,已进行了大量的研究,并明确其与胃、十二指肠疾病有关.也对H.pylori的诊断、治疗进行了较多的研究,各种改良方法不断出现.临床上,日本不久也将迎来广泛应用除菌疗法的时代.另方面,有关病原性的分析也在进行,细菌与宿主细胞的相互作用成为其研究中心.H.pylori通过与胃粘膜上皮细胞表面接触、激活胃粘膜上皮细胞内的信号传递系统,阐明该机制的研究工作进展很快.
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幽门螺杆菌相关的胃粘膜上皮细胞的凋亡与Fas/FasL凋亡途径
幽门螺杆菌(H.pylori)感染与多种胃、十二指肠疾病的发生有关,是消化性溃疡发生和复发的重要因素.以往认为H.pylori分泌产生细胞毒素,引起胃上皮细胞的变性和坏死,从而造成胃粘膜损伤以致形成溃疡.随着对细胞损伤的另一机制--细胞凋亡的重视,许多研究发现:H pylori感染不仅可直接诱导,也可通过引起胃粘膜局部免疫/炎症反应间接诱导胃粘膜上皮细胞凋亡,导致胃粘膜屏障的破坏.近国外关于H pylori与消化性溃疡关系的研究证明:细胞毒T淋巴细胞(CTL)通过Fas/FasL途径介导的细胞凋亡在消化性溃疡致病机制中起重要作用.
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单功能烷化剂MNNG对人胃粘膜上皮GES-1细胞的损伤及其对Wnt/β-catenin信号通路的影响
本文旨在从Wnt/β-catenin信号通路的角度探讨单功能烷化剂MNNG诱导人胃粘膜上皮GES-1细胞损伤的机制.用MNNG (2×10-5 mol/L)处理GES-l细胞24 h,处理后第3天用倒置显微镜对GES-1细胞形态进行观察,用MTT法检测GES-1细胞活力,用流式细胞术检测GES-1细胞凋亡和周期变化,用Qpcr检测GES-1细胞中β-catenin、GSK-3β、c-Met和MMP7mRNA表达情况,用Westem blot检测β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β和c-Met蛋白表达情况.结果显示:MNNG能够明显损伤GES-1细胞,细胞形态变为不规则的长梭形;MNNG能够诱导GES-1细胞凋亡,明显阻滞细胞周期进程;MNNG能够上调β-catenin、GSK-3β、c-Met和MMP7 Mrna表达水平,并上调β-catenin、GSK-3β和p-GSK-3β蛋白表达水平.上述结果提示,MNNG对GES-1细胞的损伤可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活相关,这为胃粘膜损伤的细胞模型研究提供了参考.
关键词: Wnt/β-catenin信号通路 胃粘膜上皮细胞 损伤机制 -
白细胞介素1β对人胃粘膜正常上皮细胞增殖的影响
目的 研究白细胞介素1β(IL-1β)对人胃粘膜正常上皮细胞(GES-1)株增殖的影响.方法 用IL-1β与GES-1细胞培养,用3H-Tdr掺入法测定及MTT比色法分析检测总活细胞数来估计GES-1细胞DNA合成及细胞生成情况.结果 IL-1β以剂量依赖性增加GES-1细胞DNA合成及细胞数量.IL-1β对GES-1细胞的增殖作用可被IL-1ra阻断,IL-1β抗体对此无抑制作用.结论 IL-1β刺激可引起GES-1细胞的增殖.IL-1β是GES-1细胞的生长因子,在调节GES-1细胞增殖中有重要作用.IL-1β涉及幽门螺杆菌感染胃粘膜细胞的高增殖反应和胃癌的致癌过程.
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幽门螺杆菌感染与胃癌相关基因关系的研究进展
胃癌(stomach cancer)是源自胃粘膜上皮细胞的恶性肿瘤,占胃恶性肿瘤的95%.胃癌是在遗传易感性的基础上受到多种危险因素的影响而形成的,它的发生是一个多步骤、多因素进行性发展的过程.而作为胃癌Ⅰ类致癌物幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)与胃癌的关系的研究为广泛和深入,从流行病学、动物模型到基因分子水平都有广泛研究,涉及到胃癌相关基因,包括细胞信号转导、细胞增殖分化、细胞凋亡、细胞因子及粘附分子等各个方面.本文就近年来与幽门螺杆菌感染有关的胃癌相关基因的研究作简要综述.
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幽门螺杆菌cagA(+)株和胃上皮细胞增殖和凋亡的研究
幽门螺杆菌(Hp)感染是慢性胃炎的主要病因,是消化性溃疡的主要发病因素,并与胃癌的发生密切有关,但其作用机制尚不完全清楚.近年研究发现Hp感染可引起胃粘膜上皮细胞过度增殖和凋亡,并认为这可能是Hp感染导致胃癌发生的机制之一(1).
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PTP抑制剂对VacA空泡活性的影响
近期在VacA的研究中发现,该毒素对多种生长因子(尤其是EGF)作用于胃粘膜上皮细胞的信号转导通路有显著影响,VacA对EGF诱导的受体蛋白酪氨酸激酶(receptor protin-tyrosine kinase,RPTK)自身磷酸化及随后一系列的信号转导过程有明显的抑制作用.国外学者已初步分离并克隆出胃癌细胞株膜表面的VacA受体,分子量大小约250kDa,氨基酸序列同源性分析显示该受体属于受体蛋白酪酸磷酸酶家族(receptor protin-tyrosine phosphatase,RPTP),RPTPT是细胞信号转导过程中与RPTK相拮抗的一类具有酶活性的受体,可导致多种信号肽的去磷酸化,从而减弱EGF等生长因子对胃粘膜上皮细胞增殖、修复的促进作用.
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人类线粒体tRNAs基因在CagA阳性Hp培养滤液诱导转化的胃上皮细胞中表达
目的研究CagA阳性Hp培养滤液对人胃粘膜上皮细胞(GES-1)作用的机制.方法将CagA阳性Hp培养滤液诱导恶性转化的GES-1细胞与CagA阴性Hp培养滤液处理的GES-1细胞进行mRNA差异显示,以寻找Hp致胃癌发病的相关基因.结果 mRNA差异显示片断之一命名为PFN2,仅在Hp(CagA+)培养滤液处理的GES-1细胞中表达,斑点杂交结果与之一致.与Gene Bank资料序列同源性比较分析提示PFN2与人类线粒体tRNAs同源性100%,即为人类线粒体tRNAs基因的一部分.结论人类线粒体tRNAs基因可能参与了Hp 的CagA诱导的胃上皮细胞恶性转化过程.
关键词: 幽门螺杆菌 CagA基因 胃粘膜上皮细胞 线粒体tRNAs基因 -
CagA基因阳性Hp培养滤液对人胃粘膜上皮细胞系DNA损伤作用
目的研究CagA阳性幽门螺杆菌(Hp)培养滤液对人胃粘膜上皮细胞(GES-1)DNA的损伤作用。方法制备Hp培养滤液,PCR鉴定CagA基因。采用单细胞微凝胶电泳观察Hp(CagA+)培养滤液对GES-1细胞DNA的损伤作用。结果 Hp(CagA+)培养滤液可使GES-1细胞形成彗星现象。结论 Hp(CagA+)培养滤液可以导致GES-1细胞的DNA损伤。DNA损伤可能是CagA诱导GES-1细胞恶性转化的机制之一。
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CagA 阳性Hp培养滤液诱导转化的胃上皮细胞表达泛素活化酶E1基因
目的研究CagA阳性Hp培养滤液对人胃粘膜上皮细胞(GES-1)作用的机制. 方法将CagA阳性Hp培养滤液诱导恶性转化的GES-1细胞与CagA阴性Hp培养滤液处理的GES-1细胞进行mRNA差异显示,以寻找Hp致胃癌发病的相关基因.结果 mRNA差异显示片断之一命名为PFN1,仅在Hp(CagA+)培养滤液处理的GES-1细胞中表达, 斑点杂交结果与之一致.与Gene Bank资料序列同源性比较分析提示PFN1与泛素活化酶E1同源性99%,即为人类泛素活化酶E1基因的一部分. 结论泛素-蛋白水解酶复合体通路中的泛素活化酶E1基因可能参与了Hp 的CagA诱导的胃上皮细胞恶性转化过程.
关键词: 幽门螺杆菌 CagA基因 胃粘膜上皮细胞 泛素-蛋白水解酶复合体通路