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树脂薄切片在周围神经病变诊断中的应用
在神经科疾病的病理诊断中越来越多地使用周围神经活体组织检查来进行某些疾病的确诊及鉴别诊断,如遗传性周围神经病(HMSN运动感觉性神经病),线粒体肌病并发周围神经病,继发于糖尿病的周围神经病,多发性肌炎引起的外周神经损害及格林巴利综合征、异染性白质脑病等等[1-4]都需要作外周神经组织活检.以往的外周神经组织活检多采用石蜡切片Weil染色[5],由于此方法染色对比度差,分色不好掌握,此后又有学者介绍了变色-亮绿法[6]、改良的Meyer三色染色法[7]及髓鞘Loyez染色法.但石蜡切片在标本处理过程中往往会产生脂质抽提及石蜡包埋的收缩率较高、切片较厚等缺陷,镜下观察的结果往往与实际的病理改变有一定距离,我们在工作中探索了树脂包埋薄切片的天青-美蓝染色方法,可以提高神经髓鞘的分辨率,更为清晰真实地显示周围神经病变的微细结构.
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摘除大白鼠卵巢所致种植体周围骨组织的病理学改变
摘除大白鼠卵巢使已经获得骨结合的种植体周围骨量迅速下降［1］。但此过程中的骨组织结构变化目前尚不清楚。本项研究利用非脱钙骨磨片技术动态观察了摘除大白鼠卵巢所致种植体周围骨组织的病理学变化。 1.材料与方法：Wistar雌性大白鼠28只，体重190 g，年龄32 W，随机分实验与对照2群，每群再根据观察时间分28 d、84 d 2组，每组动物7只。暴露大白鼠胫骨骨骺端骨面，埋入种植体，56 d后取出大白鼠左右卵巢并结扎输卵管；不切除卵巢、不结扎输卵管者为对照群。28 d、84 d分别处死动物，摘除胫骨，常规固定、脱水、树脂包埋。利用EXAKT Gutting-Crinding系统沿种植体长轴研磨骨磨片至15 μm，联甲苯胺兰染色，光镜观察。
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不脱钙骨及种植体骨磨片不同染色方法的选择与应用
目的:探讨制作不脱钙骨及带种植体骨磨片时甲苯胺蓝染色法、亚甲基蓝-酸性品红法及Goldner's三色法的特点与选择.方法:取本实验室自2010年-2015年以来制作的100余张骨缺损修复或带种植体骨组织磨片,通过骨修复材料矿化成骨的数量、面积,以及新骨形成的方式,软组织清晰度,种植体骨结合等几方面,对比分析经三种染色方法染色的骨磨片和带种植体骨磨片,确定针对不同研究目的和修复方法的适合染色法.结果:对照3种染色方法的染色结果,发现:1、亚甲基蓝-酸性品红法比较适合于:(1)测量种植体与骨结合面积,(2)复合成骨材料修复骨大面积缺损后成骨的研究,(3)牙龈、骨膜、肌肉等软组织的研究.2、甲苯胺蓝染色法适合于骨缺损修复后新、旧骨的对比观察,以及新骨的数量.3、Goldner's三色法比较适合于骨缺损修复后新骨形成的过程观察.结论:通过对比甲苯胺蓝染色法,亚甲基蓝-酸性品红法及Goldner's三色法等三种染色方法在骨缺损修复,以及种植体与骨结合方面的应用.我们认为,要针对实验观察的对象、目的与结果来选择合适的染色方法.
关键词： 种植体 骨磨片 树脂包埋 非脱钙骨 甲苯胺蓝染色法 亚甲基蓝-酸性品红法 Goldner's三色法 -
急性硫酸二甲酯中毒肺损害
患者男，29岁，在从火车车皮内搬运桶装硫酸二甲酯3 h后晕倒，当时的主要症状为剧咳、流泪、眼及咽喉灼痛，伴气急，送医院后症状均略有缓解，但出现轻度发声困难，3 h后又突然气急，X线片证实患者出现两肺下部小片状阴影(肺水肿)。入院后经各种治疗后病情稳定，咳嗽、气急均逐步改善，第3天在征得患者同意后作肺穿刺活检，病理发现，细支气管及呼吸性细支气管上皮脱落，基底膜裸露，毛细血管扩张，少部分肺泡腔内有渗出液伴极少量炎症细胞。取少量肺组织作树脂包埋和超薄切片，电镜观察：肺泡上皮部分脱落，少量仍残存，但微绒毛消失，核染色质浓缩或边集或凝成块状，胞浆内线粒体变性、嵴消失，少数次级溶酶体形成，并形成大量脂滴，上皮细胞基底膜消失，个别肺泡腔内有渗出物(图1)。讨论? 硫酸二甲酯为油状略带刺激味液体，为工业常用原料，本品在运输过程中如容器破损等可大量挥发(特别在夏季)，可经呼吸道(亦可经皮肤或消化道)吸收，本品在呼吸道粘膜附着后可分解为硫酸及甲醇，毒作用更明显，如大量吸收，可并发实质脏器(肝、肾、心肌等)损害。
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树脂包埋半薄切片染色的改进及体会
[目的]树脂包埋半薄切片染色技术的改进及在病理诊断、细胞学细微结构研究等方面的应用.[方法]应用多色和甲苯胺蓝单一染色法对树脂包埋的半薄切片进行染色.[结果]多色染色因其有对比度,接近HE染色,可用于多种组织.甲苯胺蓝单一染色虽缺乏层次,没有对比度,但对神经组织及肌肉组织,由于其组织学特点,仍不失为首选.[结论]树脂包埋半薄切片多色染色,切片清晰、鲜艳颇似HE染色效果,具有高分辨的数种光学染色的综合特征,所显示的细胞学精细结构是任何好的石蜡切片不能比拟的.
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小鼠肾发育过程中增殖与凋亡相关蛋白在树脂切片上的表达
在石蜡切片或冷冻切片上做免疫组织化学实验经常遇到组织结构不全的问题.树脂包埋的组织可以展示保存良好的形态结构,但树脂包埋所采用的醛类固定剂可以和组织抗原交联,同时环氧树脂也掩盖了抗原的共价键,因此树脂切片上的抗原表达很弱[1].采用适当浓度的强碱溶液(2 g KOH溶于15ml甲醇与环氧丙烷溶液)蚀刻环氧树脂可以充分暴露与固定剂交叉结合并被树脂覆盖的抗原2-4],同时采用高温高压加热可以提高其抗原性[5].但是,在树脂切片上应用强碱溶液或许能极大地影响抗原、固定剂和树脂包埋成分的分子和空间结构.因此,对于形态学和病理学研究者来说,改善树脂切片的免疫显色是一项长期而困难的任务.
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未脱钙耳蜗组织树脂包埋与切片方法
耳蜗是一螺旋形骨管,与外壁的螺旋韧带相连,含有弹性纤维基膜、蜗轴的骨螺旋板等骨质结构.传统的制样方法是对耳蜗组织进行逐级脱钙[1,2],但脱钙的样品制备操作费时,难度较大,脱钙后组织成分有部分丢失,超微结构受到不同程度的损伤,尤其会导致膜性结构病理假象,给耳蜗样品观察带来困难.一些学者对未脱钙骨的制作技术进行改进[3-6],但对未脱钙耳蜗电镜技术探讨较少.本文在传统透射电镜样品制备基础上进行改进,省去脱钙操作步骤,采用未脱钙方法,以多聚甲醛与戊二醛的混合液灌注固定大鼠,增强固定液在耳蜗的渗透力,保证良好固定;用环氧树脂Epon混合包埋剂梯度浸透包埋、钻石刀连续大切片方法,取得较为满意的效果,现介绍如下.
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原发性开角型青光眼视神经乳头血管定量的研究
原发性开角型青光眼(POAG)是一种常见致盲眼病.已有的研究表明,原发性开角型青光眼患者视神经乳头局部血流量减少,到底是由于视乳头血管闭塞,抑或是血管形态改变所致,目前尚未见文献报道.本研究观察和测定了原发性开角型青光眼患者视神经乳头的血管形态、数量变化,探讨微循环障碍对青光眼所致视神经损害的影响和病理依据.取原发性开角型青光眼患者视神经乳头为病例组,正常人眼视神经乳头为对照组.视乳头标本经常规取材、固定,并用环氧树脂包埋,边续半薄切片(层厚1μm),HE染色.用计算机图像分析方法观测POAG患者和对照组视神经乳头的血管数量、管径,采用生物体视学方法测定血管的血管面积、血管密度和体积密度,对视神经乳头血管的数量、密度、管径和容量进行定量分析比较.
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培养细胞的免疫细胞化学操作体会
对培养的细胞进行免疫细胞化学反应,可以在培养皿内直接进行,亦可经树脂包埋后,在半薄切片上进行.本实验应用上述二种方法,对培养的大鼠内耳血管纹的组织细胞进行了免疫细胞化学显示.组织细胞处理:1)平皿培养和盖玻片上培养的大鼠内耳血管纹处组织细胞,经Bouin固定液固定4h,0.01Mol/L PBS浸洗,0.1%的Triton x-100处理20min;2)平皿培养的细胞经酶处理,离心收集,2%戊二醛固定液固定4h,经丙酮脱水与锇酸固定(-20℃)、树脂包埋、半薄切片.免疫细胞化学反应:上述处理的细胞或切片进行免疫细胞化学反应,其反应步骤如下:①3%H2O2 10min;②正常羊血清封闭,室温20min;③角蛋白抗血清1:1000;波形蛋白抗血清1:10 00,4℃,24h;④先后滴加生物素化羊抗兔IgG和ABC复合物,室温各孵育45 min;⑤用0.03%H2O2和0.05%DAB反应8～10min,终止反应 .反应步骤③～⑤过程中,每步骤后均用0.01Mol/L PBS,(pH7.3)清洗.切片经酒精脱水,二甲苯透明,树脂封片.平皿培养和盖玻片上培养的大鼠内耳切片上可见来自血管纹上皮细胞的新增生的边缘细胞, 角蛋白免疫细胞化学反应呈阳性显示;也可见来自于螺旋韧带的结缔组织细胞,波形蛋白免疫细胞化学反应呈阳性显示.用以上二种方法处理的细胞进行免疫细胞化学反应的操作过程比较:1)培养皿内直接进行免疫细胞化学反应效果好,但需要抗体多;如果是塑料平皿,培养的细胞不宜用二甲苯透明、封片,细胞进行高倍照像时有一定的困难;2)盖玻片进行免疫细胞化学反应效果好,需要抗体少,标本能完成脱水、透明、封片,高倍照像无困难;但盖玻片进行培养时,培养的细胞可能有选择性.对于半薄切片的免疫细胞化学反应,虽然实验操作较为复杂,但只要能较好保存抗原性,免疫细胞化学反应一般没有困难.根据本实验的比较分析,我们认为细胞在充分脱水时的低温处理对抗原的保存有重要意义.
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电镜树脂包埋液配方的选择与应用
用于透射电镜样品的包埋液,数年来一直延用几种固定的配方,即常用的812、国产树脂618、Spurr等等,各种包埋剂各有其优缺点.Spurr包埋剂:粘度低,浸透容易,包埋聚合时间短,硬度及韧性均很好,经免疫标记的样品,常用此液进行包埋.另外还可用于难以浸透、硬度高、致密性较高组织.但此包埋液价格昂贵,不宜作为常规的包埋液来使用.812包埋液:粘度低,韧性好,易切出较大的超薄切片,但组织包埋块易吸潮,不易保存 ,包埋液的价格也较高.国产树脂618:价格便宜,购买方便,组织块不易吸潮,保存方便,切割性能较好.但此包埋液粘度高,浸透速度缓慢,配制时不易搅拌均匀.根据以上常用的几种包埋液的优缺点,我室经数年的摸索,按自己的条件,重组了国产61 8树脂包埋液配方:618环氧树脂 5mlDDSA(十二碳烯基丁二酸酐) 2mlMNA(甲基内次甲基四氢邻苯二甲酸酐) 2.5mlDBP(苯二甲酸二丁酯) 1mlDMP-30(2-4-6-三(二甲氨基甲基)苯酚) 0.11ml该包埋液中的增塑剂DBP可根据季节的变化或组织的硬度进行适当的调整(冬季包埋时, DBP可增加至1.5ml,使包埋块的韧性增加).此配方的优点是:粘度降低,浸透力增强,聚合后的组织块颜色淡黄,硬度均等,韧性良好 ,切割性能较佳.经我室数年使用,对不易制片的眼球、耳蜗、皮肤、血管等组织,均取得了较好的超薄切片效果,现已成为我室的常规配方.
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免疫电镜技术在肾活检中的应用
肾活检标本中,多数是免 疫复合物介导的肾小球肾炎,通过免疫病理学方法检测肾小球内的免疫沉积物的性质和分布 ,对于终的病理诊断至关重要.免疫电镜检查对肾小球炎的病理诊断虽然不是常规方法, 但为了精确分析沉积于肾小球的抗原抗体复合物,免疫电镜仍为行之有效的手段.本文探讨 了肾活检标本的低温包埋及常规树脂包埋的胶体金标记的透射电镜方法.
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电镜半薄切片应用于光镜研究的探讨
电镜半薄切片通常用于电镜超薄切片前的定位观察,我们在定位观察时发现,由于切片薄,结构显示清晰,可用于光镜研究,其观察结果优于石蜡切片.多年来,我们已将电镜半薄切片应用于实验研究和研究生课题实验.方法:取材后将组织修为1立方毫米左右,常规电镜样品处理, 环氧树脂618包埋,修块,LKBV型超薄切片机切片,切片厚度1微米,脱树脂后,苏木精染色,H*E或甲苯胺兰染色,37℃温箱烤干,封片,观察.结果:苏木精染色显示 ,细胞核呈紫兰色,胞浆淡兰色;H*E染色显示,细胞核为紫兰色,细胞质淡粉红色,但伊红染色较石蜡切片差;甲苯胺兰染色显示,胞核,胞浆均为淡兰色,细胞结构均清晰.讨论:1.电镜半薄切片薄,组织结构重叠少,故结构显示清晰,常常可以观察到石蜡切片不易显示的结构.2.树脂包埋,使包埋块具有较好的韧性,同时使用锋利的玻璃刀或钻石刀切片,能够切出较薄的切片.3.由于使用树脂包埋,常影响H*E及其他方法的染色,故通常在染色前用氢氧化钾溶液脱树脂,但在我们长期工作实践中观察到,切片经过氢氧化钾脱树脂后,虽有利于苏木精着色,但由于染色前使用了强碱溶液,经流水冲洗后,仍然严重影响了伊红的上色,故我们选用复制伊红染色,得到较好结果.4.电镜包埋块较小,观察范围较为局限,但仍不失为弥补石蜡切片不足的一种手段.且在电镜前定位切片为常规,不增加额外的实验工作负担.
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带金属种植体的牙周组织制片技术
目的:介绍带金属种植体的组织制片技术.方法:采用树脂包埋,组织磨片的技术.结果:方法简单:材料易寻:结果优良.结论:该方法简单,磨片效果优良.
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成人连续彩色水平断层树脂包埋标本的研制
目的 研究成人连续彩色水平断层树脂包埋标本的制作方法.方法 利用树脂对成人水平断层标本连续切片进行染色、包埋、打磨、抛光等程序,制作出一套成人连续彩色水平断层树脂包埋解剖标本.结果 经染色后的树脂包埋断层标本透明、精致,便于长久保存,能更好地满足医学教育和科研的需要,是一种新型先进的人体解剖学标本保存技术.结论 成人连续彩色水平断层树脂包埋标本技术能制作更高质量的人体标本,解决水平断层标本的保存难题,长期保存颜色不变,应用前景广阔.
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树脂(HEMA)包埋制片技术对软组织的应用探讨
树脂(HEMA)包埋制片技术早期只用于电镜观察[1],目前在国内仅用于骨髓活检[2]、肾穿组织[3].我们试应用改进的树脂包理方法对临床活检、尸检等处理后的组织标本进行包埋、制片、染色试验,取得良好效果.此项技术在形态学研究及临床诊断中可替代传统的石蜡包埋技术,具有广泛的临床诊断及基础医学研究应用前景.本文就改进的树脂包埋制片技术方法的应用进行探讨.
