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不育患者精子头部超微结构变化的电镜观察
目的 观察精子头部的正常和异常超微结构,依据两者的差异,探讨精子头部损伤引起不育的机理.方法 取正常人和不育患者精子,在光学显微镜观察后,制备冷冻蚀刻复型膜和超薄切片样品,在透射电镜下观察并拍照.结果 冷冻蚀刻复型膜观察可见正常精子头是由质膜包裹的细胞核和顶体构成,分前中后三区;细胞核染色质为螺旋状,规则排列为8~11行;核膜孔位于后头区,有140~180个,分6排,呈六角形排列.异常精子头表现为质膜破裂、不光滑,膜蛋白变性、脱落、凝聚,细胞核内出现大空洞,染色质断裂、紊乱,核膜孔数量减少、排列紊乱.结论 本研究提供了正常及异常精子头部的各种超微结构表现,可作为研究精子膜结构及不育机理的参考.正常精子头的细胞核呈高度有序结构,而异常精子头部有不同程度损伤;冷冻蚀刻复型膜技术是在超低温,高真空条件下将质膜从双分子层的疏水区劈开,在透射电镜下清晰地观察到E面和F面的结构和膜蛋白数量分布等,是显示精子膜结构和膜损伤的佳技术手段.
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不育症患者精子尾部超微结构改变的观察
目的 观察男性不育患者精子尾部超微结构改变,探讨精子运动障碍导致男性不育的机理. 方法 选择男性不育精液,制备精子超薄切片、冷冻蚀刻复型膜和表面喷塗样品,在透射电子显微镜和扫描电子显微镜下观察. 结果 1.精子尾部线粒体排列紊乱,外膜内嵴破裂;2.密纤维分离,密纤维与轴丝二联管颠倒,轴丝二联管缺损,放射辐、近邻连接断裂,内外动力臂缺损;3.膜结构凹凸不平,膜蛋白脱落或凝聚等. 结论 精子尾部中段线粒体结构破坏是精子丧失运动能力的关键;精子尾部轴丝密纤维等病理改变不能有效利用ATP,导致精子死亡;不育患者精子均出现磷脂双分子层结构改变和膜蛋白变性造成的脱落和凝聚.
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Spurr树脂低黏度包埋剂在电镜制样中的应用
电镜制样由于步骤多,周期长,无论哪个环节有问题,都会影响效果,其中包埋剂是重要环节之一.目前普遍采用的Epon812环氧树脂包埋剂,由于易吸潮,尤其是夏季,很难制作出令人满意的超薄切片.Spurr树脂低黏度包埋剂,由于黏度低,渗透组织快,所需聚合时间短,大大缩短了制样周期.
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电镜超薄切片常见问题及改进方法
电镜制样技术中超薄切片是中心环节之一,在此过程中,常会发生切片缺陷,如颤痕、刀痕、空洞、厚薄不均等情况,影响切片质量,本文结合实际工作经验,就超薄切片过程中遇到的问题进行探讨.
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阴道宫颈乳头状瘤的分子生物学与超微结构的研究
以往的研究工作证明人乳头状病毒(HPV)与中国妇女宫颈乳头状瘤的生长有密切关系.为深入研究其发病机制,我们对外阴痒、白带多就诊体检发现阴道下1/3及宫颈有异常突起者病理及核酸分子杂交技术证实为HPV感染的16例标本进行了PCR检测及超微结构的观察,结果如下:1 材料与方法16例来自门诊新鲜标本,以2.5%戊二醛和1%锇酸双固定,Epon-812包埋,超薄切片,铀-铅双重染色,PHILPS-CM10透射电镜观察.2 结果与讨论2.1 PCR检测用PCA技术检测标本16例,14例标本HPV阳性,占87.5%.2.2 超微结构观察在14例HPV阳性标本中发现了基底细胞核分裂相、基底细胞内存在成对中心粒,基底细胞和棘细胞层增厚,伴核增大,核仁增多,可见凹空细胞,核有明显改变,早期核增大,核仁增多.此后72.3%的核仁消失,常染色质丰富.82.18%染色质疏松,72.3%的阴道尖锐湿疣病例中发现了染色质之间颗粒及染色质周围颗粒、染色质之间颗粒呈棱角状,直径约15~35nm.PCA检测阳性者还可见核小体,阴性者未发现.随着核染色质的浓集并周边化,核固缩,在此类细胞中可见大量密集的染色质之间颗粒和染色质周围颗粒,胞质空化明显,形成典型的凹突细胞,凹突细胞中可见线粒体及内质网肿胀,脊消失,后融合成一些外围有包膜的大泡,充斥于胞质内,使胞质明显空化,成为典型的凹突细胞,典型的胞质空化在中表层细胞中常见.14例阴道尖锐湿疣标本中46%可见棘细胞质空化,另外在5例宫颈尖锐湿疣基底细胞和1例阴道尖锐湿疣副基底细胞中发现了大量直径在45~55nm边缘锐利但大小不规则的病毒样颗粒.
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轮状病毒疫苗的种类及安全性问题
1概述轮状病毒(rotavirus,RV)于1973年由澳大利亚学者Bishop首先在胃肠炎患者的十二指肠超薄切片中发现,从而确定了人轮状病毒与胃肠炎的关系,其重要性受到生物界及医学界的广泛重视.轮状病毒是世界范围内引起婴幼儿严重腹泻的主要原因,并成为严重的公共卫生问题,特别是在发展中国家.在世界各国,90%以上的婴幼儿在3岁之前均受到了RV的感染,在5岁以下腹泻住院患儿中,RV感染病例占20%~70%,5岁以上的儿童几乎全都感染过RV.
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晶状体溶解性青光眼房水浮游细胞的电镜观察
应用电子显微镜观察房水中各种浮游细胞,有助于从超微水平上深入研究相应眼病的发病机制,进而提高其诊断和治疗水平.由于房水中细胞数量少,且处于浮游状态,故观察困难.为了解房水中细胞的超微结构,我们将晶状体溶解性青光眼患者房水中的浮游细胞制作超薄切片,采用透射电镜观察,现将结果报告如下.
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生物组织细胞连续切片三维重建的研究进展
综述了生物组织细胞三维重建技术的方法,重点讨论了连续超薄切片的三维重建技术及其在生物医学研究中的应用前景.
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透射电镜观察特定原位培养细胞样品的制备
通过透射电镜观察体外培养细胞,早的方法是将细胞培养在载玻片上,按照顶扣法制备样品即可得到满意的结果[1].
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CD3AK细胞系的超微结构观察
目的观察CD3AK细胞系的超微结构及其与杀伤功能相关的特征.方法用透射电镜观察有代表性的细胞的超薄切片.结果胞膜较完整,有少量突起,外形不规则,周围未见支原体污染.胞质中有膜泡分泌颗粒;大量游离核糖体,少量脂滴和线粒体;未见溶酶体.有的细胞胞质和细胞器较少.核形状不规则,常有凹陷,核染色质聚集成大块状.结论所建CD3AK细胞系透射电镜下的超微结构具正常T淋巴细胞的特征,胞质中有与杀伤靶细胞相关的颗粒结构.
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急性硫酸二甲酯中毒肺损害
患者男,29岁,在从火车车皮内搬运桶装硫酸二甲酯3 h后晕倒,当时的主要症状为剧咳、流泪、眼及咽喉灼痛,伴气急,送医院后症状均略有缓解,但出现轻度发声困难,3 h后又突然气急,X线片证实患者出现两肺下部小片状阴影(肺水肿)。入院后经各种治疗后病情稳定,咳嗽、气急均逐步改善,第3天在征得患者同意后作肺穿刺活检,病理发现,细支气管及呼吸性细支气管上皮脱落,基底膜裸露,毛细血管扩张,少部分肺泡腔内有渗出液伴极少量炎症细胞。取少量肺组织作树脂包埋和超薄切片,电镜观察:肺泡上皮部分脱落,少量仍残存,但微绒毛消失,核染色质浓缩或边集或凝成块状,胞浆内线粒体变性、嵴消失,少数次级溶酶体形成,并形成大量脂滴,上皮细胞基底膜消失,个别肺泡腔内有渗出物(图1)。讨论? 硫酸二甲酯为油状略带刺激味液体,为工业常用原料,本品在运输过程中如容器破损等可大量挥发(特别在夏季),可经呼吸道(亦可经皮肤或消化道)吸收,本品在呼吸道粘膜附着后可分解为硫酸及甲醇,毒作用更明显,如大量吸收,可并发实质脏器(肝、肾、心肌等)损害。
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培养细胞的超薄切片技术探讨
目的:探讨培养细胞的电镜良好制样和超薄切片方法.方法:乳腺癌细胞系MB-231培养后分成3组:消化离心组、刮除离心组和原位包埋组,比较培养细胞的超微结构特征.结果:原位包埋方法的超薄切片可以清楚地显现细胞为多角形梭形,细胞连接保持良好.其余两组细胞呈圆形、椭圆形,大部分细胞细胞间连接被破坏,分散分布.结论:原位包埋和单层细胞超薄切片方法是电镜下观察培养细胞的值得推荐的方法.
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非生物标本的电镜样品制备及超切技术的探讨
目的:探讨非生物标本的电镜样品制备及超薄切片技术.方法:选择无色透明纤维、黑色纤维及无色透明薄膜等材料,进行脱水、环氧树脂包埋、超薄切片.结果:切出满意切片,并在电镜下拍摄出高质量的照片.结论:根据非生物标本的特性成功地进行了电镜样品制备及超薄切片,使材料科学的超微结构研究成为可能.
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电镜超薄切片技术实践的探讨
在21世纪的今天,电子显微镜技术早已在工业、农业、地矿、环境科学尤其在生物医学、计量医学、远程病理诊断等方面得到普遍的应用.
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连续半薄切片技术在淋巴管学研究中的应用
70年代末森坚志[1],提出采用色素穿刺注射法、加墨汁的硝酸银溶液局部动脉注入法、加墨汁生理盐水灌流的环氧树脂半薄切片法,确认淋巴管后超薄切片电镜观察来综合研究器官内淋巴管.本文就连续半薄切片技术应用于淋巴管研究总结如下.
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多组织块集中树脂包埋法在透射电镜基础制样中的应用
目的 探讨多组织块集中树脂包埋法在透射电镜基础制样中的应用效果.方法 选取我院2011年6月-2012年5月临床穿刺活检标本30份,其中肝脏标本、肾脏标本各15份,常规电镜取材.分为3组,实验1组采用24h多组织块集中树脂包埋微波快速制样,实验2组采用24h分别(单一)树脂包埋微波快速制样,对照组采用72 h常规分别(单一)树脂包埋方法制样.将同一标本切成5块约1 mm3组织块,将3块平行排列放入实验1组胶囊中,另2块分别放入实验2组、对照组胶囊中,依次进行修块、切片、捞片、铀铅染色后上镜观察.结果 实验1组、实验2组与对照组比较,切片超微结构均保存较好,且染色对比反差度好;染色后电镜对比观察实验1组、实验2组细胞器保存良好,胞膜、核膜、微绒毛等细胞膜结构连结清晰,切片连续成带,延展性能好.实验1组观察范围较实验2组、对照组更为广泛,切面更完全.结论 多组织块集中树脂包埋法用于透射电镜基础制样切片连续性好,制样时间明显缩短.
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用于超微病理诊断样品的几种制备方法
超微病理诊断是对光镜诊断加以补充和说明,因而日益引起临床工作者的重视,如无色素性黑色素瘤靠组织学检查难以作出诊断,如果做电镜检查,由于在肿瘤细胞内能证实贫于色素沉着或无色素沉着小的黑素体,可以确诊.而送检标本的来源条件各不同,如有些标本已制成石蜡块或石蜡切片,这就要求我们把由诊断价值的信息保留下来,制成超薄切片,供电镜观察诊断.
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刺五加叶片的透射电镜观察
①目的 观察刺五加叶片的亚显微结构,以期进一步探讨亚显微结构与刺五加苷含量的关系.②方法 以3年生野生刺五加叶为材料,采用超薄切片技术制备样品,并于透射电子显微镜下观察细胞结构.③结果 刺五加叶肉细胞中叶绿体、液泡、线粒体、细胞核等细胞器结构完整,清晰,刺五加叶片的超薄切片可有效地用于亚显微结构的观察.④结论 试验中观察到清晰的刺五加叶片亚显微结构,为深入研究细胞的组织结构和刺五加的鉴别提供了新依据.
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微波辐射技术在组织切片制作中的应用体会
欲观察细胞和组织器官的微细结构,必须制作普通切片及超薄切片,以便在光学显微镜或电镜下进行观察,因此切片制作是教学与科研中必不可少的技术方法.目前为了加快组织切片制作速度,并保证切片的质量,使切片染色达到色泽鲜艳、纯正(红、兰对比鲜明)和清晰[1、2].我们使用了微波技术,并取得了良好效果,现在扼要总结一下我们使用微波技术的体会和注意事项.
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H-E染色在环氧树脂半薄切片中的应用
半薄切片是进行超薄切片前的必要环节,有助于准确定位.常用的染色方法有甲苯胺蓝、吉姆萨染色法等.这些染色单一,仅能提供组织细胞着色深浅不同的蓝色,对特殊组织与特殊结构则不能选择性的染色.若经H-E染色则可提供更为详细的结构,弥补石腊切片的不足,且结构介于光镜和电镜之间,可应用到临床中,提高病理诊断水平.为此,我们在实验工作中摸索出改进的苏木素、伊红(H-E)染色法用于半薄切片,清晰地显示组织结构,提高切片分辨率.现介绍如下: