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幽门螺杆菌cag1基因缺陷株的构建与鉴定
目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)细胞毒素相关基因致病岛(cytotoxin associated gene pathogenicity island,cag PAI)中的第1个编码基因hp0520/cag1基因缺陷株,为进一步研究cag1基因在cag PAI中的功能奠定基础.方法:使用同源重组技术,通过PCR扩增出cag1基因两侧同源臂序列,酶切纯化后分别连接于带卡那霉素抗性标志的载体两端,构建成cag1基因自杀质粒.将该质粒通过电穿孔导入受体野生株中,通过抗性筛选与PCR验证得到cag1基因缺陷株,与人胃上皮GES-1细胞共培养后,与野生株比较,观察细胞形态变化.结果:成功敲除H.pylori cag1基因,获得cag1基因缺陷株;与野生株相比,cag1基因缺陷株破坏细胞的能力降低.结论:成功获得幽门螺杆菌cag1基因缺陷株;cag1基因缺失后H.pylori对GES-1细胞的毒力减弱.
关键词: 幽门螺杆菌 细胞毒素相关基因致病岛 自杀质粒 基因缺陷 cag1 -
胰岛素受体基因17外显子点突变的测得
目的:阐述胰岛素受体基因缺陷与胰岛素抵抗发生机制间的方法.方法:运用PCR-单链构型多态性技术,对9个黑棘皮病家系(计9例患者,23例他们的一级亲属)进行了该基因17外显子筛查工作,对其中带型异常者进行了DNA直接测序确认.结果:发现了3个既往未报道过的错义突变和5个沉默多态性(slient polymorphism),即杂合子突变Val983→Met,纯合突变Gln1004→Lys、纯合突变Gly1022→Lys、Pro980(CCA→CCC)、Leu1002(CTG)→CTT)、Gln1004(CAA→CAG)、Gly1008(GGC→GGT)、Glu1034(GAG→GAA).结论:上述突变可能是造成黑棘皮病患者胰岛素抵抗的主要原因.
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高脂血症和血脂
高脂血症是一种血脂代谢紊乱疾病,和高血压一样是终身性疾病.高脂血症是指血脂水平过高,可直接引起一些严重危害人体健康的疾病,如动脉粥样硬化、冠心病、胰腺炎等.高脂血症可分为原发性和继发性两类.原发性与先天性和遗传有关,是由于单基因缺陷或多基因缺陷,使参与脂蛋白转运和代谢的受体、酶或载脂蛋白异常所致,或由于环境因素(饮食、营养、药物)和通过未知的机制而致.继发性多发生于代谢性紊乱疾病(糖尿病、高血压、黏液性水肿、甲状腺功能低下、肥胖、肝肾疾病、肾上腺皮质功能亢进),或与其他因素年龄、性别、季节、饮酒、吸烟、饮食、体力活动、精神紧张、情绪活动等有关.
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眼睑下垂可能意味着女性不育
几个国家的医生联合进行的一项研究表明,年轻女性的常见不育是一种基因缺陷造成的,这种基因缺陷还会造成眼睑异常。意大利、法国、比利时和美国的医生指出,原因看来是名为FOXL2的基因有缺陷,该基因位于第三对染色体中。这份研究报告指出,这种基因缺陷造成的问题包括卵巢功能衰退和面部缺陷,即一只眼睛的眼睑下垂,眉毛始终呈弓形。这些医生经过进一步研究后发现,在有女性卵巢早衰和眼睑下垂现象的4个意大利家庭中,都存在FOXL2基因缺陷。他们对老鼠进行了试验,发现FOXL2控制着一种蛋白质,这种蛋白质对眼睑的初期发育和保持卵巢囊状卵泡至关重要。
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肺部疾病基因/免疫治疗的新概念
肺脏有气道和血管,具备基因治疗容易到达的靶位.西方国家的白人中,α1抗胰蛋白酶缺乏症和囊性纤维化是两种常见的致死性单基因缺陷所致的肺部疾患.因此这两个疾病成为肺部疾病基因治疗的先导.我省居民中,呼吸系统疾病死亡居总死因的第一位[1].说明重视呼吸系疾病的防治,开发新疗法十分重要.
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获得性长Q-T间期综合征9例临床分析
长Q-T间期综合征可分先天性和获得性两类,先天性与基因缺陷有关,获得性则常由代谢异常、药物及某些疾病引起[1],常伴尖端扭转型室性心动过速,严重者可危及生命.本文报道我院收治的9例获得性长Q-T间期综合征的临床资料,以探讨可能的防治措施.
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日本与HCV感染有关的HCC/病毒性致肝癌作用的分子机理/鼠结直肠癌粘蛋白Muc2基因缺陷/术前放化疗能提高直肠癌手术保肛率
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获得性长QT间期综合征27例分析
长QT间期综合征可分为先天性与获得性两种,先天性与基因缺陷有关,获得性则常有代谢异常、药物及某些疾病引起,常伴尖端扭转型室性心动过速(TdP),严重者可危及生命[1].我们对获得性长QT间期综合征的临床资料进行分析,以明确其临床特征及防治措施,供临床医师参考.
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获得性长Q-T间期综合征12例分析
长Q-T间期综合征可分为先天性长Q-T间期综合征与获得性长Q-T间期综合征两种,先天性长Q-T间期综合征与基因缺陷有关,获得性则常由代谢异常、药物及某些疾病引起,常伴尖端扭转型室性心动过速(TdP),严重者可危及生命[1].
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Ki-67与肺癌关系的研究进展
近20年来,尽管在禁烟的努力和治疗的进步下,男性因肺癌死亡的绝对数量仍在持续增长.同时女性因烟雾暴露而产生的肺癌死亡率也有所升高,肺癌仍旧是我国发病率和死亡率高的男性肿瘤.肺癌的发生与多种因素有关,细胞增殖和凋亡平衡对于维持细胞稳态及组织形态是至关重要的,平衡的破坏能为存在基因缺陷的细胞提供生存优势,促使基因突变的积聚和细胞的恶性转化,终导致肿瘤的发生和进展.细胞核增殖抗原Ki-67能代表细胞增生活性, Ki-67与肺癌的发生、进展和预后有十分密切的关系,本文就Ki-67及其在肺癌中的研究进展综述如下.
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妊娠期肝内胆汁淤积症的病因学研究进展
妊娠期肝内胆汁淤积症(Intrahepatic cholestasis of pregnan-cy,ICP)是发生在妊娠晚期特有的一种不明原因的可逆性胆汁淤积.可导致孕妇肝功能异常及血中胆汁酸水平升高,临床上出现搔痒、黄疸等症状,但对胎儿影响远远超过孕妇,可引起胎儿宫内窘迫、早产及死胎.目前,ICP的病因学机理仍不清楚,多数研究认为激素、遗传和环境等因素起重要作用.近年随着分子生物学技术的迅速发展,一些因基因缺陷导致的遗传性肝内胆汁淤积性疾病的分子机理正逐渐阐明[1,2],极大地促进了ICP的遗传机理研究的进展.
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基于CRISPRR/Cas9技术的弓形虫rop16Ⅰ/Ⅲ缺陷虫株的构建及毒力鉴定
目的 构建并鉴定弓形虫RH株rop16Ⅰ/Ⅲ缺陷虫株.方法 利用CRISPR-Cas9技术进行构建基因缺陷虫株.运用E-CRISPR数据库设计gRNA,并使用定点突变试剂盒突变pSAG1∷Cas9-U6∷sgUPRT质粒上的gRNA,构建pSAG1∷Cas9-U6∷sgrop16质粒.此外将rop16上游序列、乙胺嘧啶抗性基因、rop16下游序列3个片段连接成donorDNA,克隆于pUC19质粒上,PCR扩增donor DNA片段.pSAG1∷Cas9-U6∷sgrop16质粒和donor DNA片段电穿孔转染弓形虫,电转后悬液接种于HFF-1细胞中,3μmol/L乙胺嘧啶筛选电转后的虫株.PCR和Western blotting鉴定克隆化筛选虫株.吉姆萨染色分别比较RH株和RH△rop16株对HFF-1细胞的增殖与入侵.并比较RH株和RH△roop16株分别感染昆明小鼠后小鼠的生存和死亡率.结果 经测序比对,成功构建了pSAG1∷Cas9-U6∷sgrop16质粒和pUC19-donorDNA质粒.PCR鉴定结果显示,DHFR编码(编码乙胺嘧啶抗性基因)序列成功插入至靶点位置,Western blotting分析结果未见RH△rop16株有Rop16Ⅰ/Ⅲ蛋白表达.吉姆萨染色后计数结果表明,RH株感染的细胞内每个纳虫泡内速殖子的平均数显著高于RH△rop16虫株.毒力试验结果显示,RH株感染的小鼠在第7d即出现死亡,而rop16Ⅰ/Ⅲ缺陷株在第9d出现死亡,但两种弓形虫株感染动物在第10 d均全部死亡,两组间无统计学差异.结论 利用CRISPR-Cas9技术成功构建了rop16Ⅰ/Ⅲ缺陷的弓形虫RH虫株,rop16Ⅰ/Ⅲ基因敲除对弓形虫RH株毒力无明显影响.
关键词: 刚地弓形虫 ROP16Ⅰ/Ⅲ CRISPR/Cas9 RH株 基因缺陷 -
SHOX基因的研究进展
生长发育是遗传因子、营养条件、环境等多因素参与、诸多基因共同作用的结果,早期研究已表明身高的遗传决定性大于50%.目前,已发现能够影响儿童身高的基因有:多巴胺D2受体基因,维生素D受体基因,I型胶原α1基因,雌激素受体α基因,黄体激素基因,垂体特异性同源基因,生长激素释放激素受体,胰岛素样生长因子1受体基因等.
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哪些孕妇容易怀畸形儿
造成胎儿畸形的原因主要有两种:一种是遗传基因缺陷,属近亲婚配或有家族遗传性疾病者婚配易发生此类问题;另一种是非遗传性基因缺陷,往往是由于孕妇在怀孕期间对致畸因素的忽视所致.这一类型的孕妇主要有以下7种:
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苯丙酮尿症筛查误差原因的分析
苯丙酮尿症(PKU),是指苯丙氨酸羟化酶基因缺陷或基因突变导致了苯丙氨酸代谢障碍,使苯丙氨酸在体内蓄积,从而影响了大脑及神经系统的发育,造成不可逆的智力障碍.它是一种可以早期诊断和早期治疗的先天性氨基酸代谢病.为此我筛查中心从1999年9月在全市泛围内开展了新生儿苯丙酮尿症的筛查,对优生优育,提高我市的人口素质具有重要意义.
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血友病A/B的基因诊断
血友病(hemophilia)分为血友病A、B两型.血友病A是由凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因缺陷导致血浆FⅧ含量减少或功能异常所致;血友病B是由凝血因子Ⅸ(factor Ⅸ,FⅨ)基因缺陷导致血浆FⅨ含量减少或功能异常所致.两型血友病都是X染色体性连锁隐性遗传病,临床上是以自发性或轻微外伤后出血难止为特征的出血性疾病.
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临床基因治疗存在的问题与研究进展
基因治疗是指把遗传物质(DNA或RNA)引入到患者的细胞中,以达到治疗疾病的目的,它是伴随着基因工程技术和分子生物学的发展而逐渐形成的一种新型"分子治疗"手段.1990年,美国国立卫生研究院(NIH)的Freuch Anderson [1]博士进行了世界上第一个真正意义上的基因治疗临床试验,他成功地用ADA(腺苷酸脱氨酶)基因治疗了一位因ADA基因缺陷导致严重免疫缺损(severe combined immunodeficiency,SCID)的4岁女孩,从而在全世界掀起了基因治疗的研究热潮.然而近年来,随着基因治疗导致严重并发症的报道及其相关机制的研究的深入,表明在认识其巨大发展潜力的同时,还应正确审视基因治疗的局限性及可能存在的风险,并加强对其临床研究的审批和监管力度.
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肝癌基因治疗进展
原发性肝癌(Primary liver cancer, PLC)是世界范围内常见的恶性肿瘤之一, 以我国和亚非地区 发病率高.基因治疗是指将人的正常基因或有治疗作用的基因以一定的方式导入人体靶细胞,来纠正基因缺陷或通过药物等手段来逆转某些基因发生改变,从而达到治疗疾病的目的.近年来,随着分子生物学技术的发展,基因治疗成为治疗肝癌的新方法,本文就近年来肝癌基因治疗研究进行综述.
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复发性流产夫妇的染色体异常分析
自然流产连续发生2次或2次以上为复发性流产,其发生与遗传基因缺陷、解剖异常、内分泌紊乱、全身性疾病和免疫、环境因素有关,其中夫妇双方的染色体异常是主要原因之一.2000年1月~2008年12月,我们通过对1 328对(2 656例)复发性流产夫妇进行染色体核型分析,以探讨复发性流产与染色体异常的关系.
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红斑肢痛症治验举隅
红斑肢痛症(rythromelalgia)是一种少见的血管性皮肤病,病因不明,可为原发性,也可继发于其他疾病.原发性患者多在儿童期发病.传统的治疗效果不佳,病情一般会伴随患者终身.近有报道北京某遗传性皮肤课题组证明,原发性红斑肢痛症是由基因缺陷所导致.