结直肠癌患者血清血管生成素-2含量检测的临床意义

血管生成在肿瘤发生、发展中具有重要作用,不仅为肿瘤生长提供营养物质,也是重要的转移方式,其活跃程度与肿瘤的浸润转移及预后密切相关.新近发现的血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)及其受体系统足调节肿瘤血管生成的重要途径.研究证实,不同来源的肿瘤组织及肿瘤细胞系均有Ang-2 mRNA的表达,且特异表达于肿瘤边缘的血管重建区,参与肿瘤血管新生的起始及延续过程,促进肿瘤生长及转移[1].Ang-2在结直肠癌组织中亦显著高表达,与其病理分期、预后密切相关2-4.检测并探讨血清Ang-2含量变化与结直肠癌关系的国内外研究报道甚少,本研究对此进行了相关研究分析.

血管生成素-2在淋巴管新生中的调节作用

淋巴管的新生或再生是较常见的,见于多种疾病,如慢性淋巴水肿、组织创伤、器官移植及肿瘤生长和转移.由于淋巴管的再生机理至今不明,目前对于病理性淋巴管生长相关的病症几乎没有治疗和控制手段.因此,阐明淋巴管的生长机理是临床亟待解决的难题.

血管生成素-1在高氧诱导新生鼠支气管肺发育不良的表达及与肺发育的关系

目的：探讨血管生成素（Ang-1）在高氧诱导支气管肺发育不良（BDP）新生大鼠中的表达。方法48只生后2~3日龄的新生大鼠随机分为高氧组和对照组，每组24只，分别置于高氧（氧浓度≥95%）和空气中持续喂养；于高氧暴露第1、3、7天，光镜下观察大鼠肺组织形态结构变化，并采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法分别检测大鼠肺组织中Ang-1 mRNA和蛋白表达水平。结果随着高氧暴露时间延长，光镜下高氧组逐渐表现出肺组织发育不良、肺泡结构简单化、肺泡数目减少和肺微血管发育受阻等病理改变。高氧暴露第7天，高氧组的Ang-1 mRNA和蛋白相对表达为0.33±0.18和0.20±0.07，低于对照组的0.83±0.46和0.57±0.44，差异有统计学意义（P均<0.05）。结论 Ang-1是肺血管发育过程中的重要调节因子，参与了BPD病理发生。

人血管生成素-1对血管内皮细胞增殖及凋亡影响的研究

目的:探讨人血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang-1)对人脐静脉内皮细胞(human umbilican vein endothelia cell,HUVEC)增殖和凋亡的影响,以进一步研究其生物学作用及其在肿瘤发生中的作用机制.方法:构建pcDNA3.1-V5-HisC-Ang-1真核表达载体,并瞬时转染293细胞;取新生儿脐带经胶原酶消化等方法分离培养HUVEC;分别通过MTT比色和细胞计数法,分析Ang-1瞬时转染上清对HUVEC增殖的影响;通过流式细胞仪分析在血浆饥饿实验条件下,Ang-1对HUVEC凋亡的影响.结果:成功克隆了Ang-1基因,构建了其正义真核表达载体,并在293细胞中瞬时表达;成功进行了HUVEC的原代分离及传代培养;MTT法检测HUVEC增殖结果:只加培养液组、加空载体转染上清组、加Ang-1转染上清组HUVEC OD490值分别为0.36±0.11,0.40±0.03,0.68±0.10(P＜0.05);细胞计数法检测结果依次为:(10.13±2.06)×104,(8.7±1.73)×104,(15.03±1.98)×104(P＜0.05).流式细胞仪检测HUVEC凋亡率依次为:21%,19%和6%.结论:Ang-1能显著促进血管内皮细胞体外增殖,抑制血浆饥饿时HUVEC的凋亡.

EGF-Ang融合蛋白的构建、表达及活性研究

目的:构建由人表皮生长因子(epidermal growthfactor,EGF)和人血管生成素(angiogenin,Ang)组成的人源化的融合蛋白,并检测其对肿瘤细胞的靶向杀伤能力.方法:利用基因工程技术将EGF和Ang基因连接起来,克隆到高效表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pEGF-Ang,并在大肠杆菌中表达该融合蛋白(EGF-Ang).经DEAE-Sepharose FF阴离子交换柱层析纯化后,用MTT法检测复性蛋白的细胞毒性.结果:SDS-PAGE和薄层扫描分析表明外源蛋白的表达量占菌体裂解蛋白总量的18.6%.细胞活性检测表明EGF-Ang重组蛋白能明显地抑制Hep2细胞的生长,而不影响MA104细胞的正常生长.结论:融合蛋白EGF-Ang在体外对过度表达EGFR的Hep2细胞具有明显的杀伤作用.

血管生成素及其在肿瘤血管新生中的作用

血管生成素是新近发现的一个与血管新生密切相关的蛋白家族,其共同受体是Tie2.由于Ang1和Ang2在体内具有与VEGF共同调节生理性和病理性血管新生的功能,其研究进展受到广泛关注.本文综述了血管生成素家族中主要成员Ang1,Ang2,Ang3,Ang4等在克隆、生化性质,血管生成素受体Tie2在信号转导中的作用,血管生成素在生理发育和血管新生中的作用等方面的研究进展.

血管生成素是否可作为口腔鳞癌的预后指标?

高糖和甲基乙二醛对人脐静脉内皮细胞Ang-Tie2信号链表达的影响

目的 观察高浓度葡萄糖对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成素2(Ang2)和酪氨酸激酶2受体(Tie2)表达的影响,探讨腹膜透析患者腹膜血管新生的可能机制.方法 分别以4.25%葡萄糖(高糖组)、4.25%甘露醇(甘露醇组)和800 μmol/L葡萄糖降解产物甲基乙二醛(MGO)(MGO组)对体外培养的HUVECs进行干预,设立空白对照组.以MTT比色法测定的D(490 nm)比较各组HUVECs干预后12、24、48 h时点的细胞增殖情况;分别采用Real-Time PCR技术、ELISA法和Western blotting法检测各组HUVECs中Ang2和Tie2 mRNA表达、细胞培养上清液中Ang2分泌量及HUVECs中Tie2蛋白的表达.结果 高糖组、甘露醇组和MGO组HUVECs干预后12 h时点的D(490 nm)均明显高于空白对照组(P＜0.05),干预后24 b时点的D(490 nm)则显著低于空白对照组(P＜0.05).与空白对照组比较,高糖组、甘露醇组和MGO组HUVECs中Ang2 mRNA表达均明显上调,高糖组和甘露醇组细胞培养上清液中Ang2分泌量均显著增加(P＜0.05),MGO组细胞培养上清液中Ang2分泌量则明显减少(P＜0.05).高糖组、甘露醇组和MGO组HUVECs中Tie2 mRNA和蛋白表达均显著低于空白对照组(P＜0.05).结论 透析液中的高浓度葡萄糖可能通过刺激内皮细胞增殖和上调Ang2表达而促进腹膜血管新生;葡萄糖具有独立于其高渗透压之外的促血管新生作用.

黄芪对糖尿病大鼠肾组织血管生成素表达的影响

目的 探讨黄芪对糖尿病大鼠肾组织中血管生成素(Ang)及其受体Tie-2和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响. 方法 18只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组和糖尿病黄芪治疗组.实时PCR和免疫组化法分别检测3组大鼠肾组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2和VEGF的mRNA和蛋白表达. 结果 与正常对照组比较,糖尿病组大鼠肾组织VEGF mRNA以及VEGF、Ang-2和Tie-2蛋白表达明显升高(P＜0.01);与糖尿病组大鼠比较,糖尿病黄芪治疗组大鼠肾组织VEGF mRNA表达显著升高,而Tie-2蛋白表达显著下调(P＜0.01),两组间Ang-1和Ang-2的mRNA和蛋白表达未见统计学差异(P＞0.05). 结论 黄芪对糖尿病大鼠肾组织Ang表达的调节作用不明显,但可下调其受体Tie-2的表达.

血管生成素-1对猪慢性缺血心肌中功能性新生血管增生的促进作用

目的 对比血管生成素-1(angiopoietin-1,ANG-1)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在猪慢性心肌缺血模型中的促血管再生效果.方法 利用Ameroid血管压缩环建立26只猪慢性心肌缺血研究模型,4周后分成3组:腺病毒携带ANG-1组(AdANG-1,n=9),腺病毒携带VEGF组完全恢复灌注术后4周仍然保持缺血状态(AdVEGF,n=10)和空载体对照组(n=7).分别在腺病毒介导的基因移植4和12周后,利用荧光微球法测定缺血心肌的局部血流量,并同时进行免疫组化检测.结果 基因移植后4周,AdANG-1组左心室心肌缺血区的灌注量[(3.25±0.16) mL·min-1·g-1]明显高于AdVEGF组[(1.09±0.13)mL·min-1·g-1]和对照组[(1.20±0.03) mL·min-1·g-1] (P＜0.05).基因移植后12周,AdANG-1组和AdVEGF组的左心室缺血区心肌微血管密度分别为(19.61±1.76)/0.572 mm2心肌组织和(18.17±1.43)/0.572 mm2心肌组织,均明显高于对照组的(13.53±0.92)/0.572mm2心肌组织(P＜0.05).但就直径50～100μm小动脉密度而言,AdANG-1组较空载体对照组显著增加[(1.9±0.4)/0.572mm2心肌组织切面vs.(0.7±0.2)/0.572mm2心肌组织切面,P＜0.05],而VEGF组与空载体对照组相较则无明显差异.AdANG-1组增加了心肌微血管的密度进而提高了局部心肌灌注.结论 VEGF和ANG-1基因转移均可促进血管再生,但只有ANG-1可以促进功能性小血管的再生,从而稳定有效地增加了心肌灌注,并为心功能的改善提供了必要的组织解剖学基础.

Ad-Ang-1转基因成纤维细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成效应及其分子机制研究

目的 研究经腺病毒介导的人血管生成素-1(Ad-Ang-1)转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成活性及其分子机制.方法 将Ad-Ang-1腺病毒病毒子感染再生丝素膜上培养的WI-38人胚肺成纤维细胞,通过ELISA法检测再生丝素膜对成纤维细胞目的 基因表达的影响,将Ad-Ang-1转基因WI-38细胞修饰的丝素材料进行鸡胚尿囊膜血管形成实验(CAM)和兔角膜层间植入诱导角膜新生血管试验,并用ELISA法检测其对血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)、血小板衍化生长因子(PDGF)表达的影响.结果 Ad-Ang-1可感染再生丝素膜上培养的成纤维细胞,ELISA法检测结果表明SF组Ad-Ang-1转基因WI-38细胞可以成功表达目的 基因 (P<0.05).CAM实验表明Ad-Ang-1转基因WI-38细胞修饰的再生丝素膜具有促进CAM血管生成的活性,并通过兔角膜层间植入实验进一步证明Ad-Ang-1转基因细胞修饰的丝素材料具有诱导角膜组织血管生成的作用,其机制可能与再生丝素膜对Ad-Ang-1转基因的WI-38成纤维细胞中不仅可以成功表达目的 Ang-1,而且还可使与血管生成和组织损伤修复相关的VEGF、FGF2、PDGF基因表达水平明显提高有关.结论 Ad-Ang-1转基因细胞修饰的丝素材料具有诱导血管生成的作用,为今后进一步采用转基因技术对生物材料进行修饰或改性、研制出具诱导性的医用生物膜材料创造了条件.

胃癌组织中血管生成素-2及金属基质蛋白酶-9表达的相关性研究

血管生成素-2( Angiopoietin-2 Ang-2)是一种与肿瘤血管生成相关的细胞因子,它能促进新血管的生成,而且在肿瘤组织中,Ang-2高表达常伴随着金属基质蛋白酶-9(metallo-proteinase-9 MMP-9)的高表达[1-2].为此我们通过免疫组织化学技术对40例手术切除并经病理确诊的胃癌组织进行Ang-2和MMP-9和微血管密度(MVD)的检测,探讨Ang-2和MMP-9与胃癌生物学特性的关系,并对两者的相关性进行分析,旨在为临床治疗及判断预后提供理论依据.

血管生成素在柔红霉素诱导大鼠肾小球硬化中的变化及意义

目的:探讨柔红霉素(DRB)诱导大鼠肾小球硬化过程中,内源性血管生成素的异常变化及其病理作用.方法:70只健康雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组30只,DRB组40只,从DRB组大鼠尾静脉按15 mg/kg注射DRB,分别于注药后的第1、2、4、6、8、12周,随机取各组大鼠5只,收集24h尿量,采血取肾,检测24h尿蛋白定量(24hUPQ)、血浆Angiopoietin-1(Ang1)、Angiopoietin-2(Ang2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α),用PAS染色、免疫组化、原位杂交和透射电镜技术进行病理形态学分析.结果:随病变的进展,肾小球表达Ang1mRNA和蛋白下调,表达Ang2mRNA、Ang2蛋白、TNF-α蛋白和Fn蛋白上调.DRB组肾小球内Ang1mRNA和蛋白表达分别与24hUPQ呈负相关;血浆Ang2、肾小球Ang2mRNA和蛋白表达分别与24hUPQ呈正相关;血浆TNF-α浓度和肾小球局部的TNF-α蛋白表达分别与肾小球内Ang2mRNA和蛋白表达呈正相关.肾小球内Ang2蛋白表达与Fn蛋白表达、MAEM呈正相关.结论:肾小球局部Ang1表达减少,Ang2表达上调,与DRB诱导大鼠肾小球硬化的发生密切相关;血浆Ang2浓度升高和肾小球内Ang2表达上调,可能共同介导了肾小球滤过膜通透性的增高.

血管生成素与脑缺血

血管生成素(angiopiein ,Ang)是-族特异性作用于血管内皮细胞的生长因子,Tie-2为其内皮特异性共同受体,Ang1能保持血管内皮的稳定性,促使血管成熟;Ang2能拮抗Ang1,破坏血管的稳态,与内皮细胞的增殖有关.Ang及其受体在缺血脑组织中的特异表达与脑缺血半暗带血管重建、侧支循环的形成和血脑屏障的完整性密切相关,有望成为缺血性卒中新的治疗靶点.

血管特异性生长因子与缺血性脑血管病的治疗

单一应用血管内皮生长因子(VEGF)治疗缺血性脑血管病有一定疗效,但也存在一些问题.VEGF和血管生成素可在局灶性脑缺血中共同发挥作用.因此,在缺血性脑血管病中的治疗中,综合应用这些血管特异性生长因子可能更有前景.

血管生成素对人毛囊外毛根鞘角质形成细胞增殖的影响

目的:探讨血管生成素对体外培养的人毛囊外毛根鞘角质形成细胞增殖的影响.方法:采用两步酶消化法分离和培养人毛囊外毛根鞘角质形成细胞,将与绿色荧光蛋白基因共表达的血管生成素真核表达质粒pEGFP-ANG转染人毛囊外毛根鞘角质形成细胞,同时设立转染空质粒的pEGFP-C2组和只加转染液的阴性对照组,48 h后利用ELISA法检测细胞上清液中血管生成素的表达,同时四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖.另外,将不同浓度的重组人血管生成素(0～200μg/L)加入人毛囊外毛根鞘角质形成细胞中,培养48 h后MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期.结果:成功分离与培养了人毛囊外毛根鞘角质形成细胞,转染人血管生成素的细胞上清液中血管生成素的浓度明显高于转染pEGFP-C2组和阴性对照组(P＜0.001),且其能够明显促进人毛囊外毛根鞘角质形成细胞增殖(P＜0.001).另外,3.125～200.000 μg/L重组人血管生成素能够明显促进人毛囊外毛根鞘角质形成细胞增殖(P＜0.001),其中以12.500 μg/L浓度组作用为显著.流式细胞仪检测结果表明12.500～200.000 μg/L重组人血管生成素能够显著增加细胞增殖指数(P<0.05).结论:内源性和外源性血管生成素均能明显促进体外培养的人毛囊外毛根鞘角质形成细胞增殖,提示血管生成素可能通过促进毛囊外毛根鞘角质形成细胞增殖而促进毛发生长.

血管生成素在小鼠皮肤中的表达及其对小鼠毛发生长的影响

目的:探讨血管生成素在小鼠皮肤中的表达及其对小鼠毛发生长的影响.方法:利用松香-石蜡拔毛法诱导C57BL/6小鼠背部的毛囊同步进入生长期,半定量RT-PCR检测血管生成素mRNA在不同毛囊周期小鼠皮肤中的表达.分离与培养完整的小鼠触须毛囊,加入不同浓度的血管生成素(0～200 μg/L),培养8 d 后测量毛囊的生长长度.与此同时,皮内注射血管生成素或血管生成素真核表达质粒pEGFP-ANG,并设立同时注射抗人血管生成素抗体组、注射空质粒pEGFP-C2 组和注射赋形剂的对照组,观察小鼠局部皮肤颜色的改变,并借助苏木精-伊红染色组织切片测量皮肤的厚度和计数生长期Ⅵ毛囊的比例.结果:半定量RT-PCR 显示小鼠皮肤中血管生成素mRNA 在生长期表达逐渐增加,生长期晚期表达高,退行期开始减少,至休止期表达低,其表达模式与毛囊周围的血管形成相一致.12.5～200.0 μg/L血管生成素呈剂量依赖性地促进体外培养的小鼠触须毛囊生长(P < 0.01).而且,皮内注射血管生成素和血管生成素真核表达质粒对C57BL/6小鼠背部的局部皮肤颜色无明显影响,但能明显增加局部皮肤的厚度(P ＜ 0.01)和生长期Ⅵ毛囊的比例(P ＜ 0.01).结论:血管生成素在小鼠皮肤中的表达具有毛囊周期依赖性的特点,血管生成素可能通过促进毛囊周围的血管形成和诱导毛囊进入生长期Ⅵ而促进小鼠毛发的生长.

血管内皮生长因子和血管生成素在斑秃皮损中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素在斑秃患者皮损处的表达情况.方法:取新鲜斑秃患者皮损和正常人头皮行冰冻切片,采用免疫组化的方法检测VEGF和血管生成素蛋白的分布和表达.结果:人毛囊的毛乳头、真皮鞘,皮脂腺等处均表达VEGF和血管生成素蛋白.斑秃患者此两种因子表达明显低于正常对照(P<0.05),且表达强度与斑秃严重程度呈负相关.结论:VEGF和血管生成素表达下调可能与斑秃的发病有关.

血管生成素信号系统及其相关抗肿瘤药物的研发

血管生成素与它的第二种受体( Tie-2)组成的信号系统——ANG-Tie2——控制着血管成熟和休眠,它是一种特异作用于血管的受体酪氨酸激酶系统.ANG-2因为显著上调多数肿瘤中的血管形成而被认为可以在癌症的治疗上发挥重要作用.ANG-2被认为是在肿瘤组织中主要发挥作用的ANG型.研究发现ANG-2抑制剂能发挥一定的抗肿瘤作用,而ANG-2抑制剂与细胞毒药物,VEGF抗体药物或酪氨酸激酶抑制剂的联合应用相比于单一疗法表现出更加显著的抗肿瘤作用.文章就血管生成素信号系统和相关抗肿瘤药物的研发进行了综述.

冠心病患者血清细胞因子水平及临床意义

目的:检测冠心病(coronary heart disease,CHD)患者血清中血管细胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule,VCAM)-1、白细胞介素(interleukin,IL)-8、IL-11、干扰素诱导蛋白(interferon inducible protein,IP)-10、巨噬细胞炎症蛋白(macrophage inflammatory protein,MIP)-1p、调节正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)、血管生成素(Angiogenin)7种细胞因子的含量,研究7种细胞因子与疾病严重程度和冠状动脉病变特点之间的关系,探讨其作为新的CHD标记物的可能性.方法:本研究入选216例患者,其中CHD组158例,对照组58例.检测两组血清中7种细胞因子的含量,并进行统计分析.结果:①CHD组与对照组的IL-8、IP-10、MIP-1β、RANTES血清水平比较无统计学差异;而CHD组血清VCAM-1、IL-11、Angiogenin水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);②单支病变、双支病变和多支病变亚组之间的VCAM-1、IL-11水平没有差异(P＞0.05),而多支病变组的血清Angiogenin水平高于双支病变组和单支病变组(P＜0.05);③Gensini积分为0～20分、21～40分、＞40分的3个亚组之间血清VCAM-1、IL-11水平差异没有统计学意义(P＞ 0.05);Gensini积分＞40分亚组的血清Angiogenin水平高于21～40分亚组(P＜0.05),21～40分亚组的血清Angiogenin水平高于0～20分亚组(P＜0.05);④血清Angiogenin水平与Gensini积分呈正相关(r=0.270,P=0.046),与传统CHD危险因素无相关性(P＞0.05).结论:VCAM-1、IL-11、Angiogenin 3种细胞因子在CHD患者血清中表达增加,血清Angiogenin水平可以间接反映冠脉狭窄的范围和程度.