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血管生成素-1的信号传导机理
血管生成素家族(angiopoietin family/angs)与血管内皮生长因子(VEGF)参与的信号转导途径是调节血管网形成必不可少的.这个途径包括VEGF和Angs激活的酪氨酸激酶受体VEGFR 1～3和Tie.近年来对新生血管性疾病和血管渗漏研究的发展,Ang-1/Tie系统抑制新生血管形成、促进血管成熟、抑制血管渗漏的特点逐步被人们所认识.对Ang-1的作用和Ang-1/Tie系统的机理也有了一定的研究.
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中药三七抑制二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌血管生成的研究
目的：研究中药三七抑制二乙基亚硝胺（ DEN ）诱发大鼠肝癌血管生成的作用。方法82只Wistar雄性大鼠，根据随机数字表法分为中药组、西药组、联合组、模型组，每组18只；空白组10只，以100 ppm DEN饮水法诱发大鼠肝癌模型。中药组用三七水煎剂灌胃，西药组静脉注射贝伐单抗，联合组给予三七灌胃、贝伐单抗静脉注射，模型组和空白组均给予等量的生理盐水灌胃。分别于12周末和18周末分批处死大鼠，分析中药组、西药组、联合组、模型组和空白组大鼠肝标本，检测大鼠肝细胞癌血管内皮生长因子（ VEGF ）、血管生成素-1（Ang-1）、血管生成素-2（Ang-2）、血管生成素-2受体（Tie-2）、缺氧诱导因子-1α（Hif-1α）表达水平及肝癌组织微血管密度（ MVD）。结果12周末及18周末时Ang-1 mRNA在中药组、西药组、联合组较模型组肝癌组织中表达均上调，而Ang-2、Tie-2、HIF-1α及VEGF mRNA表达均下调（ P＜0．05）。联合组、西药组、中药组的MVD也均较模型组明显减少（ P＜0．05）。结论三七在HCC肿瘤血管生成和进展中可能通过抑制Ang-2、Tie-2 HIF-1α及VEGF而发挥预防作用。
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下调血管生成素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响
目的 构建人血管生成素(angiogenin,ANG)基因siRNA干扰质粒,检测其对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响.方法 将针对人ANG基因siRNA表达质粒和无同源性的对照质粒稳定转染T24细胞后经G418筛选出阳性克隆.根据转染质粒不同分为3组:T24组(未转染组)、T24-NC组(转染阴性对照质粒组)、T24-siANG组(转染干扰质粒组).通过RT-PCR检测T24细胞中ANG的mRNA表达水平,Western blot检测ANG蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术、TUNEL及Hochest 33342检测细胞凋亡;Westem blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达;构建BALB/c裸鼠[4～6周龄,体质量(20±3)g]移植瘤模型,组织HE染色和免疫荧光CD31检测微血管变化;组织免疫化学方法检测移植瘤中ANG、Bax、Caspase-3、Bcl-2的表达.结果 酶切和测序结果证明重组质粒构建成功;T24-siANG组ANG的mRNA水平及蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);T24-siANG组细胞增殖活力明显下降(P＜0.05);流式细胞仪检测结果显示:与T24-NC组和T24细胞组相比,T24-siANG组细胞的凋亡率明显升高(P＜0.01);TUNEL检测结果显示:T24-siANG组出现大量凋亡细胞;Hochest检测结果显示:T24-siANG组出现典型的凋亡形态特征如染色质凝集、核碎裂和明亮的蓝色荧光等;Westem blot结果显示,在T24-siANG组中,Bcl-2的表达明显降低(P＜0.01),而Bax和激活的Caspase-3的表达明显升高(P＜0.05);组织HE染色和组织免疫荧光显示:T24-siANG组肿瘤微血管生成较T24与T24-NC组明显减少(P＜0.01);组织免疫化学结果也表明:T24-siANG组ANG、Bcl-2蛋白显著降低,而Bax、活化的Caspase-3蛋白明显升高.结论 成功构建的干扰质粒通过降低ANG的表达、抑制膀胱癌T24细胞的增殖、调节凋亡关键蛋白的表达,从而促进膀胱癌T24细胞的凋亡.
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核糖核酸酶抑制因子与血管生成素的相互作用
目的 探讨核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)与血管生成素(angiogenin,ANG)的相互作用.方法 利用免疫荧光标记结合共聚焦显微镜技术来确立RI与ANG蛋白在细胞内的共定位.利用激光共聚焦显微镜的荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术验证RI和ANG蛋白的相互作用.构建原核表达质粒pGEX-4T-RI,转化E coli BL21大肠杆菌(DE3)表达,并经谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B(glutathione sepharose 4B)纯化GST-RI蛋白,考马斯亮蓝染色和免疫印迹鉴定表达情况,利用GST蛋白沉降技术检测RI与ANG蛋白在体外的结合作用.应用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)实验检测两蛋白在真核细胞内的结合作用.结果 细胞内免疫荧光标记的RI和ANG蛋白在激光共聚焦显微镜观察下存在共定位现象.FRET结果显示RI与ANG在细胞内存在相互作用.另外酶切和测序结果证明原核表达质粒pGEX-4T-RI构建成功,GST-RI蛋白诱导表达正确,GST蛋白沉降结果显示RI和ANG蛋白在原核细胞反应体系中存在相互作用.结论 RI和ANG蛋白在原核细胞反应体系和真核细胞中均存在相互结合作用.
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RI基因真核表达载体的构建及其对人脐静脉内皮细胞的影响
目的 构建融合表达载体pcDNA3.1-RI,并检测核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因与血管生成素(angiogenin,ANG)的关系及对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及迁移能力的影响.方法 用RT-PCR方法扩增RI基因,酶切后将其插入pcDNA3.1,构建融合表达载体pcDNA3.1-RI,在脂质体介导下转染HUVECs,RT-PCR检测RI、ANG基因的mRNA表达水平；Western blot检测RI、ANG、MMP-2、MMP-9的表达水平；CO-IP法检测ANG和RI的相互作用,MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期分布.结果 真核表达质粒构建成功；转染pcDNA3.1-RI组细胞RI基因的mRNA及蛋白的表达较2个对照组(转染pcDNA3.1空载体组和未转染质粒组)均呈显著性增加(P＜0.05),而ANG基因的mRNA及蛋白的表达均降低(P＜0.05),MMP-2、MMP-9蛋白表达水平亦降低(P＜0.05)；CO-IP法检测到ANG和RI在细胞内能结合；转染pcDNA3.1-RI质粒到HUVECs细胞后细胞的增殖活力明显降低(P＜0.05),G0～G1期比例明显增加,S期减少.结论 成功构建的真核表达质粒能显著增加RI基因及其蛋白水平的表达,RI可以直接在转录水平上降低ANG的表达,在细胞内与ANG结合,从而影响内皮细胞的增殖、迁移能力.
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血管生成素-2及其受体Tie2在食管鳞癌中的表达及与血管生成关系的研究
目的 探讨血管生成素-2(angiopoietin-2)及其受体Tie2在食管鳞癌组织中的表达规律及其在肿瘤组织发生、发展以及血管生成中的作用.方法 采用免疫组织化学S-P染色法检测39例食管鳞癌组织中Ang-2、Tie2及CD34的蛋白表达,根据CD34染色结果计数微血管密度(microvessel density,MVD).结果 Ang-2及其受体Tie2的蛋白表达定位于肿瘤细胞或血管内皮细胞质及胞膜,呈异质性分布;39例食管癌中Ang-2和Tie2阳性表达率均为74.36%;且均与食管癌的分化程度、淋巴结转移密切的关系(P＜0.05);Ang-2及Tie2蛋白阳性表达者的MVD分别为(42.14±5.19)和(42.31±5.06),显著高于相应的食管癌组织Ang-2和Tie2阴性病例(MVD分别为33.7±3.34和33.2±2.35)(P＜0.01).结论 Ang-2/Tie2在食管鳞癌发生、演进过程中起着重要作用,并与肿瘤血管生成关系密切.
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脂质体介导ANG反义核酸对 A549 细胞作用的研究
目的研究脂质体介导ANG 反义核酸转染A549细胞后,对其中 ANG 蛋白表达的影响,探讨其作为抗血管生成与抗肿瘤药物的可行性.方法用人工合成的人 ANG 反义寡聚核苷酸,以脂质体为载体转染人肺癌 A549 细胞,研究 A549 细胞在基因转染后,其 ANG 蛋白表达的变化.结果脂质体转染程序优化后,得到佳转染效率;免疫组化显示细胞内 ANG 蛋白表达明显减少;培养基 ELISA 检测显示每细胞分泌的 ANG 蛋白量与对照组相比有显著差异.结论 ANG 反义寡聚核苷酸抑制 A549 细胞中 ANG 的表达,为体内研究提供了基础.
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血管生成素/Tie2受体通路与白血病的关系
血管生成素(Angs)家族是新近发现的促血管新生因子家族,有4个成员Angl,Ang2,Ang3和Ang4.研究发现血管生成素在白血病肿瘤血管新生中发挥重要作用,已成为白血病独立的预后因子.
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血管生成素对血管生成调节作用的研究进展
血管生成素是一类新发现的促血管生成因子.随着血管生成素的作用机制不断被认识,其在血管生成中的调节作用以及与心血管疾病的关系也日益受到重视.
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子宫颈鳞癌细胞血管生成素和酪氨酸激酶受体的表达与患者临床病理及预后分析
目的:探讨血管生成素(Ang)及酪氨酸激酶受体(Tie)在子宫颈鳞癌组织癌细胞中的表达与患者临床病理特征和预后的关系.方法:选择2010年1月至2015年10月在石河子大学医学院第一附属医院妇科未行放疗和化疗直接手术治疗的84例Ⅰ A1～ⅡA2期子宫颈鳞癌患者为研究对象.采用免疫组织化学染色法检测Ang-1、Ang-2、Tie-1、Tie-2在子宫颈鳞癌细胞中的表达,并分析其与患者临床病理特征和预后的关系.结果:子宫颈鳞癌患者肿瘤直径≥2 cm的Ang-1、Ang-2和Tie-2的阳性表达率均显著高于肿瘤直径＜2 cm者(P＜0.05).Tie-2的阳性表达率在Ⅰ B2～ⅡA2期患者中明显高于Ⅰ A1 ～Ⅰ B1期(P＜0.05),Tie-1的阳性表达率在有淋巴脉管间质浸润(LVSI)患者中明显低于无LVSI者(P＜0.05).此外,Tie-1在子宫颈鳞癌细胞中的表达与患者3年累积生存时间相关(P＜0.05),Tie-2在子宫颈鳞癌细胞中的表达与患者的3年累积生存时间及无瘤生存时间相关(P＜0.05).结论:子宫颈鳞癌患者癌细胞中Ang和Tie的表达可能与肿瘤大小或疾病进展或预后有一定关系.Ang和Tie有可能成为日后子宫颈鳞癌抗肿瘤治疗的新靶点.
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血管生成素在妊娠滋养细胞疾病中表达的临床意义探讨
目的:通过检测血管生成素(ANG)在人正常早孕绒毛组织、葡萄胎及妊娠滋养细胞肿瘤中表达的差异性,探讨ANG在妊娠滋养细胞疾病(GTD)表达的意义.方法:采用免疫组化(EnVision)法检测人正常早孕绒毛组织28例、葡萄胎组织26例、妊娠滋养细胞肿瘤组织14例(其中侵蚀性葡萄胎1例、绒毛膜癌12例、胎盘部位滋养细胞肿瘤1例)中ANG蛋白的表达以及定位情况.结果:ANG蛋白在人正常早孕绒毛组织、葡萄胎及妊娠滋养细胞肿瘤组织中均有表达且主要定位于细胞质和细胞膜、少量表达于细胞核;ANG阳性表达率葡萄胎组(100.0％)高于正常早孕绒毛组(60.7％)(P＜0.05)和妊娠滋养细胞肿瘤组(85.7％)(P＜0.05),妊娠滋养细胞肿瘤组高于正常早孕绒毛组(P＜0.05).在妊娠滋养细胞肿瘤中,ANG阳性表达率在年龄≥40岁组(83.3％)高于年龄＜40岁组(75.0％)(P＜0.05);临床分期晚期组(Ⅲ、Ⅳ期)(88.9％)高于早期组(Ⅰ期、Ⅱ期)(80.0％)(P＜0.05);FIGO预后评分高危组(87.5％)高于低危组(83.3％)(P＜0.05).结论:ANG在GTD组织中的表达明显高于在正常早孕绒毛组织,且在妊娠滋养细胞肿瘤晚期、高危患者表达增高,表明ANG的过表达可能参与了GTD的发生过程.
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尼美舒利对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞ang-2基因表达的影响
目的 探讨环加氧酶(COX) -2抑制剂尼美舒利(NIM)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中ang-2基冈表达的影响及其意义.方法 以25、50、100和200 μmol·L-1浓度的NIM处理Tca8113细胞48 h,半定量RTPCR检测其ang-2 mRNA的表达.结果 Tca8113细胞中ang-2 mRNA水平下降,且下降呈浓度依赖性.结论 NIM下调ang-2基因表达以抑制肿瘤血管发生,可能是COX-2抑制剂抑瘤的作用机制之一.
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血管生成素在人口腔鳞癌的表达及意义
目的研究血管生成素(Ang)家族中Ang-1、Ang-2蛋白在口腔鳞癌组织中的表达,并探讨其与口腔鳞癌病理分级的关系.方法采用免疫组化SABC方法,检测34例口腔鳞癌组织及16例正常口腔黏膜组织中Ang-1和Ang-2蛋白的表达.结果Ang-1、Ang-2蛋白在口腔鳞癌细胞均有表达.Ang-1在正常口腔黏膜和口腔鳞癌组织及各级口腔鳞癌中表达,无明显差异(P＞0.05);Ang-2在口腔鳞癌组织的表达明显高于正常口腔黏膜(P＜0.05),且Ang-2的表达随口腔鳞癌分级的增加而逐渐增强(P＜0.05).结论Ang-2在口腔鳞癌组织中的表达明显上调,并随着肿瘤恶性程度的增高表达水平升高.作为肿瘤血管新生的标志之一,可能与口腔鳞癌的血管生成和早期转移有关.
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周细胞与血管新生及其研究进展
周细胞是微血管的必要组成成分之一,它与血管内皮细胞相互作用,在调节体内血管发育、稳定、成熟以及血管重塑中起到重要作用,并且介导体内多种生理病理修复过程,因此成为许多血管新生性疾病如肿瘤、糖尿病视网膜病等潜在的治疗靶点,也为长期腹透患者腹膜血管新生所导致的超滤衰竭提供了崭新的治疗思路.本文就周细胞的生物学特性及其与血管新生的关系与研究进展做一综述.
关键词： 周细胞 血管新生 血管生成素 血管平滑肌细胞 血小板衍生生长因子受体β -
血管生成素在妇产科领域的研究现状
血管生成素是近年研究较多的血管生成因子,在血管生成和稳定性的维持中起着重要作用.其中,子宫和卵巢内以血管生成素-1和血管生成素-2的存在为主.目前妇产科领域对这两者的研究发现其可促进子宫内膜的增生和修复,同时影响卵泡的发育和成熟、排卵及黄体的生成和发育.血管生成素-1和血管生成素-2的异常表达与胎儿生长受限、子宫内膜异位症等疾病的发病有关.
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RI与ANG相互作用对BALB/C裸鼠人膀胱癌移植瘤生长转移及PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响
目的 探讨核糖核酸酶抑制因子(RI)与血管生成素(ANG)相互作用对BALB/C裸鼠人膀胱癌(cloladder cancer)移植瘤的生长转移及对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响.方法 构建BALB/C裸鼠人膀胱癌移植瘤模型,通过HE染色、免疫组织化学染色、免疫荧光和免疫印迹法检测相关通路蛋白的表达情况.根据不同的组合分为:BIU-87+ANG,BIU-87+RI,BIU-87+ANG+RI和BIU-87+空质粒组,每组接种6只BALB/C裸鼠.结果 接种后一周左右皮下有实体瘤生成,30天后处死BALB/C裸鼠,取出肿瘤并称取其重量.实验组BIU-87+RI和BIU-87+ANG+RI组比对照组的肿瘤重量低,差异具有统计学意义(P<0.05).肺HE染色观察显示实验组肺部转移结节明显比对照组少,BIU87+ANG组中p-mTOR,p-PI3K,p-Akt和p-GSK3β表达升高,BIU87+RI组和BIU-87+ANG+RI组表达下降.结论 RI与ANG相互作用抑制BALB/C裸鼠人膀胱癌移植瘤的生长转移,同时抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路中磷酸化蛋白的水平.
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血管生成素协同血管内皮细胞生长因子对自体脂肪移植血运重建的影响
目的:探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)及血管生成素(ANG)协同VEGF对大鼠自体脂肪移植血运重建的影响.方法:在颗粒脂肪移植的实验动物模型中应用纤维蛋白原缓释VEGF,作用于血管生成素浸泡过的自体脂肪细胞,免疫组化法观察实验组和各对照组移植体血管生长情况,并测量各组脂肪移植体剩余体积量. 结果:实验组脂肪组织移植体血供重建良好,实验组脂肪块剩余体积明显大于对照组. 结论:VEGF能加快脂肪移植的血运重建,ANG能协同VEGF作用,从而显著提高自体脂肪移植成活率.
关键词： 血管内皮细胞生长因子 血管生成素 脂肪移植 -
抗肿瘤血管生成靶向治疗进展
血管生成是肿瘤生长和转移的关键。抗血管生成是一种癌策略，其目标是抗为活跃增殖的肿瘤细胞提供氧气和营养的新生血管。通过阻断新血管的生成抑制癌症的生长和转移。目前，确定的抑制肿瘤血管生成的方法是阻断血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）通路。但近，一些非VEGF因子如血小板衍生因子（platelet -derived growth factor，PDGF ）、成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor，FGF）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）及血管生成素（angiogenin，Ang）等也参与肿瘤血管生成，强调有必要发展药物针对多种促血管生成途径。
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血管生成素-2/受体-2在乳腺癌中的表达及在血管新生中的可能作用
目的:检测乳腺癌组织中血管生成素2(Ang-2)及其受体Tie-2的表达水平,探讨二者在乳腺癌发生发展及血管生成中的调节作用.方法:采用免疫组化(SP法)对79例乳腺癌标本、68例癌旁组织及42例乳腺纤维腺瘤组织中Ang-2、Tie-2及CD34标记的微血管密度(MVD)进行检测,分析它们与乳腺癌血管生成的关系.结果:乳腺癌组织中Ang-2、Tie-2阳性率显著高于乳腺纤维腺瘤和癌旁正常组织中的阳性率(P＜0.05),在Ⅲ期乳腺癌中的阳性表达率高于Ⅰ-Ⅱ期(P＜0.05),在有腋窝淋巴结转移组中的阳性表达率高于无淋巴结转移组(P＜0.05)；Ang-2、Tie-2的表达与MVD均呈正相关(P＜0.05).结论:Ang-2和Tie-2在乳腺癌血管生成和进展中可能起重要作用.
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血管内皮细胞特异性生长因子与胶质瘤血管生成
实体性肿瘤是血管依赖性的,肿瘤细胞需要新生血管带来氧和养料及带走代谢产物维持其较高的代谢率,如果肿瘤血管生成不能满足肿瘤生长的需要,肿瘤细胞会发生坏死或凋亡.肿瘤血管生成包括内皮细胞的增殖、迁移、细胞外基质溶解及募集周围细胞形成成熟血管,涉及多种生长因子及细胞因子参与.
