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血管生成素与绿色荧光蛋白融合蛋白的表达及纯化
目的:表达并纯化血管生成素(ANG)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白,以进一步探讨血管生成素的生物学功能.方法:PCR扩增人ANG基因,将其与EGFP基因融合后克隆到高表达载体pMFHT,构建了原核表达质粒pHIS-ANG-EGFP.该质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并用金属螯合亲和层析纯化目的蛋白.激光共聚焦显微镜和Westernblot鉴定融合蛋白的表达情况.结果:重组蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并从破菌上清中一步纯化目的蛋白,纯度可达95%以上.Western blot分析表明表达产物具有良好的抗原性和特异性.诱导表达的菌体在激光共聚焦显微镜下可发射明亮的绿色荧光.结论:成功的表达并纯化了ANG-EGFP融合蛋白,利用EGFP的荧光示踪作用,该融合蛋白可用于血管生成素核转位和胞内共定位蛋白质研究.
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血管生成素及其他炎症介质在大鼠急性胆源性胰腺炎中的变化规律及意义
目的:探讨血管生成素及其他炎症介质在急性胆源性胰腺炎中的变化及其意义.方法:将70只SD大鼠随机分成急性胆源性胰腺炎组(ABP组,胆总管末端结扎,n=56)和假手术组(SO组,仅行开腹后翻转胰腺,n=14),分为7个时间点(术后0、6、12、24、48、72、120 h).各组处理后于相应时间点留取大鼠的胰腺和静脉血,测得胰腺含水量,观察ABP组及SO组胰腺病理变化及评分并检测血中淀粉酶(AMY)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子-κB(NF-κB)、血管生成素-1(Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)的变化.结果:ABP组胆总管末端结扎术后各时间点的AMY、IL-10、TNF-α、NF-κB均高于同时间点的SO组(P＜0.05),并于120 h达到观察期内峰值.Ang-1术后0h即较SO组显著降低(P＜0.01),后升高并于12 h后保持平稳,但始终低于SO组(P＜0.05),与胰腺病理评分无相关性;Ang-2术后0h即较SO组显著升高(P＜0.01),并于48 h到达峰值,且与胰腺病理评分呈正相关(r=0.943,P＜0.01),后缓慢下降但显著高于SO组,并失去与胰腺病理评分的正相关性.ABP组0～12 h,Ang-2与胰腺含水量呈正相关(r=0.830,P＜0.01),24 h后无明显相关性.ABP早期,胰腺含水量急剧升高与Ang-1的下降及Ang-2的升高相对应.结论:炎症介质在ABP的发生发展中起到重要作用,而Ang-1水平与ABP严重程度无明显相关性,Ang-2水平在ABP早期上升,峰值提前于其他炎症介质,与胰腺病理评分及胰腺含水量呈正相关,Ang-2可能在ABP早期起到促炎及促血管渗漏的作用,预示胰腺炎的严重程度,或可用于指导临床治疗.
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血管生成素与肿瘤血管生成
血管生成素家族(Ang)是近年来新发现的血管生成因子.Ang家族编码四种结构相似的蛋白质,包括Ang-1、Ang-2、Ang-3和Ang-4,均能与受体Tie-2结合,参与肿瘤血管生成的起始及延续过程,影响肿瘤的生长、侵袭和转移.应用以Ang家族或其受体为靶标可抑制肿瘤血管生成,对肿瘤的治疗有潜在的应用前景.
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血管生成素-1和2在肿瘤血管生成中的作用
早在1971年,美国学者Folkman[1]就曾提出肿瘤的生长与转移依赖于血管的生成,在随后的几十年中越来越多的研究证实了这一点.血管生成素(angiopoietin,Ang)是第一个被确定的来源于人肿瘤组织具有促血管生成作用的细胞因子[2].
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血清血管生成素-2在直肠癌术后病情监测中的应用价值
新生血管的生成在肿瘤的发展中起重要作用，其活跃程度与肿瘤的浸润、侵袭、转移及预后密切相关。近年来发现的血管生成素-2（angiopoetin-2 Ang-2）是一种分泌型的血管生成因子，参与血管生成及成熟，是其他血管生长因子诱导新生血管生成的枢纽。目前Ang-2的相关研究主要集中于Ang-2在肿瘤组织中表达的情况，显示Ang-2与乳腺癌、肝细胞癌、直肠癌、胰腺癌、膀胱上皮癌等恶性肿瘤的发生、发展和转移存在一定的相关［1，2］，表明对恶性肿瘤有一定辅助诊断作用。有关Ang-2在直肠癌切除术后随访者血清中变化的价值依国内文献检索结果相关报道甚少，对此作者进行了初步的探讨，现报道如下。
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血管生成素及其受体Tie-2在肝细胞癌中的研究进展
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)属于血管过多性肿瘤,血管新生在其进展中起重要作用.血管生成素、Tie-2在HCC血管新生、肿瘤进展中有重要作用,而且其表达水平对于HCC预后和术后生存率有提示作用.本文就血管生成素及其受体Tie-2在HCC中的研究进展作一综述.
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表达Tie2的单核巨噬细胞在肿瘤微环境形成中的作用及机制研究进展
表达Tie2的单核巨噬细胞(Tie2 expressing monocyte/macrophages,TEMs)是肿瘤相关巨噬细胞的重要亚群,存在于外周血、实体肿瘤等组织中.在肿瘤免疫抑制微环境中,TEMs能促进肿瘤生长、转移和复发,是肿瘤预后不良的新的指标,其作用机制主要通过促进血管生成、调节血管重塑、增加微血管密度、促进肿瘤微血管的形成;同时还可以抑制T细胞增殖、促进Treg的浸润、抑制抗肿瘤免疫应答.Ang-Tie2介导的Rheb/mTOR/p70S6K1信号通路是TEMs在肿瘤免疫微环境中促进肿瘤微血管生成的作用机制,对该细胞及相关通路的干预将成为新的肿瘤治疗靶点和策略.
关键词： 表达Tie2的单核巨噬细胞 血管生成 血管生成素 肿瘤微环境 -
Survivin与肿瘤血管形成
全文就Survivin与肿瘤血管生成关系的研究进展作一综述.
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结直肠肿瘤中血管生成素的表达及其与微血管密度的关系
目的:探讨结直肠肿瘤中血管生成素(angiopoietin,Ang)的表达及其与微血管密度(microvessel density,MVD)的关系.方法:采用免疫组化法,检测91例结直肠腺癌、20例结直肠腺瘤、24例正常结直肠组织中Ang-1和Ang-2的蛋白表达,以F-Ⅶ单克隆抗体标记血管内皮细胞,并计数MVD.结果:Ang-1在正常组织(7.07±2.00)的表达明显高于结直肠腺瘤(1.75±1.98)和腺癌(1.40±1.22),P＜0.01;结直肠腺癌的Ang 2阳性表达率高于结直肠腺瘤、正常组织(P＜0.01).Ang-2的表达与结直肠腺癌的分化程度、有无脉管侵犯密切相关;在135例组织中,Ang-1表达与Ang-2表达(r=-0.338,P＜0.01)、Ang-1表达与MVD(r=-0.388,P＜0.01)、Ang-2表达与MVD(r=0.594,P＜0.01)均有相关性.结论:Ang-2在结直肠腺癌中的过度表达对血管新生起重要作用,可能是评估结直肠腺癌恶性程度和预后的可靠指标.
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血管生成素及其受体在腹膜透析腹膜组织中的表达
目的 分析并研究尿毒症腹膜透析大鼠腹膜血管生成素(Ang)及其受体(Tie)的表达情况及影响因素.方法 SD雄性大鼠5/6肾切除术建立尿毒症模型,成模后腹腔内植入腹透管,随机分为尿毒症组(NS组)及腹透组(PD组).尿毒症组每日给予20 ml生理盐水腹腔灌注,腹透组每日给予20 ml 4.25%百特腹透液腹腔灌注,持续6周.对照组(C组)行假手术且不予液体灌注.实验结束取大鼠腹膜组织,观察腹膜血管新生情况;行免疫组化及RT-PCR检测腹膜组织血管生成素及其受体的表达变化.结果 实验表明PD组相对其他两组新生血管数明显增多,NS组新生血管数较C组为多(P均<0.05).免疫组化显示Ang2及其Tie2阳性细胞数PD组相对于C组和NS组明显增加,NS组较C组亦有增加(P均<0.05).RT-PCR显示PD组Ang2 mRNA和Tie2 mRNA表达较NS组和C组明显上调,而NS组高于C组(P均<0.05).结论 尿毒症本身及腹膜透析液均会上调腹膜的血管生成素及其受体表达,且与血管新生密切相关.
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动脉粥样硬化斑块内新生血管与斑块稳定性的研究进展
动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是引发心脑血管疾病的重要的病理基础之一.传统观点认为AS斑块引起的动脉管腔狭窄是决定病情轻重的主要因素.新研究表明,新生血管与AS斑块稳定性密切相关,AS斑块破裂而导致的急性冠脉综合征是引起重大心血管事件的主要原因之一.该文综述了AS斑块内血管新生与斑块稳定性的关联性,以及如何通过促进新生血管的成熟增强斑块稳定性.
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葛根素注射液对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用
脑梗死是中老年高发病,脑梗死后缺血区微血管受损,缺失[1].葛根素注射液临床上广泛用于脑缺血,疗效明显.对血管内皮细胞有促增殖,抑钙超载,抗氧化等作用[2],对脑缺血有明显的保护作用.本实验用大鼠脑缺血/再灌注(ischemia-reperfusion, CIR)模型,从促血管新生角度探讨葛根素治疗脑缺血的机制,观察其时效、量效关系.
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血清Ang/Tie2、VEGF在糖尿病肾病病情评估中的应用价值
目的：观察血清中血管生成素-1( Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)及其受体Tie2与血管内皮生长因子(VEGF)在糖尿病肾病( DN)病情进展中的水平变化规律,探讨平衡其比率在DN中的重要性。方法选取2型糖尿病患者60例,依据尿白蛋白排泄率( UAER)分为3组：正常白蛋白尿患者20例( DM1组)、微量白蛋白尿患者22例( DM2组)、大量白蛋白尿患者18例( DM3组),另设健康对照患者22例( NC 组)。采用 ELISA 法检测受试者血清 Ang-1、Ang-2、Tie2、VEGF水平,同时检测相关生化指标。结果① DM1组血清VEGF、Ang-2水平高于NC组, DM2组、DM3组进一步升高,4组间差异均有统计学意义( P<0．05)。② DM1组血清Ang-1水平高于NC组,DM2组、DM3组逐渐下降,4组间差异无统计学意义。③ Tie2水平差异无统计学意义。④UAER与Ang-2、VEGF 呈正相关性( r =0．470、0．404, P <0．01),与Ang-1呈负相关性(r=-0．310,P<0．05)； Ang-2与VEGF、Tie2呈正相关性(r=0．450、0．725,P<0．01)；Ang-1与Tie2呈正相关性(r=0．571,P<0．01),与Ang-2、VEGF呈负相关性(r=-0．497、-0．396,P<0．01,P<0．05)。⑤以UAER为应变量行多元线性逐步回归分析显示：Ang-1、Ang-2、VEGF、肌酐进入回归方程,是影响UAER的独立相关因子。结论血清中 Ang-1、Ang-2、Tie2、VEGF 水平与 DN密切相关,可能参与了DN的发生发展,并影响DN病情的进程。检测血清Ang/Tie2及VEGF可作为评估DN病情的重要指标。
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血管生成素在胃癌中的研究进展
肿瘤性血管生成是肿瘤发生、发展的重要条件,Garcea等[1]发现新生血管的形成导致原发肿瘤细胞呈快速指数性增长.大量研究[2]已证实有多种血管生成因子参与肿瘤性血管生成的调控,其中血管生成素(angiopoietin,Ang)是重要的一种血管生成因子,有关该家族成员在肿瘤血管生成中的研究正日益增多,近年来其在胃癌中的作用越来越受到人们的关注.本文就Ang在胃癌中的研究进展作一综述.
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血管生成素及其受体与降钙素原联合检测在急性肺损伤诊治中的作用
目的 研究急性肺损伤(ALI)病人血清中血管生成素-1(Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)及其受体(Tie-2)与降钙素原(PCT)的变化规律,探讨Ang-1、Ang-2、Tie-2与PCT在ALI病情评估和预后判断中的临床意义.方法 选取2016年9月至2017年3月南通大学附属医院重症监护病房的病人102例为ALI组,同时选择50例体检健康者为对照组.ALI组根据病人开始入院到随访28 d结束后生存情况再分成存活组和死亡组,比较病人血清中Ang-1、Ang-2、Tie-2与PCT的前后变化及急诊脓毒症病死率评分(MEDS)的严重程度及对预后评估的临床价值.结果 ALI组血清Ang-1、Tie-2水平分别为(0.99±0.08)、(0.96±0.08)μg/L,对照组分别为(2.07±0.15)、(1.51±0.31)μg/L,ALI组显著高于对照组,均差异有统计学意义(t=78.921,P<0.001;t=228.818,P<0.001),ALI组Ang-2、PCT、MEDS评分分别为(18.63±3.03)μg/L、(9.52±1.22)μg/L、(10.59±2.06)分,对照组分别为(1.75±0.22)μg/L、(0.31±0.15)μg/L、(2.97±0.33)分,ALI组均显著低于对照组,差异有统计学意义(t=153.629,P<0.001;t=22.545,P<0.001;t=420.623,P<0.001);存活组Ang-1、Tie-2分别为(0.85±0.32)、(1.08±0.64)μg/L,死亡组分别为(0.66±0.07)、(0.61±0.14)μg/L,存活组均显著高于死亡组,差异有统计学意义(t=20.241,P<0.001;t=16.515,P<0.001),存活组Ang-2、PCT分别为(0.85±0.32)、(8.20±0.93)μg/L、死亡组分别为(11.01±1.21)、(13.65±3.68)μg/L,存活组均显著低于死亡组,差异有统计学意义(t=14.197,P<0.001;t=277.114,P<0.001);存活组病人入院24 h Ang-1、Tie-2分别为(0.85±0.32)、(1.08±0.64)μg/L,治疗28 d后分别为(1.30±0.57)、(1.49±0.57)μg/L,均显著升高,差异有统计学意义(t=35.805,P<0.001;t=10.441,P<0.001),入院24 h Ang-2、PCT分别为(8.30±0.98)、(8.20±0.93)μg/L,治疗28 d后分别为(2.09±1.56)、(4.88±1.64)μg/L,均显著降低,差异有统计学意义(t=797.817,P<0.001;t=8.323,P<0.001).结论 通过抑制Ang-2、PCT的表达并促进Ang-1、Tie-2表达,可能有利于控制ALI病人的病情,发病时同时检测上述四项对ALI病人预后有较好的预测作用,可提高检出率.
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Ang-2及VEGF在早期宫颈癌中的表达及与血管及淋巴管密度的相关性
目的 检测血管生成素-2(Ang-2)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)在早期子宫颈鳞状细胞癌(SCC)组织中的表达及与微血管密度(MVD)和微淋巴管密度(LVD)的关系.方法 应用免疫组织化学染色SP法检测15例正常宫颈上皮(NCE)、20例宫颈上皮内瘤变(CIN)、49例单纯手术治疗的早期子宫颈鳞状细胞癌(SCC-O)组织Ang-2及VEGF的表达,同时计数CD34标记阳性的MVD及D2-40标记阳性的LVD,结合临床资料进行统计学分析.结果 Ang-2及VEGF在正常子宫颈上皮组织中表达率低,在CINⅢ及宫颈鳞癌组织中其表达水平显著升高(P<0.05);从NCE、CIN到SCC-O组,MVD值、LVD值均显著升高(P<0.05);宫颈癌组织中Ang-2及VEGF阳性表达的MVD值、LVD值均明显高于阴性表达者(P<0.05);Ang-2、VEGF表达强度与肿瘤的MVD值、LVD值呈正相关(P<0.05).结论 Ang-2与VEGF参与宫颈鳞癌的发生与发展,在促进早期宫颈癌血管及淋巴管形成的过程中可能发挥重要的协同作用.
关键词： 血管生成素 血管内皮细胞生长因子 子宫颈癌 微血管密度 微淋巴管密度 -
Ang-2、VEGF在子宫内膜异位症中的研究进展
子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)是一种良性妇科疾病,但其某些生物学行为却与恶性肿瘤类似,特别是组织侵袭和血管形成的能力.从近年的"在位内膜决定论"和"3A模式"中可见血管生成是EMs发生发展的重要环节.近年来研究发现血管生成素(angiopoietin,Ang)家族与血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其它促血管生成因子相互作用,共同促进新生血管生成.本文就Ang结构与作用机制、Ang-2与VEGF在EMs血管生成中的作用及协同作用等方面的研究进展作一综述.
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血管生成素在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义
目的研究血管生成素(Ang)家族中Ang-1、Ang-2蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达水平,探讨其与脑胶质瘤临床病理特征的关系.方法采用免疫组化方法,检测42例人脑胶质瘤组织中Ang-1和Ang-2蛋白的表达.结果Ang-1、Ang-2蛋白在胶质瘤细胞和血管内皮细胞中均有表达.Ang-1的表达水平与患者临床病理特征无明显相关性(P＞0.05).Ang-2蛋白表达水平与胶质瘤的临床病理分级、瘤周脑水肿程度显著相关(P＜0 01),而与患者性别、年龄、肿瘤大小无关.结论Ang-2过表达与临床病理分级和瘤周脑水肿密切相关,可能成为判断胶质瘤恶性进展和预后的重要指标.
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血清Ang-2在直肠癌患者术后病情监测中价值的研究
血管生成素(angiopoetin Ang)家庭是近年来发现的与血管生成及成熟密切相关的细胞因子,包括Ang-1、Ang-2、Ang-3与Ang-4,其中Ang-2的研究较多,而且主要集中于用免疫组化法检测Ang2在肿瘤组织中表达的情况,显示Ang-2与直肠癌、肝细胞癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱上皮癌等恶性肿瘤的生长和转移存在一定的相关[1-3],表明对恶性肿瘤有一定辅助诊断作用,但由于组织特异性差,血清Ang-2水平对相关恶性肿瘤的诊断价值不高.目前有关血管生成素2在直肠癌患者术后监测中的价值未见相关报道,对此我们进行了初步的探讨与分析,报道如下.
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肝细胞性肝癌血管生成因子的研究进展
肝细胞性肝癌(HCC)是常见的血管丰富的实体恶性肿瘤,其侵袭、转移及预后均与血管生成密切相关.HCC血管生成受诸多血管生成因子如血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源生长因子(PDGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管生成素(Ang)、转移生长因子(TGF),胰岛素样生长因子(IGFs)、小凹蛋白-1(Caveolin-1)等的影响.针对血管生成的靶向治疗药物索拉菲尼已被证实能延长晚期日CC患者的生存时间,为HCC的治疗开启了新篇章.
