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人角质细胞紫外线损伤模型筛选抗氧化剂的研究
目的 探讨利用人角质细胞系建立紫外线损伤模型,研究抗氧化剂对细胞的影响,以建立快速筛检方法.方法 体外培养HaCaT细胞,紫外线照射诱发氧化损伤模型,UVA及UVB照射强度分别为5和0.6 J/cm2.测试组分别更换含POCI和LBPC抗氧化剂的培养液,剂量为无细胞毒性的大浓度,同时设空白对照组、模型组和抗坏血酸阳性对照组.应用MTT(噻唑蓝)比色法、二氯荧光素(DCFH-DA)标记法、PI荧光素标记法和Annexinv/PI双染法,比较细胞活性、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和细胞周期及细胞凋亡等指标的变化.结果 紫外线可造成HaCaT细胞明显氧化损伤.测试组SOD水平与照射组相比明显升高(P <0.001);测试组ROS荧光强度、细胞凋亡率及S期细胞比例均显著降低(P<0.001).POCI抗氧化强度高于LBPC,两者均弱于VC.结论 应用紫外线损伤HaCaT细胞模型检测抗氧化剂的保护作用,可为抗氧化特性及强度的预测提供依据.
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组合体外与临床测试评价植物抗氧化剂抗老化功效
目的 基于非动物测试理念,研究植物抗氧化剂复配后的皮肤抗老化功效.方法 体外培养HaCaT角质细胞,紫外线照射诱发氧化损伤模型,分别加入白藜芦醇、原花青素和二者复配物,用MTT比色法、荧光素标记法和ELISA法检测细胞活性、活性氧簇自由基(ROS)、超氧化物岐化酶(SOD)、细胞周期及细胞凋亡的变化.对含两种植物原料的眼霜配方进行鸡胚尿囊膜血管试验(CAMVA)和牛角膜混浊渗透试验(BCOP)的组合测试评价其眼刺激性.选择平均年龄40岁的女性志愿者25名,眼部连续使用该眼霜60 d,于使用产品的第0、30和60 d分别检测皮肤的水份、水份流失、弹性和肤色等皮肤老化相关指标.结果 白藜芦醇-原花青素复配的植物抗氧化剂可明显缓解紫外线造成的HaCaT细胞氧化损伤,SOD水平明显升高(P<0.001),ROS荧光强度、细胞凋亡率及S期细胞比例均明显降低(P <0.001),细胞修复作用强于单独作用.经过替代方法组合评价其安全性后进行临床志愿者测试,证明皮肤保湿、弹性和皮肤颜色等指标得到改善.结论 白藜芦醇和原花青素两种植物抗氧化剂复配使用可有效减少皮肤氧化应激和明显改善皮肤性能.
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消风散对Ⅳ型变态反应中白细胞介素10的影响
白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)是体内重要的炎症反应抑制因子,主要由Th2细胞产生,还可来源于Th0细胞、某些Th1细胞、单核-吞噬细胞、B细胞淋巴瘤、肥大细胞及角质细胞.目前国内外对Ⅳ型变态反应中IL-10表达的研究报道较少.消风散是临床上治疗急性荨麻疹、湿疹、神经性皮炎的常用方剂,本文研究消风散对Ⅳ型变态反应中IL-10生成的影响,探讨作用机理,为临床应用提供实验依据.
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白细胞介素-10检测及其临床意义
白细胞介素-10(简称白介素-10,interleukin-10,IL-10)是具有多种生物功能的细胞因子,它与机体自身免疫疾病、感染性疾病和肿瘤等有着密切关系.IL-10主要由单核细胞,巨噬细胞,肥大细胞,T、B淋巴细胞和激活的角质细胞产生.人的IL-10是一种单肽链的,由160个氨基酸组成的酸性蛋白,分子量为18.7kD(不包括N端18个氨基酸构成的信号肽序列),等电点为8.1,通常为二聚体(39kD).人IL-10和鼠IL-10核苷酸序列同源性达81%,氨基酸序列同源性达73%.人IL-10对人细胞和小鼠细胞均有作用,小鼠IL-10只对鼠细胞有作用,而对人细胞无作用.
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银屑病生物治疗研究进展
当前医学界一致认为,银屑病是一种T细胞引发并维持的自身免疫性疾病,病人机体免疫系统紊乱,健康细胞受到攻击,造成临床上典型的皮肤鳞屑性炎症病变[1].这种慢性炎症性疾病的病理过程包括T细胞浸润、真皮血管的改变、表皮角质细胞过度增生和异常分化.其中参与银屑病发病的T细胞大致经历3个阶段的变化:T细胞(CD45RO+)的初始活化:T细胞迁移至病变皮肤;活化T细胞释放细胞因子发挥促增殖功能.真皮内的CD4+T细胞及其产生的细胞因子是银屑病发病的中心环节,角质细胞与血管内皮细胞的变化只是继发于细胞免疫机制异常的一种改变[2].
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模拟失重对HaCaT细胞增殖及细胞骨架的影响
目的 研究模拟微重力环境对人永生化角质形成细胞(HaCaT)生长增殖及细胞骨架的影响.方法 应用RCCS建立模拟微重力细胞培养系统,将HaCaT细胞随机(随机数字法)分为模拟微重力组(SMG)和正常重力对照组(NG),经32 h、36 h和42 h培养后收集两组细胞,应用流式细胞仪技术检测细胞生长周期;ELISA检测细胞上清液hb-EGF浓度;激光共聚焦显微镜和荧光素FITC标记技术观察经42 h培养的两组HaCaT细胞骨架形态变化.采用SPSS 23.0统计学软件进行统计学分析,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 流式细胞仪检测结果显示,与NG组比较,SMG组HaCaT细胞经32 h、36 h和42 h培养,三个时相点的G1和G2/M期细胞数显著增加,S期细胞数显著减少(P<0.05).SMG组HaCaT细胞随培养时间延长,G1期细胞数呈减少趋势.ELISA结果显示,SMG组HaCaT细胞经32 h和36 h后hb-EGF浓度较NG组明显下降(P<0.01).激光共聚焦显微镜观察荧光素FITC标记的HaCaT细胞,发现模拟微重力培养42 h后,HaCaT细胞的荧光强度减弱,微丝排列紊乱,结构破坏明显,部分模糊不可见,细胞间伪足较少且不规则.结论 RCCS模拟微重力环境抑制HaCaT细胞周期转化和增殖,影响hb-EGF自分泌机能,并导致细胞骨架结构发生变化.
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调宁蛋白的研究进展与展望
自从20世纪80年代Takahashi等[1]从鸡砂囊平滑肌组织中提纯出调宁蛋白(Calponin),随后渐证实心脏、血管、胃、子宫、输尿管、膀胱和输精管等组织的平滑肌细胞中均有Calponin表达.非肌细胞(成纤维细胞、上皮角质细胞等)内也有Calponin的表达[2].目前对于Calponin的研究已涉及各种器官的平滑肌、血管平滑肌、肾间质细胞、癌细胞等领域[3].本文就它的研究所涉及的内容作一综述.
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整合素及其与创面修复关系的研究进展
皮肤损伤后其创面的修复过程一般包括表皮的再生和真皮的重构.表皮的再生主要依靠位于表皮基底层细胞的增殖,分化为成熟的角质细胞,而真皮的构建则靠刨底成纤维细胞不断合成胶原等细胞外基质并重新排列形成.
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参与创面修复的干细胞及其在创面修复中作用的研究进展
皮肤作为人体大的器官,在抵御外界病菌入侵、调节体温、感觉等方面有重要作用.通常情况下,皮肤的表皮处于动态的更新状态,新生的表皮细胞取代老化脱落的角质细胞,这个过程与定位于表皮基底部的表皮干细胞密切相关,基底表皮干细胞的增殖同表皮脱落的细胞处于动态平衡,这一平衡维持着皮肤正常的组织结构和细胞内环境的稳定.
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浅谈表皮干细胞传代于脱细胞真皮基质所形成的复合皮的体会
20世纪70年代发明了自体表皮干细胞培养技术,逐渐应用于临床,但是南于自体表皮细胞缺乏真皮结构,收缩性大,不易转移和固定,移植后很脆弱,抗感染能力差,导致其移植成功率很不稳定,成活以后易产生严重的瘢痕,因此单纯的角质细胞培养和移植临床很少应用.将表皮干细胞传代于脱细胞真皮基质形成的复合皮移植效果较单纯的角质细胞明显提高,为烧伤患者的皮肤再生提供新的方法.
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国外学者讲学摘录表皮的显微解剖学
一、表皮 表皮由四层处于不同分化阶段的细胞组成,基底层分隔了真皮和表皮。基底细胞通过不断增殖为上面的分化层提供新的细胞来源。基底细胞是大的柱状细胞,相邻的基底细胞间通过桥粒连接,而它们与基底膜的连接是由半桥粒、板层素以及整合素调节。基底层包含一个主要由角蛋白K5、K14构成的广泛的角蛋白网。细胞从基底层向上迁移,逐步成为一个完全分化的角质细胞,终脱落。 细胞一旦离开基底层进入棘层(SP),就失去了分裂的能力,细胞增大、变平,含水量不断减少;具有增殖特异性的角蛋白K5、K14合成终止,角蛋白K1、K10聚集形成纤维细丝。棘层中还有角化包膜的前驱物包壳蛋白(involucrin)以及一些谷氨酰转化酶,它们的功能是将ε-(γ-谷氨酰)赖氨酸交链整合入不溶性的角化包膜中。棘层的角质形成细胞含有可溶性谷氨酰转化酶及膜结合性谷氨酰转化酶。膜结合性谷氨酰转化酶与分化程度相关,它们与角化包膜的形成有关。
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角质细胞与成纤维细胞混合移植修复裸鼠全层皮肤缺损的初步报告
目的利用组织工程原理探讨修复全层皮肤缺损的理想方法.方法以裸鼠为动物模型,在皮肤全层缺损区域分别移植纤维蛋白胶(n=10),纤维蛋白胶角质细胞悬液(n=10),纤维蛋白胶成纤维细胞悬液(n=10)以及纤维蛋白胶角质细胞成纤维细胞悬液(n=10),术后每天对伤口进行大体观察,第5,7,10,14,21,35d,分别取材活检行组织学及免疫组织化学检查.结果移植有角质细胞组(2和4组)的创面愈合快,术后10d组织学提示创面完全上皮化,抗人特异性HLA-1型抗原、抗involucrin染色和抗Ⅶ型胶原染色阳性证明新生上皮由移植的人角质细胞形成,抗involucrin染色阳性又证明角质细胞分化成熟有角质层形成,抗Laminin染色、抗Ⅶ型胶原染色阳性提示早期基底膜形成.组织学检查提示第4组新生上皮有许多类似皮钉样结构.结论培养的角质细胞,成纤维细胞结合纤维蛋白胶移植到创面上后,可以形成复层分化良好、接近正常结构和功能的新生皮肤组织.
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当归多糖通过抑制角蛋白17表达抑制角质形成细胞的增殖活性
目的:探讨当归多糖(Angelica sinensis polysaccharides,ASP)对角蛋白17(K17)介导的人角质形成细胞生长和增殖影响.方法:用不同浓度(1,0.5,0.1,0.05 mg/mL) ASP处理人乳头瘤病毒(HPV)11型基因组的HaCaT细胞(HPV11.HaCaT) 24 h,qRT-PCR与Western blot检测K17水平变化,1 mg/mL ASP处理HPV11.HaCaT细胞Western blot检测ki--67和PNCA的表达;MMT试剂盒检测1 mg/mL ASP处理下HPV11.HaCaT细胞增殖活性变化.构建K17过表达(pcDNA3.1(+)/K17)载体并转染KC细胞48 h继续用ASP(1 mg/mL)处理24 h;检测K17的水平变化及细胞增殖活性变化.结果:使用1 mg/mL ASP抑制HPV11.HaCaT细胞中K17表达,差异具有统计学意义(P<0.05),呈浓度依赖趋势.qRT-PCR及Westemblot检测发现1 mg/mL ASP使K17、Ki67及PNCA的表达显著下调,差异具有统计学意义(P<0.05).ASP作用下,HPV 11.HaCaT细胞增殖率均下调(P<0.01).pcDNA3.1(+)/K17对HPV11.HaCaT细胞增殖率的促进作用被ASP阻断,差异具有统计学意义(P<0.01).结论:ASP通过抑制K17抑制角质形成细胞增殖,为银屑病和尖锐湿疣基础研究与临床治疗提供前期研究基础.
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去角质——剥掉肌肤的“蛋壳”
角质的危害当年龄增长或者其他原因导致皮肤代谢不规律的时候,角质层细胞无法进行正常的新生与脱落相交替的过程.多余的角质细胞"半粘附"在表层,很可能会堵塞毛孔带来黑头粉刺,还会导致皮肤失水和代谢不均衡而产生皱纹,同时形成一道过厚的屏障而影响其他美容护肤品的吸收.由此可见,适当的去角质工作是十分必要的.
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干扰素γ对角质细胞与破骨细胞的影响
干扰素γ(IFN-γ)是Thl细胞的标志性细胞因子,与机体多种疾病的发生有密切关系.IFNl可以通过促进角质细胞的增生并抑制其凋亡,刺激破骨细胞的形成,在银屑病、特异性皮炎等的上皮增生及类风湿性关节炎、骨质疏松等的骨质破坏过程中发挥重要作用.本文就IFN-γ对角质细胞与破骨细胞的影响及其在中耳胆脂瘤发病中的作用予以概述.
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食物过敏与慢性咳嗽的研究
食物过敏(food allergy)是儿童期常见病。美国近的一项流行病学发现,5岁以下儿童食物过敏患病率5%,青少年和成人患病率4%[1];国内有学者研究小于2岁婴幼儿患病率为5.2%,小于1岁婴儿患病率为6.1%,其中4-6个月为食物过敏的高发年龄[2]。目前为食物过敏的治疗除饮食回避尚可口服白三烯拮抗剂,越来越多的有关食物过敏的治疗,引起注意,白细胞介素10(IL-10)是Fiorentino等1989年发现的由小鼠辅助T淋巴细胞2(T h2)分泌的一种物质,可抑制辅助淋巴细胞1(Th1)细胞因子分泌。T细胞、单核巨噬细胞、B细胞、肥大细胞、树突细胞、嗜酸细胞、角质细胞、肝细胞、星状胶质细胞、垂体和下丘脑细胞、支气管上皮细胞、肿瘤坏死因子均可产生白介素10(IL-10)。
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妊娠期阴道炎
妊娠期孕妇体内呈高雌激素状态,高雌激素有利于阴道内厌氧菌的生长,阴道上皮细胞糖原积累增多,经乳酸杆菌分解产生乳酸增多,有利于适应酸性环境的病原体生存,也有利于减少细胞表面负电荷和去除覆盖于阴道上皮角质细胞受体表面的糖基,有助于病原体的黏附,易于感染;另外妊娠期白带增多,阴道外阴湿润也有利于病原体繁殖.
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美丽新妈妈
脸补水保湿去角质皮肤表面覆盖着一层由皮脂、角质细胞和汗液组成的薄膜,具有滋润皮肤的作用,而且角质层中有自然保湿成分,使水分得到了保持,如果角质层中水分下降到正常的10%~20%时,可能出现皮肤干燥、粗糙.在妊娠后期以及分娩后,由于受到内分泌的影响,暴露的面部皮肤水分蒸发加快,皮肤角质层水分缺乏,开始出现肌肤衰老的迹象,皮肤不再像往日那般柔滑细致,脸上肤色开始不均匀,肌肤对护肤品的吸收也不好.
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组胺对皮肤肿瘤坏死因子受体分布的影响的实验研究
目的探讨人皮肤角质细胞TNFR的分布和炎症介质组胺对其分布的影响.方法依据Tellides成熟实验模型,将人皮肤移植于免疫缺陷小鼠上,分别注入等量10 ml组胺或生理盐水,然后制成共聚焦荧光显微镜和电镜标本观察.结果正常皮肤TNFR2阳性反应细胞较少,TNFR1阴性细胞数量较多,阳性反应主要见于角质细胞的胞质和膜;组胺刺激后角质细胞质和膜的TNFR1消失,主要分布在角质细胞间隙.结论组胺可使角质细胞质和膜上TNFR1消失,移位于细胞间隙.
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体外构建3D人工皮肤
背景:已有研究采用3D打印人工皮肤,但存在皮肤表皮层不能分化为多层等缺陷。目的:优化人工皮肤的构建方法,获得更好的人工皮肤。方法:从牛尾和鼠尾中分别提取与纯化胶原。从儿童包皮组织中分离培养原代成纤维细胞和角质细胞,再以牛尾(或鼠尾)胶原包埋成纤维细胞,构建真皮层;将角质细胞接种于含鼠尾(或牛尾)胶原包埋的成纤维细胞上培养7 d,再气提培养7 d,获得人工皮肤。观察人工皮肤的收缩性、水接触角,并进行苏木精-伊红染色、天狼猩红染色及免疫荧光染色。结果与结论:①鼠尾胶原构建人工皮肤真皮层面积下降了50%,牛尾胶原构建人工皮肤真皮层面积只下降了21%;②牛尾胶原构建人工皮肤的接触角与人皮肤接近,比鼠尾胶原构建人工皮肤的疏水性更好;③天狼猩红染色结果显示,与鼠尾胶原构建的人工皮肤相比,牛尾胶原构建人工皮肤的胶原折光性更强,胶原排列更有序,纤维更粗;④苏木精-伊红染色显示,与鼠尾胶原构建人工皮肤相比,牛尾胶原构建人工皮肤真皮层的表皮可形成更多层;⑤结果表明,将角质细胞接种于牛尾胶原包埋的成纤维细胞上,可构建更好的人工皮肤。