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人卵泡液抑制素B的分离与鉴定
目的 探讨人卵泡液抑制素B(INH-B)的分离纯化方法. 方法 收集25例育龄期女性成熟卵泡液,分别用乙腈、丙酮、乙醇3种试剂处理样品,富集低丰度蛋白,经蛋白浓度测定和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,比较3种方法对高丰度蛋白去除效果.再通过二乙基氨乙基(DEAE)阴离子交换柱和蛋白质等电点分离法分离目的蛋白. 结果 采用乙腈沉淀法能去除卵泡液样品中约88.7%的高丰度蛋白.并用乙腈富集、阴离子交换柱分离、等电点分离的“三步分离法”分离人卵泡液后,INH-B蛋白回收率为38.7%,等电点为4.55. 结论 乙腈沉淀法是一种较为有效的去除样品中高丰度蛋白、富集低丰度蛋白的方法.乙腈富集、阴离子交换柱分离、等电点分离的“三步分离法”能初步纯化获得人体天然INH-B蛋白分子粗制品,纯化回收率达38.70%.
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地龙脱氧核糖核酸酶的部分性质研究及作用初探
目的 研究地龙体内两种新型脱氧核糖核酸酶(LDs)的部分生化性质,并对其作用进行初步探索.方法 采用Sephacryl-200柱层析、毛细管等电聚焦电泳法、琼脂糖凝胶电泳等方法.结果 初步得出LD1、LD2分子量为126、62 kDa;确定了等电点分别为6.12、6.05.LD1、LD2对细菌质粒DNA、λDNA均有分解作用.结论 地龙中的LDs是一种新型的脱氧核糖核酸酶.明确LDs的分子量、等电点有助于优化LDs的提取工艺以及LDs的进一步研究.对细菌质粒DNA、λDNA的降解提示LDs有可能对抗细菌的耐药性.
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LSAB法在视网膜母细胞瘤研究中的应用
免疫细胞化学技术是利用免疫反应定位细胞和组织中的抗原成分的一门技术,已经成为基础和临床研究的重要手段.自20世纪80年代Hsu[1]等创立了ABC法以来,免疫组织化学染色技术在全世界都得到了广泛的应用.该法需要预先形成复合物而导致自身体积增大,行动缓慢,难以很快形成对组织的渗透;由于含有糖基,易与组织中含糖基的组织起反应,造成背景的染色;由于等电点高,可带较多的负电荷,易与组织中带正电荷的组织发生吸引而造成背景染色[2].
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白细胞介素-10检测及其临床意义
白细胞介素-10(简称白介素-10,interleukin-10,IL-10)是具有多种生物功能的细胞因子,它与机体自身免疫疾病、感染性疾病和肿瘤等有着密切关系.IL-10主要由单核细胞,巨噬细胞,肥大细胞,T、B淋巴细胞和激活的角质细胞产生.人的IL-10是一种单肽链的,由160个氨基酸组成的酸性蛋白,分子量为18.7kD(不包括N端18个氨基酸构成的信号肽序列),等电点为8.1,通常为二聚体(39kD).人IL-10和鼠IL-10核苷酸序列同源性达81%,氨基酸序列同源性达73%.人IL-10对人细胞和小鼠细胞均有作用,小鼠IL-10只对鼠细胞有作用,而对人细胞无作用.
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冰醋酸在苏木精和伊红染色中的不同作用
1材料与方法1.1材料标本来自武钢总医院2010-2011年间临床手术切除和门诊活检组织,包括各种肿瘤组织以及胆囊、阑尾、甲状腺、胃肠镜活检组织等.1.2方法标本经4%甲醛固定,乙醇脱水,二甲苯透明,浸蜡,包埋,切片厚3 ~4 μm.镜下比较未经冰醋酸酸化处理的苏木精和伊红染液与已经酸化处理的染液的不同染色效果.1.3试剂Harris苏木精:苏木精2.5g,纯乙醇25 ml,蒸溜水500 ml,钾明矾50 g,氧化汞1.25 g,冰醋酸20 ml;伊红染液:伊红20 g,蒸馏水500 ml,冰醋酸5ml[1].
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嗜麦芽寡养单胞菌所产金属β-内酰胺酶的特性
嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)是一种条件致病菌,对临床常用抗菌药物耐药.产金属β-内酰胺酶(MBL)使其对卡巴培南类及头孢菌素类耐药.我们采用纸片协同法筛选出产MBL的可疑菌株,以等电聚焦确定其等电点,并对MBL基因进行克隆、测序,从生化及分子水平了解嗜麦芽寡养单胞菌所产金属β-内酰胺酶的特性.
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SARS-CoV E蛋白基因的扩增及原核表达载体的构建
加拿大英属哥伦比亚癌症研究所基因组科学中心已完成了SARS冠状病毒的全基因组测序(基因库登录号:AY274119).SARS-CoV基因组编码包括S蛋白、M蛋白、N蛋白和E蛋白等结构蛋白质.E蛋白是小的结构蛋白(为糖蛋白),散布于SARS病毒的包膜,疏水性强,其核苷酸序列为231bp,编码76个氨基酸,其等电点为6.01,相对分子质量为8.361×103.推测E蛋白的作用有利于病毒形状的形成,在病毒颗粒形成过程中起主要作用.本文利用已公布的SARS-CoV基因组序列,克隆了E蛋白基因,以期为深入研究E蛋白的生物学功能和药物或疫苗开发提供研究基础.
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一种新基因型SHV-28 β-内酰胺酶的发现及其特性的初步研究
目的鉴定产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的肺炎克雷伯菌SHV型β-内酰胺酶(BLA)的编码基因、BLA亚型并初步研究其特性.方法聚合酶链反应(PCR)扩增BLA编码基因片段,克隆入pGEM-Teasy载体,双脱氧链终止法测定核苷酸序列、确定亚型,并做接合试验.结果临床分离的8株肺炎克雷伯菌,均产生SHV型BLA,其扩增片段含812个核苷酸,核苷酸及相应的氨基酸序列经GenBank查询无相同序列,为新发现的一种BLA SHV-28型(GenBank注册号:AF299299).接合试验的结果证明耐药基因位于质粒上.结论 8株临床分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌的产BLA为SHV-28亚型,为新发现的一种新型BLA.
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蚌埠地区CTX-M型超广谱β内酰胺酶的检测
由质粒介导的超广谱β内酰胺酶(ESBLs)自1983年在德国首次报道以来,全世界许多地方不断有新的ESBLs检出,迄今为止已有200多种ESBLs,主要包括TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型及其他型别的ESBLs [1].1990年德国的Bauemfeind首先报道了一种对头孢噻肟有高度水解活性、高等电点的ESBLs(CTX-M-1).
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医院内革兰阴性杆菌产生β-内酰胺酶的特点
医院内革兰阴性杆菌对β-内酰胺类耐药的主要机制是这类细菌产生β-内酰胺酶,令人瞩目的是它们产生的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶和碳青酶烯酶,它们可以不同程度地水解超广谱头孢菌素和碳青酶烯类.以下综述文献已经发表的β-内酰胺酶,包括:SHV型,TEM型,OXA型,CTX-M型,质粒介导的头孢菌素酶和碳青酶烯酶的种类,发现地,发现或报道的时间及等电点[1].
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运动对骨骼肌肌动蛋白的影响
肌动蛋白(actin)是真核细胞中一种重要蛋白质,它参与几乎所有形式的细胞及细胞器的运动,特别是作为一种收缩蛋白在骨骼肌的活动中发挥重要作用.目前至少已分离出6种肌动蛋白,包括两种横纹肌型(骨骼肌型α-actin和心肌型α-actin)、两种平滑肌型(内脏型或称小肠型、胃型和血管型或称主动脉型)和两种非肌型肌动蛋白(β-actin和γ-actin)[1~4].各型间略有差异,但分子量基本相同,为42KDa,含374-375个氨基酸,其编码序列高度保守,但非翻译区序列变化较大.不同肌动蛋白的PI值相近(约为5.4),但由于N端酸性氨基酸数目、特点不同而稍有差异,其中α-、β-、γ-actin的等电点依次上升,这也是它们命名的依据[2].
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革兰阴性菌产AmpC酶的研究进展
1 AmpC酶的基本特性AmpCβ-内酰胺酶是一族由革兰阴性杆菌产生的、具有碱性等电点、不被克拉维酸抑制而能被氯唑西林抑制的"丝氨酸"头孢菌素酶,按功能特征分类属Bush-J-M 1组,按分子结构分类属Ambler C类.分子量通常在32~41kD之间,个别质粒介导的AmpC酶分子量达到42~43kD.高产此类酶可以导致细菌对除第四代头孢菌素和碳青霉烯类抗生素外的几乎所有β-内酰胺抗生素产生耐药.
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重组人促红素异构体唾液酸化程度分析
目的 检测分析重组人促红素(rhEPO)各异构体唾液酸化程度.方法 用全柱成像毛细管等电聚焦电泳检测rhEPO原液的异构体等电点并计算分析异构体上电荷分布规律;用《中国药典》三部附录方法测定rhEPO总唾液酸化程度,再用多元线性回归拟合分析rhEPO各异构体的唾液酸化程度.结果 在等电点3.6~5.1内定义并区分各异构体1~9,分析结果显示,相邻异构体唾液酸化程度相差l唾液酸分子.主要4个异构体(4 ~7)唾液酸化程度分别为13、12、11和10(mol/mol).结论 为rhEPO生物相似性评价提供支持,也为进一步解析rhEPO各异构体唾液酸组成形式分析奠定基础.
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浅评全国医药中等专业学校统编教材《药剂学》(缪立德主编.北京:中国医药科技出版社,1999年5月第2版)
全国医药中等专业学校统编《药剂学》教材是供药物制剂工艺等相关专业使用的教学书籍。该书内容丰富、全面,注重理论联系实际,通俗易懂,既突出了中专教学特点,又反映出了药剂学发展的现代信息,这是一本较好的教科书。但粗读后,发现尚存有不足之处,从爱护该书的愿望出发,提出几点意见与作者和读者商榷,供再版时参考。1 部分内容论述欠妥或有误1.1 20页倒数13~14行和48页倒数6~8行有两处提到“蛋白质在酸性溶液中带正电荷,在碱性溶液中带负电荷”,此种说法不妥。因为蛋白质在溶液中带电情况取决于溶液的pH值是大于、等于还是小于其等电点,而不决定于溶液的酸性或碱性。即溶液pH等于等电点,其分子呈中性不荷电;当溶液的pH值>等电点时,蛋白质带负电荷;当溶液的pH值<等电点时,蛋白质带正电荷[1]。1.2 54页第14行和188页倒数15行等多处把混悬液型液体药剂的分散介质(分散媒)说成“溶媒”或“溶剂”欠妥。因为溶剂是溶液体系的组成部分,系指能溶解其他物质的物质。
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异质性胞核核糖核蛋白、小核核糖核蛋白与自身免疫性疾病
在真核细胞,异质性胞核核糖核蛋白(heterogenous nuclear ribonucleoprotein,hnRNP)与小核核糖核蛋白(small nuclear ribonucleoprotein,snRNP)共同参与mRNA成熟的过程.研究发现,hnRNP复合体家族至少包含20种以上功能各异的RNA结合蛋白,它们的分子大小及等电点均不相同.
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国人眼中的食性·酸碱平衡与生命现象(之八)
第五章蛋白质体存在的形式与酸碱度变化之关系(接上期)蛋白质的等电点随离子强度、中性盐以及溶解性质而变化,这又引出一系列的复杂问题.
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胰岛素类似物的结构设计与药代动力学
1概述目前使用的人胰岛素制剂有可溶性胰岛素和结晶胰岛素两种.可溶性胰岛素为短效制剂,等电点为5.3,以六聚体形式溶解于Ph中性溶液中,皮下注射后,六聚体需分解为单体才能较快的吸收入血.中效胰岛素(NPH)为人胰岛素以六聚体形式与鱼精蛋白结合形成的结晶体,不溶于水,因而皮下注射后需要更长的时间解离成单体.其起效时间为1.5 h,作用高峰在4~12 h.
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孕妇PAPP-A测定筛查异常妊娠
妊娠相关血浆蛋白A(Pregnancy associated Plasma Protein A,下称PAPP-A)是一种由胎盘滋养层合体细胞和蜕膜细胞产生的糖蛋白.70年代,Lin等从孕妇血浆分离并命名.PAPP-A分子量820KDA,等电点4.42,含糖量19.4%[1].
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细胞角蛋白在口腔粘膜癌变过程中的变化
细胞角蛋白(CK)是中间丝蛋白的主要组成成份,主要表达于上皮细胞,随细胞类型和分化程度不同而表达类型有差异.根据其分子量(MW)和等电点不同分为两型[1],Ⅰ型为酸性,MW为40~64kd,包括编号9~20(K9~K20)的角蛋白多肽,Ⅱ型为中性或碱性,MW为52~68kd,包括编号1~8(K1~K8)的角蛋白多肽.通常CK在上皮中以 "角蛋白对"的形式表达,角蛋白对由一个Ⅰ型角蛋白分子和比其大8kd的Ⅱ型角蛋白分子构成.CK具有高度的细胞和组织特异性.近来发现口腔粘膜癌前病变和癌中的CK发生了改变 ,本文对这种变化及其意义进行综述.
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牛奶中酪蛋白结果分析
目的 通过对市售牛奶采用索氏(Soxhlet)法和等电点法分别测定牛奶中酪蛋白的结果和对比分析,揭示这两种测试方法的优缺点.方法 采用索氏(Soxhlet)法抽提粗脂肪,即利用低沸点的有机溶剂(乙醚或石油醚)回流抽提,除去有机溶剂,以增加油的重量来计算粗脂肪的含量.利用在PI时溶解度低的原则,将酪蛋白沉淀,用乙醇洗涤沉淀物,除去脂类杂质后得到纯的酪蛋白,并利用紫外吸收光谱法来测定蛋白质的含量.结果 两种方法测定牛奶样品中酪蛋白含量分别为等电点法2.33 g/100 mL,索氏抽提法0.730 g/100 mL,均低于牛奶包装袋上所标注的牛奶中的3.5 g/100 mL.结论 所测市售蒙牛袋装牛奶的营养成分基本符合标准.奶中酪蛋白测定索氏法测定结果排除了脂肪干扰,其值略低,但更合理.
关键词: 酪蛋白 粗脂肪 等电点 索氏(Soxhlet)抽提法 紫外吸收光谱法