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大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、纯化和鉴定

张雪梅;陈海龙;王朝晖;张利;纪军

摘要: 目的:探讨大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)分离、培养及鉴定的方法.方法:采用Dobbs法提取ATⅡ.肺动脉灌洗减少肺内红细胞,气管灌洗除去肺泡腔内的白细胞,将胰蛋白酶、胶原酶灌入肺内消化分离细胞;采用免疫贴附法纯化细胞,将细胞悬液培养于覆被IgG的平皿中,有Fc段受体的细胞被黏附,而无Fc段受体的ATⅡ得以纯化.ATⅡ的鉴定采用电镜和肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)免疫组化染色,其在电镜下有特征性板层小体,免疫组化染色见胞浆有SP-A表达.结果:纯化后台盼蓝染色显示细胞活力为95%以上.通过SP-A免疫组化染色判定,纯化后ATⅡ纯度可达92%.结论:分离、纯化大鼠ATⅡ时,合适的胰蛋白酶浓度及作用时间对细胞活性有重要作用,大鼠IgG黏附纯化可以得到高纯度的ATⅡ,通过电子镜观察板层小体和免疫组化染色检测细胞SP-A表达可用于鉴定ATⅡ.

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