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男性不育患者Y染色体无精子因子基因微缺失的研究
目的 探讨川南地区无精子症及严重少精子症患者Y染色体无精子因子(azoospermia factor,AZF)区微缺失的位点及其特点.方法 采用多重PCR技术对134例无精症患者、90例严重少精症患者和70名正常男性进行Y染色体AZF区18个序列标签位点(sequence tagged site,STS)的检测.结果 在224例患者中,AZF缺失率为12.1％(27/224),其中无精症患者缺失率为13.4％(18/134),严重少精症患者缺失率为10.0％(9/90).AZFc区缺失为常见的缺失类型,占51.9％.选用18个STS位点的检出率比欧洲男科学会和欧洲分子遗传实验质控网推荐的6个STS位点提高约22.7％(5/22).正常对照组未发现Y染色体微缺失.结论 Y染色体微缺失检测对诊断男性不育具有重要价值,AZFc区是川南地区男性不育患者Y染色体微缺失的缺失热区.增加STS位点检测数在一定程度上提高缺失检测的可靠性及检出率.
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一例严重少弱精症患者的遗传学研究
目的 对1例严重少弱精症患者进行遗传学病因诊断.方法 应用染色体显带及荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测,分析患者染色体畸变的来源及结构特征,并采用多重PCR技术对Y染色体无精子因子(azoospermia factor,AZF)进行微缺失检测.结果 患者G显带核型为45,X,der(15)(?∶∶p11.2 →qter) dn；双色FISH结果提示15号染色体短臂上的未知来源片段包含性别决定基因(sex-determing region of Y chromosome gene,SR Y),同时提示存在镶嵌型性染色体数目异常,结果描述为:nuc ish(DXZ1×1,SRY×1)[390]/ (DXZ1×2,SRY×1)[10];四色FISH结果提示15号衍生染色体为Y与15号染色体易位形成的假双着丝粒染色体,结果描述为:45,X,der(15)(?∶∶p11.2→qter) dn.ishpsudic(15;Y)(p11.2;q12) (D15Z1+,SNRPN+,PML+; SRY+,DYZ3+,DYZ1+). AZF微缺失的多重PCR检测结果显示AZFc部分缺失,缺失位点在sY254.结论 综合细胞与分子遗传学检测结果,该患者患不育症的遗传学病因为:Y与15号染色体易位形成的假双着丝粒染色体,以及AZFc部分缺失,影响正常的减数分裂过程而导致精子生成阻滞.
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男性不育人群17个Y染色体短串联重复基因座无效等位基因分析
目的 探讨17个Y染色体短串联重复(Y-short tandem repeat,Y-STR)在遗传缺陷相关的男性不育群体中基因座分型时无效等位基因现象.方法 应用改良多重PCR体系进行序列标签位点(sequence tagged sites,STS)检测,对236例非梗阻性无精、严重少精男性个体进行Y染色体无精子症因子(azoospermia factor,AZF)微缺失检测及分型；应用AmpFISTR(R) YfilerTM体系在上述人群中进行17 Y-STR(DYS19、DYS389Ⅰ、DYS389Ⅱ、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS437、DYS438、DYS439、DYS385a/b、DYS448、DYS456、DYS458、DYS635、Y-GATA-H4)基因分型.结果 上述人群中AZF的总缺失率为16.95％(40/236):非梗阻性无精症患者存在13例AZFc缺失,6例AZFb+c缺失,2例AZFa缺失,1例AZFb缺失.严重少精子症患者存在17例AZFc缺失,1例AZFb缺失.未发现AZFa+b+c缺失.40例不育个体通过17 Y-STR检测在DYS438、DYS439、DYS437、DYS389Ⅰ、DYS389Ⅱ、DYS392、DYS385a/b、DYS448基因座发现了无效等位基因.2例AZFa缺失个体具有DYS438、DYS439、DYS437、DYS389Ⅰ、DYS389Ⅱ等位基因缺失；2例AZFb缺失个体具有DYS392、DYS385a/b等位基因缺失；30例AZFc缺失个体具有DYS448等位基因缺失；6例AZFb+c缺失个体具有DYS392、DYS385a/b、DYS448等位基因缺失.在其他男性不育个体中未见Y-STR缺失.结论 Y染色体AZF微缺失是无精症、严重少精子症的主要遗传因素,这种缺失造成法医学相关的Y染色体短串联重复基因座缺失,在性侵犯案件中可导致错误的解释.阐明Y-STR在男性不育人群中的异质性在法医DNA鉴定中可以更好地完善Y-STR数据库和提高STR数据的解释能力.
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1011例男性不育患者Y染色体无精子症因子微缺失的筛查与临床表型分析
目的 探讨四川地区近6年不育男性Y染色体无精子症因子(azoospermia factor,AZF)微缺失的发生率、缺失类型及其与临床表型的关系.方法 应用多重PCR方法对713例非梗阻性无精症和298例重度少精症的男性进行Y染色体AZF微缺失分析.结果 AZF总体缺失率为10.48％ (106/1011),其中非梗阻性无精症患者缺失率为11.08％ (79/713),重度少精症患者缺失率为9.06％ (27/298).AZFa与AZFb完全缺失者均表现为无精症.AZFc缺失为常见缺失类型且具有多种表型,占60.38％,其中37.50％的缺失者精液中有成熟精子.2例AZFb和1例AZFb-c部分缺失者精子密度呈轻度下降.结论 AZFc区是Y染色体AZF微缺失的缺失热点,AZFa或AZFb缺失者以及部分AZFc缺失者均表现为无精症.本研究进一步明确了AZF缺失基因型与表型的关系,证实Y染色体AZF微缺失检测对诊断男性不育具有重要的价值.
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无精子症遗传学病因及其与内分泌的关系
一致,其中,Klinefelter综合征及Y染色体AZFa+b+c区缺失对内分泌造成严重影响.
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25例无精症患者的分子细胞遗传学研究
目的 通过对无精症患者异常染色体及Y染色体(Yq11.2区段)无精症因子(azoospermic factor,AZF)微缺失的分析,探讨无精症与染色体异常的关系.方法 对25例原因不明的无精症患者进行G带染色体核型分析、荧光Q-显带、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)和AZF微缺失PCR检测.结果 25例原因不明的无精症患者中染色体核型异常7例,异常发生率为28%;对8例无精症患者进行AZF微缺失检测:AZF区微缺失2例,分别为AZFb(SYl27,SYl34)+AZFe(SY254,SY255)缺失、AZFe(SY243,sYl58)缺失.结论 染色体异常及Y染色体AZF微缺失是引起无精症并造成男性不育的重要原因之一,对无精症等不育男性患者在排除睾丸病变、阻塞性无精症、内分泌及免疫系统等临床病理学因素后,包括配偶有不明原因习惯性流产的男性均需做外周血染色体常规GTG-显带、荧光Q-显带检查.Q-带阴性的患者说明其Y染色体长臂缺失的断裂点高于Yq12,在Yq11.2区段,则需要结合FISH和AZF微缺失的PCR检测,以确诊Y染色体的微缺失区段,为患者的临床进一步治疗提供可靠的依据.
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液相芯片技术检测Y染色体无精症因子区域微缺失
目的 建立一种液相芯片技术检测Y染色体无精症因子区域微缺失诊断男性不育的新方法.方法 应用多重PCR和液相芯片技术,对178例无精症、134例少精症及严重少精患者和正常男性对照进行Y染色体微缺失检测.结果 在312例患者中发现40例Y染色体微缺失(12.8%),其中无精症患者中缺失率为14%(25/178),少精症患者缺失率为9.6%(11/114),严重少精症患者缺失率为20%(4/20).结论 应用液相芯片技术检测Y染色体微缺失,具有高通量、灵敏度高、特异性强、重复性好、快速简便、自动化等优点,与多重PCR相结合使对无精症和少精症的诊断更加准确、可靠.
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对一例无精症患者Y染色体大片段缺失断裂位点的分析
目的通过遗传物理图谱对Y染色体大片段缺失的断裂位点进行精确的定位,研究Y染色体无精子症因子(azoospermia factor,AZF)区域微缺失与无精症的关系.方法应用多重PCR在4组反应管中对AZFa区的序列标签位点(sequence tagged site,STS)即sY82, sY84, sY86, AZFb区的sY124, sY127, sY128, sY133, sY134, sY143, AZFc区的sY239, sY242, sY254, sY255和AZFd区的sY145, sY152共15个STS位点进行扩增,以性别决定因子为内控,根据多重PCR结果对sY82, sY86, sY85,sY84进行单独扩增.结果对照组中的15个STS位点及单独扩增的sY85中均有特异性扩增产物,而Y染色体异常患者样品仅有sY82,sY86扩增产物,其余呈阴性.从而将患者的近着丝粒端的断裂位点定位于sY86与sY85之间.结论本研究为该患者的Y染色体大片段缺失断裂位点的精确定位提供了直接的分子生物学证据,建立了近着丝粒端的缺失图谱,证明了该患者无精的原因为AZF基因缺失.
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男性不育患者Y染色体微缺失筛查方法的建立和初步应用
目的建立一套Y染色体微缺失的多重PCR筛查方法,对无精症或少精症男性不育患者进行Y染色体微缺失的常规筛查. 方法建立5套稳定和可靠的多重PCR筛查方法,对进行单精子卵细胞浆注射治疗的87例无精症和少精症患者及进行睾丸活检的30例无精症患者做Y染色体微缺失的检测. 结果共有19例发现微缺失(16.2%),其中61例少精症患者中发现11例(18.0%),56例无精症患者中发现8例(14.3%).结论 Y染色体微缺失的多重PCR筛查方法是易行和可靠的,对无精症和少精症患者有必要进行Y染色体微缺失的常规筛查.
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无精与严重少精症Y染色体AZF区域微缺失与生殖激素的关系
目的 探讨Y染色体AZF区域微缺失与生殖激素的关系.方法 应用多重PCR扩增对100例无精与严重少精症患者的4个区域15个位点进行AZF基因检测,并采用贝克曼全自动化学发光仪进行生殖激素的测定.采用Epidata建立数据库,应用SAS软件进行均数和方差分析F检验的统计分析.结果 100例患者中发生AZF微缺失的患者13例,检出率为13％.13例AZF微缺失情况:AZFa区缺失1例；AZFb+c+d区缺失4例；AZFc+d区缺失7例；AZFd区缺失1例.Y染色体AZFb+c+d区缺失患者的卵泡刺激素值(40.8±11.3)U/L显著高于无Y染色体缺失患者(16.7±14.3)U/L和AZFa区、AZFc+d区、AZFd区缺失患者(11.8±6.7)U/L,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 在无精与严重少精症患者中Y染色体的微缺失以AZFc区和AZFd区缺失常见,而Y染色体AZFb+c+d区的缺失可能是引起高卵泡刺激素的重要原因之一.
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全血直接多重PCR法快速检测Y染色体微缺失
目的 以全血为起始模板直接进行PCR多重扩增,建立一种快速、简便的Y染色体微缺失检测方法.方法 用作者自行研制的"HpH-Buffer",以不经基因组DNA提取的抗凝全血为模板直接进行多重PCR扩增.分别在5管中检测无精症因子(azoospermia factor,AZF)区域的a区、b区和c区共12个序列标签位点(sequence tagged sites,SIS).为保证方法有效性,加做Y染色体性别决定区(sex-determining region Y,SRY)和X/Y连锁锌指蛋白基因(X-linked or Y-linked zinc finger gene,ZFX/Y)作为内控.同时,为考察方法的准确性,对每例血液样本提取基因组DNA平行实验.结果 共检测了156例男性血液样本,每组实验均加做阳性对照(正常已生育男性样本)和阴性对照(正常女性样本),以保证实验有效性.结果表明,156例样本中有144例无缺失,AZFa区缺失1例,AZFb区缺失1例,AZFc区缺失7例,AZFb和AZFc区缺失1例,AZFa、AZFb和AZFc区全缺失2例.以全血为模板和以基因组DNA为模板进行扩增所得到的实验结果完全一致.结论 所建立的方法省略了DNA提取这一繁琐的步骤,减少了PCR实验过程中可能出现的污染,缩短了操作时间,节约了实验成本.可在2小时内完成所有检测过程,有效地提高了临床检测效率."HpH-Buffer"的试剂成本很低,全部检测成本与普通PER扩增基本相同.
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非梗阻性无精子症和严重少精子症患者Y染色体微缺失的研究
目的 探究非梗阻性无精子症和严重少精子症患者中Y染色体微缺失的情况.方法 利用多重PCR技术,对203例非梗阻性男性不育患者,包括125例无精子症患者和78例少精子症患者以及100位正常男性进行Y染色体微缺失检测.结果 203例患者中,发现22例(10.8％)患者存在Y染色体微缺失,其中,125例无精子患者中,共检测出12例Y染色体微缺失,缺失率为9.6％,78例严重少精子症患者中,共检测出10例Y染色体微缺失,缺失率为12.8％.AZFc区的缺失率高,严重少精子症患者仅发现存在AZFc区缺失,正常对照组中未发现Y染色体微缺失.结论 男性不育患者在施行卵胞浆内单精子注射(ICSI)或体外受精(IVF)技术之前,有必要进行遗传筛查和遗传咨询.
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唐氏综合征高危孕妇血浆中游离胎儿DNA的Y染色体微缺失筛查
目的 利用孕妇血浆中游离胎儿DNA在孕早期进行Y染色体微缺失筛查,诊断男性胎儿无精子症因子(AZF)缺失情况.方法 留取2013年6月～2014年8月参加产前检测的16～34孕周唐氏综合征筛查高危孕妇的外周血标本89例,提取出全血基因组DNA后利用Y染色体微缺失检测试剂盒检测AZF微缺失.结果 86例孕妇妊娠至胎儿出生,其中男胎孕妇45例,女胎孕妇41例.妊娠女性胎儿的孕妇血浆DNA仅扩增出ZFX/ZFY对照基因,而妊娠男性胎儿的孕妇血浆DNA同时扩增出SRY,ZFX/ZFY对照基因,且有3例样本检测出AZF基因微缺失.结论 通过提取孕妇血浆中游离胎儿DNA能够检测出胎儿是否伴有AZF基因微缺失,从而提前预测胎儿今后罹患生精障碍的风险.
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无精症及严重少精症Y染色体微缺失和生殖激素水平研究
目的 探讨少精症及严重无精症患者与Y染色体AZF基因微缺失的关系.方法 采用多重PCR方法对染色体核型正常的346例严重少精症和无精症患者进行Y染色体AZF基因微缺失检测,同时用化学发光法测定生殖激素水平.结果 346例患者中发现Y染色体微缺失患者17例,缺失率为4.9％,其中262例重度少精症中Y染色体微缺失14例(5.3％),84例无精症患者中Y染色体微缺失3例(3.6％).微缺失类型包括单纯AZFa微缺失2例;单纯AZFb微缺失3例;单纯AZFc微缺失11例;AZFb+ AZFc微缺失1例.30例精液正常者Y染色体均未发现AZF基因微缺失.生殖激素检测结果显示,Y染色体微缺失患者血清FSH,LH和T水平分别为18.76±9.62 IU/L,6.05±4.48 IU/L和378.54±158.98 mmol/L.与无微缺失患者相比,Y染色体微缺失患者血清FSH水平显著性升高(t=3.930,P=0.006)、T水平显著性降低(t=-2.602,P=0.011).结论 Y染色体微缺失及血清生殖激素水平异常与少精症、无精症密切相关,其中AZFc缺失为常见的类型.
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无精及少弱精症患者核型和Y染色体微缺失研究
目的 探讨无精、严重少弱精患者细胞遗传学和Y染色体微缺失之间的关系.方法 60例无精子或严重少弱精子患者均来自西京医院不孕不育门诊.采用G显带法分析外周血核型,多重PCR法检测Y染色体微缺失.结果 60例患者中,染色体检测出大Y 2例,易位2例,倒位1例,缺失1例,克氏征1例,常染色体多态性2例,共9例核型异常.检出Y染色体微缺失4例,其中2例为大Y患者,1例核型为46,XY,13P+,1例核型正常.结论 大Y与Y染色体微缺失存在一定相关性.
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严重少精子症及非梗阻性无精子症患者Y染色体微缺失分析
目的 探讨严重少精子症及非梗阻性无精子症与Y染色体长臂微缺失之间的关系.方法 该病例对照研究包括216例严重少精子症、189例非梗阻性无精子症患者及100例精液参数正常的对照.采用多重PCR对Y染色体AZFa、AZFb、AZFc及AZFd区域进行检测.结果 在严重性少精子症患者中,AZF总缺失率为10.65%(23/216),其中以AZFc区缺失常见,占缺失的78.26%(18/23);在非梗阻性无精子症患者中,AZF总缺失率为13.76%(26/189),其中也以AZFc区缺失常见,占缺失的57.69%(15/26);在正常对照中发现1例AZFb缺失,两病例组AZF区缺失分别与对照组相比较均具有显著差异(χ2=9.066,P=0.003;χ2=10.74,P=0.001).结论 通过对Y染色体微缺失的检查可以从基因水平寻找生精障碍的原因以及为优生优育提供可靠的遗传信息依据.
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多重PCR-毛细管电泳法检测Y染色体微缺失
目的:对多重PCR-毛细管电泳法检测Y染色体微缺失进行评价.方法:选择Y染色体无精子因子(AZF)区域的15个序列标签位点(STS),设计特异性的引物,分成4个不同的多重PCR体系.首先提取临床外周全血样本的基因组DNA.将样本的DNA分别加入到4个不同的PCR体系中进行扩增.将获得的目的DNA片段进行毛细管电泳,并根据预设的AZF marker计算出各检测位点的碱基长度,然后分析临床样本的Y染色体微缺失情况.结果:该方法能够准确检测出临床样本的Y染色体AZF a区域缺失、AZF b区域缺失和AZF c区域缺失等缺失;检测限约为3 ng·反应-1;正常男性临床样本的检测结果是均未发生Y染色体微缺失;在210例无精子症和少精子症患者中,该方法能够准确检测出19例AZF区域微缺失,包括AZF a区域缺失1例,AZF b区域缺失2例,AZF c区域缺失13例,AZF bc区域缺失1例和AZF abc区域缺失2例.结论:多重PCR-毛细管电泳法具有很好的临床适用性,在临床上可以用于Y染色体微缺失检测,为临床遗传咨询提供建议.
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Y染色体微缺失对卵胞质内单精子注射胚胎情况和临床结局的影响
目的:探讨Y染色体微缺失对卵胞质内单精子注射(ICSI)胚胎形成情况和临床结局的影响.方法:收集22例Y染色体微缺失患者进行的27个ICSI治疗周期(研究组)的胚胎和临床结局资料,另收集同期88例严重少精子症或无精子症非Y染色体微缺失患者的101个ICSI治疗周期(对照组)的相应资料进行回顾性分析；同时比较不同Y染色体微缺失类型患者进行ICSI的胚胎资料和临床结局.结果:研究组和对照组的受精率分别为84.91％与86.30％,卵裂率分别为95.45％与96.79％,优质胚胎率分别为49.35％与45.03％,新鲜周期移植优质胚胎率分别为80.36％与84.80％,临床妊娠率分别为65.22％与60.40％,胚胎着床率分别为41.07％与33.60％,早期流产率分别为0.00％与4.92％,活产率分别为56.52％与55.45％,男婴比例分别为56.25％与47.83％.各观察指标组间均无统计学差异(P＞0.05).AZFb区部分缺失组2个新鲜胚胎移植周期中有1例获得生化妊娠,但后转阴性；d区部分缺失组及d区和c区部分缺失组各1次新鲜胚胎移植周期且均未获得妊娠；d区部分缺失加c区全部缺失组19个新鲜胚胎移植周期15例获得妊娠且无一例发生流产.结论:Y染色体微缺失对ICSI治疗周期形成的胚胎情况和妊娠结局无显著性影响,但AZFd区部分缺失加c区全部缺失患者配偶临床妊娠机会高于其他类型Y染色体微缺失患者,AZFb区部分缺失病例配偶有妊娠丢失发生.
关键词： Y染色体微缺失 卵胞质内单精子注射(ICSI) 少精子症 -
Y染色体微缺失与辅助生殖技术关系的研究进展
Y染色体是男性特有的染色体,其长臂上的无精子因子(AZF)区域具与男性不育密切相关的基因,目前将该区域分为AZFa、AZFb、AZFc和AZFd4个区域.AZF缺失是导致男性不育的重要因素之一,可以通过辅助生殖技术(ART)遗传给下一代引起不育.研究Y染色体微缺失分类与表型关系,可以为临床治疗各种男性不育症提供分子或细胞水平的依据.Y染色体微缺失发生频率存在种族差异性；目前Y染色体微缺失的检测方法仍然以多重PCR为主；对于ICSI助孕的男性后代是否会出现新发Y染色体微缺失仍然存在争论.
关键词： Y染色体微缺失 男性不育 无精子因子(AZF) 序列标签位点(STS) -
男性不育中Y染色体微缺失的研究进展
近年来对男性不育的遗传学因素的广泛研究显示Y染色体微缺失是导致不同程度生精障碍从而引起男性不育的第二大遗传学病因.无精子症因子区(AZF区)由近至远包含3个不同的亚区:AZFa、AZFb和AZFc,不同缺失类型的表型不同.目前常采用PCR法进行Y染色体微缺失的检测,其缺点是准确度低、特异性差、耗时.而基因芯片技术虽能克服上述缺点,但目前成本过高.通过检测能预测患者男性后代的遗传风险,有助于患者选择辅助治疗的方式.虽然Y染色体微缺失的严重不育患者能通过辅助生殖技术成功获得后代,但有可能将遗传缺陷传给男性后代,使之获得相同的Yq微缺失和不育.
关键词： Y染色体微缺失 男性不育 卵胞质内单精子显微注射(ICSI)
