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缺氧诱导因子1和缺氧诱导因子2在人类着床前胚胎的表达
目的 研究缺氧诱导因子1(HIF-1)和缺氧诱导因子2(HIF-2)在人类着床前胚胎各个阶段的表达,探讨这两个氧调节基因在人类早期胚胎发育过程中的作用和意义.方法 收集不育症患者捐赠的胚胎,采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR分别定性和定量在5 %和20%O2条件下体外培养的人胚胎的HIF-1α和HIF-2α mRNA.采用免疫荧光染色检测人胚胎的HIF-1α和HIF-2α蛋白. 结果 巢式RT-PCR分别检测了5%和20% O2体外培养的2、4、6、8细胞胚胎和囊胚发现,所有34个胚胎均表达HIF-1α和HIF-2α mRNA.实时荧光定量PCR 5%O2培养的人囊胚HIF-1α与18S rRNA的Ct比值为(1.22±0.05);20%O2培养的人囊胚,这一比值是(1.02±0.07);两者比较差异显著(P＜0.05).人胚胎在体外常氧培养条件下的HIF-1α mRNA水平显著高于低氧培养.5%O2培养的人囊胚HIF-2α与18S rRNA的Ct的比值为(1.29±0.04);20%O2培养的人囊胚,这一比值是(1.19±0.11);两者比较无显著差异(P＞0.05).人胚胎在体外低氧培养条件下的HIF-2α mRNA水平与常氧培养无显著差异.5%和20% O2体外培养的2、4、6、8细胞,各个发育阶段人胚胎的HIF-1α和HIF-2α免疫荧光染色均阳性. 结论 研究结果显示人类着床前胚胎在体外常氧和低氧培养时均表达HIF-1α和HIF-2α.二者可能通过广泛的靶基因系统参与早期胚胎的生长发育和着床过程,在早期胚胎的调控可能不在转录水平,而在转录后水平.
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缺氧诱导因子2与肿瘤的研究进展
缺氧诱导因子2是bHLH-PAS超家族成员之一,可上调与血管形成、胚胎发育、能量代谢、红细胞生成、糖酵解有关基因的转录和表达,在肿瘤发生、发展、转移中起重要作用.
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胰腺癌组织中EPAS1、血管内皮生长因子的表达及其相关性
目的 研究胰腺癌组织中缺氧诱导因子2α(EPAS1/HIF-2α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其与临床病理特征之间的关系.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化SP法检测60例胰腺癌及其相应正常胰腺组织中EPAS1、VEGF mRNA和蛋白的表达及分布,分析其间的相关性以及与肿瘤临床病理特征之间的关系.结果 EPAS1 mRNA在胰腺癌组织中表达与正常胰腺组织中表达差异无统计学意义(P》0.05),EPAS1蛋白、VEGFmRNA和VEGF蛋白在胰腺癌组织中表达均明显高于正常胰腺组织(P均《0.01).EPAS1与VEGF的表达呈显著正相关(P《0.01).EPAS1、VEGF的表达与胰腺癌临床分期、瘤体大小有关.结论 胰腺癌组织中EPAS1和VEGF呈过量表达,EPAS1与VEGF显著相关,EPAS1通过上调VEGF表达促进胰腺癌新生血管形成,促进胰腺癌的发生、发展.
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CD133+肺癌干细胞中基质金属蛋白酶9和缺氧诱导因子2α的表达及其病理学机制
目的 探讨CD133+肺癌干细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-9和缺氧诱导因子(HIF)-2α的表达及其病理学机制.方法 选取2009年1至12月苏州大学附属第一人民医院收治的肺癌手术患者组织石蜡标本62例.运用免疫组织化学染色技术检测CD133分子在肺癌组织中的表达,分析其临床意义;实时荧光定量PCR法分析CD133+肺癌干细胞中MMP-1、MMP-2、MMP-9、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α和MMP组织抑制剂(TIMP)-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4等转移相关基因的表达;分别用乱序siRNA和CD133 siRNA转染肺癌细胞株A549,构建对照-si-A549细胞和CD133-si-A549细胞,PCR法分析两组细胞中CD133、MMP-9和HIF-2α基因的表达;肿瘤侵袭试验分析细胞侵袭迁移能力的改变.结果 51.6％的肺癌组织阳性表达CD133分子,其表达与肺癌的转移和患者生存率密切相关(P＜0.05).CD133+与CD133-细胞中TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4、HIF-1α、HIF-1β、MMP-1、MMP-2相对表达量差异均无统计学意义(均P＞0.05);CD133+细胞中HIF-2α和MMP-9的相对表达量均显著高于CD133-细胞(1.58±0.39比1.10±0.31,1.67±0.38比1.05±0.21,均P＜0.05).CD 133-si-A549细胞中CD133、HIF-2α和MMP-9相对表达量均显著低于对照-si-A549细胞(0.24±0.10比0.85±0.23、0.19±0.09比0.54±0.18和0.31±0.17比1.12±0.31,均P＜0.05).CD133-si-A549细胞迁移至下室细胞数量显著低于对照-si-A549细胞(207±25比82±10,P＜0.05).结论 CD133+肺癌干细胞与肿瘤转移和患者预后相关,它可通过上调HIF-2α和MMP-9的表达促进肿瘤的转移.
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缺氧诱导因子2与肺癌关系的研究进展
缺氧诱导因子（hypoxia-inducible factors,HIFs）是一种转录因子，在肿瘤缺氧调节过程中发挥核心作用，HIF-2在肺癌生长增殖、侵袭转移、血管生成、化疗耐药等各方面均具有重要作用。缺氧诱导因子与肿瘤的发生发展关系密切，通过分析缺氧诱导因子与肺癌的关系，从而发现靶向抑制HIF-2对肺癌可能的治疗作用。
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靶向EPAS1的siRNA抑制卵巢癌血管生成的体外研究
目的:通过RNA干扰技术抑制缺氧诱导因子2(EPAS1)的表达,抑制肿瘤新生血管形成来治疗卵巢癌.方法:人卵巢癌细胞株SKOV3分为实验组、阴性对照组和空白对照组.实验组和阴性组分别转染rAAV2 - EPAS1 - siRNA和rAAV2 - EGFP,空白组不转染病毒.予常氧培养和缺氧培养.RT - PCR和Western blot检测EPAS1和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达,ELISA检测分泌型VEGF水平,CCK -8检测细胞增殖能力,鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验检测血管形成.结果:阴性组和空白组SKOV3细胞EPAS1和VEGF基因在缺氧状态下表达增强,而实验组EPAS1和VEGF基因无论在常氧还是缺氧状态下表达都受到抑制,且分泌型VEGF水平下降,阴性组和空白组CAM有大量新生血管形成,而实验组CAM血管变化不明显,同时实验组细胞增殖能力下降,细胞生长曲线低平.结论:siRNA沉默EPAS1基因,能下调VEGF基因表达,抑制肿瘤血管生成和卵巢癌生长.
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缺氧诱导因子-2α在小鼠DSS结肠炎中的作用及其机制研究
对炎症性肠病(IBD)发病机制的研究发现微循环缺氧是IBD的重要特征之一,转录因子缺氧诱导因子(HIFs)在缺血缺氧损伤的调节中起关键作用.目的:探讨HIF-2α在小鼠葡聚糖硫酸钠(DSS)结肠炎中的作用及其可能机制.方法:以Mx-Cre/LoxP重组方法获得HIF-2α基因条件性敲除(HIF-2α-/-)小鼠,将C57BL/6、HIF-2α+/+和HIF-2α-/-小鼠分别随机分入DSS模型组和饮水对照组,前者予4%DSS溶液自由饮用7 d制作结肠炎模型,造模过程中每天评估疾病活动指数(DAI).各组小鼠分别于造模开始后第1、3、5、7 d处死,取结肠组织观察组织病理学变化,real-time PCR检测HIF-2α、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达.结果:造模过程中,C57BL/6和HIF-2α+/+DSS模型组小鼠结肠黏膜HIF-2αmRNA表达明显升高,DAI和结肠黏膜炎症评分显著高于C57BL/6饮水对照组(第5、第7 d,P<0.05).HIF-2α-/-DSS模型组小鼠结肠黏膜炎症损伤较HIF-2α+/+DSS模型组进一步加重,DAI和炎症评分进一步升高(除第7 d炎症评分外,P均<0.05),结肠黏膜TNF-αmRNA表达亦较HIF-2α+/+DSS模型组显著升高(第5、第7 d,P<0.05).结论:HIF-2α可能通过抑制TNF-α表达发挥减轻小鼠DSS结肠炎炎症损伤的作用.
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缺氧诱导因子-2α对脂代谢的调节作用
缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)是一种在缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内的氧敏感性转录因子,通过调节缺氧诱导基因表达参与组织细胞对低氧的适应性应答,其表达是机体适应低氧的关键环节和起始步骤.近年研究发现HIF-2α可能与脂代谢过程有密切联系.本文就HIF-2α对脂肪酸代谢和胆固醇代谢的调节作用作一综述.
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缺氧诱导因子2在胰腺癌中的表达及其临床意义
目的 研究胰腺癌组织中缺氧诱导因子2(HIF-2α)的表达及其与血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)的关系,分析胰腺癌中HIF-2α表达促进肿瘤血管生成的作用及与临床病理特征之间的关系.方法 应用免疫组化SP法检测60例胰腺癌及相应正常胰腺组织中HIF-2α、VEGF蛋白的表达和分布,计数MVD,分析其间的相关性及其与肿瘤临床病理特征之间的关系.结果 HIF-2α和VEGF在胰腺癌组织中的表达均明显高于正常胰腺组织,胰腺癌组织中MVD值明显高于正常胰腺组织,差异均有统计学意义(P<0.05).HIF-2α的表达与VEGF的表达及MVD值成正相关(P<0.05),HIF-2α与VEGF的表达与胰腺癌TNM分期、肿瘤大小有关.结论 胰腺癌组织中HIF-2α呈过量表达,并与VEGF及MVD显著相关;它可能通过上调VEGF表达促进胰腺癌血管生成,进而影响胰腺癌的发生、发展.
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siRNA沉默EPAS1基因对胰腺癌细胞凋亡和增殖的影响
目的 研究由2型重组腺相关病毒(rAAV2)介导的靶向缺氧诱导因子2(EPAS1/HIF-2)的小干扰RNA(siR-NA)对人胰腺癌PANC-1细胞凋亡和增殖的影响.方法 将人胰腺癌细胞株PANC-1分为实验组、阴性对照组(阴性组)和空白对照组(空白组),实验组和阴性组分别转染rAAV2-EPAS1-siRNA和rAAV2-EGFP病毒,空白组不转染病毒,进行常氧和缺氧培养.RT-PCR和Western blot检测EPAS1基因表达,Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖能力.结果 在常氧和缺氧状态下,实验组细胞EPAS1 mRNA和蛋白表达受抑制,显著低于阴性组和空白组,差异均有高度统计学意义(p<0.001).在缺氧状态下,实验组细胞的凋亡率明显升高,增殖受抑制,与阴性组和空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 通过siRNA抑制缺氧状态下胰腺癌细胞中EPAS1基因表达,能诱导胰腺癌细胞凋亡,抑制胰腺癌细胞增殖.
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EPAS1、VEGF在胰腺癌中表达及其相关性
目的 研究胰腺癌组织中缺氧诱导因子2(EPAS1/HIF-2α)、血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的表达及与临床病理特征之间的关系.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹Western blot、免疫组化SP法检测60例胰腺癌及相应正常胰腺组织中EPAS1、VEGF mRNA和蛋白的表达和分布,同时检测MVD作为判断血管生成的指标,分析其间的相关性以及与肿瘤临床病理特征之间的关系.结果 EPAS1、VEGF和MVD在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织,VEGF在mRNA和蛋白水平均增高(P＜0.01),但EPAS1只在蛋白水平增高(P＜0.01).此外,三者之间的表达具有显著相关性(P＜0.01).EPAS1和VEGF的阳性表达与胰腺癌的TNM 分期、肿瘤大小有关.结论 胰腺癌组织中EPAS1和VEGF呈过量表达,且EPAS1的表达与VEGF及MVD呈显著正相关.EPAS1可通过上调VEGF表达来促进胰腺癌血管生成从而在胰腺癌的发生、发展中起重要作用.
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缺氧诱导因子2在肝细胞癌中的表达及临床意义
目的 研究缺氧诱导因子2(HIF-2)在肝癌组织及血清中的表达及其与临床病理因素之间的关系,探讨血清中HIF-2对于肝癌的诊断价值.方法 收集具有完整病例及随访资料的90例患者肝癌组织标本,免疫组织化学法检测肝癌组织中HIF-2的表达,酶联免疫吸附试验ELISA检测患者术前血清中HIF-2的表达,探讨HIF-2的表达与患者临床病理因素的关系.受试者工作曲线(Receiver operating characteristics,ROC)分析比较HIF-2和血清AFP值单独以及联合对肝癌的诊断价值.结果 90例肝癌组织中69例显示出HIF-2阳性表达(76.7％),显著高于癌旁组织(11/90,12.2％),且HIF-2高表达的与血管浸润、肿瘤包膜不完整、TNM分期晚以及病理Edmondson分级高密切相关.肝癌患者术前血清中HIF-2的表达水平明显增高,且其表达与血管浸润、肿瘤包膜、肿瘤TNM分期、病理Edmondson分级以及肝硬化程度相关,ROC曲线分析提示HIF-2联合AFP较HIF-2或AFP拥有更大的曲线下面积.结论 人肝癌组织中HIF-2高表达,其表达与血管浸润、肿瘤包膜、TNM分期以及病理分级相关;联合血清HIF-2和AFP检测可提高肝癌检出率;HIF-2可能作为肝癌早期诊断及预后预测的潜在分子标记物.
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肾癌缺氧诱导因子2小干扰RNA表达载体的构建及筛选
目的:构建肾癌缺氧诱导因子2(HIF-2)小干扰RNA真核表达载体.并研究其对肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白表达的影响.方法:根据GenBank数据库提供的HIF-2基因核苷酸序列,选择设计双链小干扰RNA,合成HIF-2 RNAi片段No 1、No 2、No 3和对照片段,将RNAi片段定向克隆于pSilencer 2.1-U6 neo真核表达载体,转化感受态菌.挑取阳性载体克隆,DNA测序进行鉴定;培养人肾癌786-0细胞,在脂质体的介导下分别将No 1、No 2、No 3和埘照片段重组载体转染人人肾癌786-0细胞,并设未转染组,Western Blot法检测各载体对肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白表达的影响.结果:构建的HIF-2 RNAi真核表达载体经DNA测序证实与设计完全一致,转染肾癌786-0细胞24 h后,No 1组、No 2组和No 3组HIF-2蛋白表达水平降低(分别为0.05±0.00、0.11±0.01、0.15±0.01),与未转染组(0.22±0.02)和对照组(0.21±0.01)相比,差异有统计学意义(F=83.85,P<0.05);未转染和对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).结论:成功构建人肾癌HIF-2RNAi真核细胞表达载体,并可有效干扰肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白的表达.
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氯化钴预处理在培养分化的人神经母细胞瘤细胞株缺氧损伤中的保护作用
目的 探讨氧化钴(CoCl2)对体外培养分化的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株的缺氧损伤保护作用及缺氧诱导因子1、2和其调节基因产物血管内皮生长因子在其中的作用.方法 分化的SH-SY5Y细胞分为对照组、化学缺氧预处理组(细胞用50 μmol/L CoCl2预处理3 h,换液后常氧培养1 h,然后在2%的低氧孵箱内缺氧28 h)、缺氧组(无CoCl2预处理过程,其余同化学缺氧预处理组).用Western blotting法测细胞HIF-1α、HIF-2α和VEGF的蛋白表达,通过乳酸脱氢酶释放率测定、MTT细胞活力测定判断细胞损伤程度.结果 化学缺氧预处理组细胞 HIF-2α和VEGF的蛋白表达显著高于缺氧组(P＜0.01),HIF-1α蛋白表达在两组之间没有显著性差异(P＞0.05),化学缺氧预处理组细胞较缺氧组细胞存活率高、乳酸脱氢酶释放率减少(P＜0.01).结论 CoCl2化学预缺氧可保护分化的SH-SY5Y细胞对缺氧产生耐受,缺氧预处理可能通过HIF-2促进VEGF的表达而产生保护作用.
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HIF-2对铁代谢的调节及其研究进展
据报道全世界有1亿4千万居民居于海拔2500 m的地区，有1千7百万人口居住于海拔3500 m以上的地区［1］。在高海拔地区缺氧可导致许多症状，如贫血和机体将氧运输到组织的能力降低。血红蛋白是运输氧的关键工具，它包含一个重要的微量元素‐铁。铁对于许多生物过程如氧的运输都是必不可少的，它的供给受到严格的调控。然而缺氧条件下的铁代谢机制并未完全清楚。较早的研究表明，在缺氧环境下缺氧诱导因子‐1（hypoxia‐inducible factor1，HIF‐1）是调节许多铁调节蛋白如铜蓝蛋白、转铁蛋白（T f ）和储存形式的铁蛋白转录的关键因子，而随后的研究表示 HIF‐2才是在铁代谢中发挥着重要作用的因子［2］。
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HIF-2α在宫颈癌组织中的表达及意义
目的：探讨低氧诱导因子2α（HIF‐2α）在宫颈癌组织中的表达以及在宫颈癌发生发展中的作用。方法：采用免疫组化法检测 HIF‐2α在正常宫颈及宫颈癌组织中的表达，并将 HIF‐2α表达与宫颈癌的临床病理特征进行相关分析；采用siRNA技术干扰HIF‐2α在宫颈癌细胞 HeLa、SiHa的表达，Western blot技术检测HIF‐2α蛋白在宫颈癌细胞的表达；M T T试验检测HeLa、Si‐Ha细胞增殖情况。结果：HIF‐2α在宫颈癌组织的表达明显高于正常宫颈组织，经χ2检验，有统计学意义，并且HIF‐2α表达与宫颈癌的淋巴转移呈正相关，但与宫颈癌患者的年龄、病理分级以及临床分期无显著性相关。低氧可诱导 HIF‐2α表达增加，并促进 HeLa、SiHa细胞增殖，而干扰 HIF‐2α表达后，则抑制HeLa、SiHa细胞增殖，经 t检验，具有统计学意义。结论：HIF‐2α在宫颈癌中的表达升高，其对宫颈癌的发生发展起促进作用。
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正常妊娠妇女及子痫前期病人胎盘组织HIF-2а表达
目的 了解缺氧诱导因子2а(HIF-2а)在正常妊娠妇女及子痫前期病人胎盘组织中的表达及其在子痫前期发病机制中的作用.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法.检测30例子痫前期病人(子痫前期组,其中轻度11例,重度19例)胎盘组织中HIF一2a mRNA和蛋白的表达水平,并以37例正常妊娠妇女(其中早期妊娠组12例,中期妊娠组10例,晚期妊娠组15例)作为对照.结果 正常妊娠妇女早期妊娠组HIF-2аmRNA的表达水平较晚期妊娠组低,差异有统计学意义(F=5.323,q=4.574,P<0.01);其余各组间比较差异均无统计学意义(P>0.05).正常妊娠早期妊娠组HIF-2а蛋白表达水平高于中期妊娠及晚期妊娠组,差异有统计学意义(F=11.862,q=6.230、5.672,P<0.01);中期妊娠组与晚期妊娠组比较差异无统计学意义(P>0.05).子痫前期胎盘组织HIF-2а蛋白表达水平高于晚期妊娠组(t=5.174,P<0.01).重度子痫前期与轻度子痫前期组比较差异无显著性(P>0.05).结论 胎盘HIF-2а在正常妊娠胎盘发育过程中发挥作用;胎盘HIF-2а蛋白表达参与子痫前期的病理生理过程.
