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缺氧调节基因/产物参与CoCl2预处理对分化SH-SY5Y细胞缺氧损伤的保护
目的 探讨缺氧调节基因/产物在CoCl2化学缺氧预处理抵抗神经型细胞缺氧损伤中的作用.方法 分化的SH-SY5Y细胞分为对照组、化学缺氧预处理组(细胞先用50 μmol/LCoCl2预处理3 h,换液后常氧培养1 h,然后在2%的低氧孵箱内缺氧28 h)、缺氧组(2%的低氧孵箱内缺氧28 h).RT-PCR测VEGF、GLUT-1、EPO、LDH-A的mRNA表达.通过应用重组人VEGF纯品,进一步确定VEGF在化学缺氧预处理组中的保护作用.结果 化学缺氧预处理组细胞GLUT-1、EPO mRNA表达显著高于缺氧组(P＜0.05),VEGF mRNA表达显著高于缺氧组(P＜0.01),LDH-A mRNA表达在两组之间没有显著性差异(P＞0.05).MTT细胞活力测定显示,重组人VEGF可模拟预处理组的保护作用.结论 CoCl2化学缺氧预处理很可能通过促进VEGF、GLUT-1、EPO等缺氧调节基因/产物表达,发挥其神经保护作用.
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氯化钴预处理在培养分化的人神经母细胞瘤细胞株缺氧损伤中的保护作用
目的 探讨氧化钴(CoCl2)对体外培养分化的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株的缺氧损伤保护作用及缺氧诱导因子1、2和其调节基因产物血管内皮生长因子在其中的作用.方法 分化的SH-SY5Y细胞分为对照组、化学缺氧预处理组(细胞用50 μmol/L CoCl2预处理3 h,换液后常氧培养1 h,然后在2%的低氧孵箱内缺氧28 h)、缺氧组(无CoCl2预处理过程,其余同化学缺氧预处理组).用Western blotting法测细胞HIF-1α、HIF-2α和VEGF的蛋白表达,通过乳酸脱氢酶释放率测定、MTT细胞活力测定判断细胞损伤程度.结果 化学缺氧预处理组细胞 HIF-2α和VEGF的蛋白表达显著高于缺氧组(P＜0.01),HIF-1α蛋白表达在两组之间没有显著性差异(P＞0.05),化学缺氧预处理组细胞较缺氧组细胞存活率高、乳酸脱氢酶释放率减少(P＜0.01).结论 CoCl2化学预缺氧可保护分化的SH-SY5Y细胞对缺氧产生耐受,缺氧预处理可能通过HIF-2促进VEGF的表达而产生保护作用.
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VEGF参与CoCl2预处理对神经细胞缺氧损伤的保护作用
目的:探讨CoCl2对体外培养分化SH-SY5Y细胞的缺氧损伤保护作用及缺氧诱导基因产物VEGF在其中的作用.方法:分化的SH-SY5Y细胞随机分为对照组、化学缺氧预处理组(预处理组,细胞先用50 μM CoCl2预处理3 h,换液后常氧培养1 h,然后在2%的低氧孵箱内缺氧28 h)、缺氧组(无CoCl2预处理过程,其余同预处理组).用Western Blotting法测细胞VEGF的蛋白表达,RT-PCR测VEGF的mRNA表达,通过乳酸脱氢酶释放率和MTT细胞活力测定判断细胞损伤程度.然后,进一步通过添加VEGF单克隆抗体、重组人VEGF,验证VEGF在化学缺氧预处理组中的保护作用.结果:化学缺氧预处理组细胞 VEGF蛋白、VEGF mRNA表达都显著高于缺氧组(P＜0.01),预处理组细胞较缺氧组细胞存活率高,乳酸脱氢酶释放率减少(P＜0.01).MTT细胞活力测定显示,40 μg/ml VEGF单克隆抗体可抑制预处理的保护作用,而100 ng/ml重组人VEGF可模拟预处理组的保护作用.结论:CoCl2化学预缺氧可保护神经型细胞对缺氧产生耐受,VEGF可能在其中发挥重要的保护作用.
