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鸟氨酸脱羧酶基因沉默对子宫内膜癌细胞Ishikawa的影响
目的 利用RNA干扰技术,观察鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)基因在子宫内膜癌Ishikawa细胞的沉默效应及对Ishikawa细胞增殖周期的影响.方法 设计合成以鸟氨酸脱羧酶基因为靶向目标的siRNA序列质粒,利用脂质体介导的方法 将质粒转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞,实验分三组:Ishikawa组,pSUPER-EGFP组,pSUPER-EGFP-ODC组.用Real-time PCR和Western blot检测ODC的表达情况.采用MTT和流式细胞术来检测ODC基因沉默对Ishikawa细胞生长的影响.结果 Real-time PCR和Western显示pSUPER-EGFP-ODC组细胞ODC mRNA和蛋白质表达水平明显下降.MTT示pSUPER-EGFP-ODC能显著抑制Ishikawa细胞的增殖活性,与Ishikawa相比,差异有高度统计学意义(P < 0.01).流式细胞术结果 示pSUPER-EGFP-ODC能显著阻滞Ishikawa细胞于G0/G1期,S期细胞数相应减少,并诱导细胞凋亡,与Ishikawa相比,差异有高度统计学意义(P < 0.01).结论 转染靶向ODC基因的siRNA序列质粒能够下调ODC基因的表达,抑制人子宫内膜癌细胞Ishikawa在体外的增殖,阻滞Ishikawa细胞于G0/G1期并诱导细胞凋亡.
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转化生长因子β1对子宫内膜癌细胞系Ishikawa体外增殖、细胞周期、凋亡的影响
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对子宫内膜癌细胞系Ishikawa体外增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法 用MTT法检测细胞增殖水平,通过流式细胞术观察细胞周期和凋亡的变化.结果 TGF-β1以时间依赖方式明显抑制Ishikawa细胞的生长(P<0.05),各浓度间差异显著,随浓度增高抑制更加显著(P<0.05).TGF-β1促进Ishikawa细胞凋亡,细胞凋亡百分比随时间及浓度的增加而增长;TGF-β1阻滞细胞停滞于G1期,S期的比例显著降低.结论 TGF-β1能抑制人子宫内膜癌Ishikawa 细胞的增殖,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期.
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17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞增殖及p38表达的影响
目的:探讨不同浓度的17 β-雌二醇(E2)对雌激素受体(ER)阴性的JEC细胞和ER阳性的Ishikawa子宫内膜腺癌细胞系细胞的增殖及细胞内p38蛋白表达的影响.方法:选用人子宫内膜腺癌细胞系JEC和Ishikawa进行体外培养,加入含不同浓度E2培养液,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)的方法,观察子宫内膜腺癌细胞系JEC和Ishikawa细胞的增殖活性及P-p38的表达.结果:①MTT法观察细胞增殖:10-7、10-8和10-9 mol/L E2作用JEC细胞4、5天后OD值与对照组比较有差异(P＜0.05),其中10-7 mol/L E2组在第5天OD值与对照组比较差异较显著(P＜0.01)；而不同浓度E2作用Ishikawa细胞均能促进增殖(P＜0.05).②共聚焦显微镜测定细胞内P- p38蛋白的表达:10-7mol/L的E2作用JEC 4、5天后可使细胞内P-p38表达增加,平均荧光强度值与对照组相比有统计学意义(P＜0.05)；10-7 mol/L的E2作用Ishikawa 3、4天后P-p38表达增加,与不加E2对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:子宫内膜腺癌细胞系JEC细胞和Ishikawa细胞均可受到雌激素的调控,一定浓度的雌激素能促进ER阴性JEC细胞和ER阳性的Ishikawa细胞增殖,且均能使细胞内P-p38表达增加.
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幼儿手指末节断指再植
随着显微外科技术的不断发展,我国的断肢(指)再植已取得世界瞩目的临床效果.但对幼儿再植仍有许多问题值得探讨,特别是末节离断再植.2008年1月至2011年5月,我院对10例11指幼儿末节断指进行再植,疗效满意.1.一般资料:本组10例11指,男7例,女3例;年龄1.5～3岁,平均2.2岁.拇指2指,示指5指,环指2指,小指2指.致伤原因:刀切伤6指,铡刀伤4指,压砸伤1指.离断平面:采用Ishikawa等[1]分区标准:Ⅰ区(指甲中点以远),Ⅱ区(指甲根至指甲中点),Ⅲ区(指甲根至远指间关节的远1/2段),Ⅳ区(指甲根部至远指间关节的近1/2段).本组中Ⅱ区2指(示指),Ⅲ区4指(示、环指各2指),Ⅳ区5指(拇、小指各2指,示指1指).
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G蛋白偶联受体30在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达及亚细胞定位
目的:探讨G蛋白偶联受体30 (G protein-coupled receptor 30,GPR30)在人子宫内膜癌细胞株Ishikawa中的表达及亚细胞定位.方法:应用RT-PCR、蛋白质印迹法和免疫荧光技术分析Ishikawa细胞中GPR30蛋白的表达,FCM检测GPR30蛋白在细胞膜和细胞质中的阳性表达率,胶体金标记GPR30后在透射电子显微镜下观察GPR30蛋白的亚细胞定位.结果:Ishikawa细胞中有GPR30 mRNA和蛋白的表达,主要位于细胞膜和细胞质;细胞质中GPR30蛋白的阳性表达率[(20.10±0.13)％]显著高于细胞膜[(8.54±0.17)％],差异有统计学意义(P＜0.01);透射电子显微镜下可见GPR30蛋白的亚细胞定位主要在细胞质的管网状网络上,可能是粗面内质网.结论:Ishikawa细胞中GPR30蛋白在细胞质中的表达高于细胞膜,其亚细胞定位主要位于粗面内质网,提示GPR30可能在子宫内膜癌中发挥重要作用.
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核心蛋白聚糖在 Ishikawa 细胞中的表达及意义
目的：观察表皮生长因子受体（EGFR）信号通路抑制剂 RG-14260（RG）单用及 RG 联合 mTOR 信号通路抑制剂亚罗莫司（RA）体外对子宫内膜癌 Ishikawa 细胞增殖及核心蛋白聚糖（DCN）表达的影响。方法子宫内膜癌 Ishikawa 细胞经 RG及 RG 联合 RA 作用后，采用免疫组织化学法检测细胞增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，反转录酶-聚合酶链式反应（RT-PCR）及免疫印迹法分别检测细胞内 DCN 基因和蛋白表达的变化。结果RG 单用及联合 RA 均可降低 Ishikawa 细胞 PCNA 阳性细胞表达率，促进细胞 DCN 基因和蛋白的表达，但二者合用效果更为显著。结论单独和联合 EGFR 及 mTOR 信号通路抑制剂均可在基因和蛋白水平上上调 Ishikawa 细胞内 DCN 的表达，而升高的 DCN 反过来又可增强信号通路抑制剂对细胞增殖的抑制作用。
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艾塞那肽抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞株裸鼠移植瘤的血管生成
[目的]探讨艾塞那肽在子宫内膜癌细胞株Ishikawa裸鼠皮下移植瘤内血管生成中的作用.[方法]构建子宫内膜癌细胞株Ishikawa裸鼠皮下移植瘤动物模型;实验分为艾塞那肽组和对照组;采用免疫组化的方法检测瘤内微血管密度(MVD,CD31阳性)和巨噬细胞浸润密度(MID,F4/80阳性);采用Western blot检测瘤内的血管生成因子(VEGF)的含量.[结果]①艾塞那肽组瘤内MVD-CD31阳性为(13.2±1.4)/400高倍镜,比对照组的(25.9±5.8)/400高倍镜少(P＜0.01).②艾塞那肽组的瘤内VEGF含量低于对照组(P＜0.05).③艾塞那肽组瘤内MID-F4/80阳性为(31.4±3.4)％,比对照组的(72.1±4.2)％低(P＜0.01).[结论]艾塞那肽可减少子宫内膜癌Ishikawa细胞株裸鼠移植瘤局部的肿瘤相关巨噬细胞的浸润,减少VEGF生成,抑制移植瘤内的血管生成.
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Mitogenic and Anti-apoptotic Effects of Insulin in En-dometrial Cancer Cells Are Phosphatidylinositol 3-ki-nase/Akt Dependent
Background and objective Endometrial carcinoma is the most common gynecologic malignancy in the world. Although the insulin-resistant state or hyperinsulinemia was recently suggested as a potent risk factor for endometrial carcinogenesis and progression, there is only limited supporting evidence and the mechanism is unclear. In this study, we explored the roles of phosphatidylinositol 3-k/nase (PI3K)/Akt signaling pathway in the response of a human endometrial cancer cell line, Ishikawa3-H-12 cells, to insulin.Methods The Ishikawa 3-H-12 cells were serum-starved and then stimulated by insulin at various concentrations and for different time periods. To identify the insnlin-mediated signal pathway in the cells, LY294002, a selective inhibitor of PI3K, was used. The proliferation and the apoptotic rates were determined with methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) and flow cytometric assays, respectively.Results The insulin receptor positive Ishikawa 3-H-12 cells had enhanced proliferation upon insulin stimulation in a rinse-and time-dependent manner. The growth promoting effect of insulin was blocked when the cells were pre-incubated with LY294002 for 60 rains.Insulin was able to protect the cells from serum-starvation-induced apoptosis in a concentration-dependent manner, while the anti-apoptotic effects of insulin was reversed by adding LY294002. Treatment with insulin at 1 μM for 15 rain resulted in an increased level of activated Akt The insulin-induced Akt activation was inhibited by LY294002 in a dose-dependent manner.Conclusion Insulin activates PI3K/Akt signaling pathway and is a mitogenic and anti-apoptotic agent for Ishikewa 3-H-12 endometrial cancer cells.
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ERRγ对子宫内膜癌细胞移植瘤组织中Akt、ERK表达的影响
目的:以ERα(+)子宫内膜癌细胞株Ishikawa为研究对象,建立子宫内膜癌细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,进一步研究在子宫内膜癌细胞移植瘤中ERK、p-ERK、Akt、p-Akt蛋白的表达及其意义.方法:利用转染前后的Ishikawa细胞建立子宫内膜癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,采用免疫组织化学链霉亲和素-生物素过氧化物酶复合物(SABC法)检测裸鼠移植瘤中ERRγ蛋白的表达情况.Western blot方法检测移植瘤组织中Akt、p-Akt、ERK、p-ERK蛋白的表达情况.结果:免疫组化检测Ishikawa细胞移植瘤组与no-silence Ishikawa细胞移植瘤组(空载体组)ERRγ蛋白表达阳性率无显著性差异(P＞0.05),Ishikawa细胞移植瘤组与ERRγ-shRNA Ishikawa细胞移植瘤组阳性率具有显著性差异(P＜0.05).Western blot方法检测3组组织的活化情况:ERRγ-shRNA Ishikawa细胞移殖瘤组中Akt、p-Akt、ERK、p-ERK表达量均低于Ishikawa细胞移殖瘤及no-silence Ishikawa细胞移殖瘤组(P＜0.05).结论:沉默ERRγ基因的瘤组织的ERK及Akt的表达呈现低表达,从而可以推测:通过ERRγ的表达来调节ERK及Akt信号通路的表达,进一步抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖,促进其凋亡.
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人子宫内膜癌瘤组织块活体移植瘤动物模型的建立
目的:研究建立人子宫内膜癌的组织块活体移植动物模型方法.方法:将生长状态良好的Ishikawa细胞浓度调整至1.5×107/ml,接种于BALB/c nude裸鼠腋下皮下(Ⅰ组),Ⅱ组生理盐水对照,观察其生长情况,待成瘤5-1Omm时建立成瘤模型,收集Ⅰ组瘤组织块行活体移植于Ⅲ组小鼠,留取组织标本行病理检查.结果:成功建立了人子宫内膜癌Ishikawa细胞的BABL/c裸鼠皮下移植瘤模型和活体移植瘤模型,形成的肿瘤具备人肿瘤生物学特点.结论:建立的瘤组织块活体二次传代移植人子宫内膜癌的BABL/c nude小鼠皮下移植瘤模型具有人子宫内膜癌特征且成瘤率更高,为大批建立子宫内膜癌单位模型研究子宫内膜癌的发病机制和药物治疗提供了实验动物模型.
关键词： 子宫内膜癌 BALB/c nude 动物模型 活体移植 Ishikawa
