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叠鞘石斛中联苄类成分的定性定量分析
目的 建立叠鞘石斛中联苄类成分的定性、定量分析方法.方法 运用薄层色谱法对叠鞘石斛中联苄类成分石斛酚(gigantol)和杓唇石斛素(moscatilin)进行定性分析,采用高效液相色谱法测定石斛酚的含量,以Shim-pack CLC-ODS柱为固定相,流动相乙腈-0.2%甲酸(35:65),检测波长280 nm,柱温25℃.结果 石斛酚在0.196～12.54 μg内峰面积与进样量呈良好的线性,r=0.999 9;平均回收率100.6%;RSD3.01%.结论 通过10批不同来源的叠鞘石斛的鉴别和含量测定,证明方法灵敏,准确可靠,重复性好.在不同采收期的叠鞘石斛中,石斛酚的含量在春季4,5月份和秋季10,11月份相对高于其他月份.
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岩生石仙桃醋酸乙酯部位化学成分研究
目的 首次对岩生石仙桃Pholidota rupestris全草的化学成分进行研究.方法 采用柱色谱方法对岩生石仙桃80％乙醇提取物的醋酸乙酯部位进行分离纯化,利用波谱技术对分离得到的化合物进行结构鉴定.结果 从岩生石仙桃醋酸乙酯部位中分离得到13个化合物,分别鉴定为confusarin(1)、7-羟基-2-甲氧基-9,10-二氢菲-1,4-二酮(2)、2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲(3)、4,7-二羟基-2-甲氧基-9,10-二氢菲(4)、山药素Ⅲ (5)、石斛酚(6)、3,3'-二羟基-5-甲氧基二苯乙烯(7)、环石仙桃萜酮(8)、环石仙桃萜醇(9)、丁香脂素(10)、β-谷甾醇(11)、豆甾-5-烯-3β,7α-二醇(12)、5α,8α-epidioxy-(22E,24R)-ergosta-6,22-dien-3β-ol (13).结论 化合物1～13均首次从该植物中分离得到,其中,化合物1、2和12为首次从石仙桃属植物中分离得到.
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不同生长年限霍山石斛高效液相指纹图谱研究
目的 建立霍山石斛Dendrobium huoshanense的HPLC指纹图谱,同时测定不同生长年限霍山石斛中丁香酸、芦丁、石斛酚、柚皮素含量,为霍山石斛药材质量的评价提供依据.方法 采用Agilent C18 (250 mm×4.6 mm,5μtm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长240 nm,柱温30℃;将色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.1),对不同年限的霍山石斛样品进行相似度分析;峰面积导入SPSS软件进行聚类分析,从树状图上判断聚类效果.结果 本方法建立的指纹图谱共有13个共有峰,指认了其中4个共有峰,分别为丁香酸、芦丁、石斛酚、柚皮素;不同年限的栽培霍山石斛相似度结果小于0.900,不同年限的仿野生霍山石斛相似度结果大于0.900.结论 HPLC指纹图谱结合化学计量学方法能够评价和鉴别不同年限的霍山石斛,为霍山石斛药材的采收、开发、评价等提供参考.
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石斛酚对高糖诱导的EA.hy926内皮细胞凋亡的保护作用研究
目的:研究石斛酚对高糖损伤的EA.hy926细胞(来源于人脐静脉的永生化内皮细胞系)的保护作用,并探讨其作用机制.方法:采用100 mmol·L-1高糖培养基建立EA.hy926内皮细胞损伤模型,给予石斛酚孵育24 h,采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,检测细胞半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性以及培养液中SOD(过氧化物歧化酶)、T-AOC(总抗氧化能力)活力和MDA(丙二醛)的含量.结果:石斛酚能抑制Caspase-3活性,降低细胞凋亡率,增强细胞活力,提高SOD和T-AOC活力,减少MDA含量.结论:石斛酚对高糖损伤的血管内皮细胞具有保护作用,其机理与其增强细胞的抗氧化能力密切相关.
关键词： 石斛酚 高糖 EA.hy926细胞 凋亡 抗氧化作用 -
HPLC法测定流苏石斛精制饮片中石斛酚的含量
目的:建立流苏石斛精制饮片中的石斛酚的含量测定方法.方法:采用Hypersil-C18(200mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈-0.05％三氟乙酸(梯度洗脱),流速为1.0mL/min,检测波长为230nm.结果:石斛酚进样量在0.4～4.0μg范围内有良好的线性关系,r=0.9994,平均回收率99.65％,RSD为1.87％.结论:所建立方法操作简便、准确、可靠、重复性好,可用于流苏石斛精制饮片中石斛酚的含量测定.
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石斛酚与丁香酸协同对醛糖还原酶的抑制作用及机制研究
目的 探讨石斛酚与丁香酸联用对醛糖还原酶(AR)活性的抑制作用.方法 采用紫外分光光度法表征石斛酚和丁香酸联合对AR的抑制活性；采用分子对接软件Sybyl中的FlexX方法预测二者作用残基、结合方式及其药效团.结果 石斛酚和丁香酸联用的抑制活性优于单一组分——石斛酚和丁香酸,表现良好的协同效果,二者协同抑制AR的氨基酸残基为Asn160,主要作用力为范德华力,形成共同药效团.结论 石斛酚与丁香酸联合对AR活性表现为抑制作用,并呈现协同性.
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美花石斛的质量研究及其与近似种石斛的比较
目的 建立美花石斛生物碱、联苄类、黄酮类成分的TLC鉴别方法,以及石斛酚、甘露糖与葡萄糖含量测定方法,并与霍山石斛、金钗石斛、流苏石斛、铁皮石斛进行比较,为其质量控制提供科学依据.方法采用TLC法鉴别生物碱、联苄类、黄酮类成分;石斛酚含量测定:采用HPLC法,色谱柱为Kromasil 100-5 C18;流动相为乙腈-水(36:64);检测波长为210 nm;流速为0.5 mL·min-1;柱温为30℃.甘露糖与葡萄糖的含量测定:采用酸水解柱前衍生HPLC方法,色谱柱为Kromasil 100-5 C18;流动相为乙腈-0.02 mol·L-1乙酸铵溶液(20:80);检测波长为250 nm;流速为1.0 mL·min-1;柱温为30℃.结果TLC鉴别中美花石斛分别检出2个生物碱主斑点、包括石斛酚在内的2个联苄类成分主斑点、包括柚皮素在内的5个荧光主斑点,与霍山石斛、金钗石斛、流苏石斛或铁皮石斛有一定区别.石斛酚、甘露糖、葡萄糖线的性关系良好(r=0.9999);平均加样回收率分别为101.5％(RSD为1.95％)、97.9％(RSD为1.94％)、100.0％(RSD为1.36％);10批美花石斛的石斛酚含量为0.0739～0.171 mg·g-1;7批美花石斛的甘露糖与葡萄糖含量分别为5.07％～9.42％、8.43％～13.71％,甘露糖和葡萄糖含量之和为13.50％～22.61％.结论TLC鉴别方法具有一定专属性,可作为美花石斛的鉴别方法之一;含量测定方法准确可靠,重复性好,可作为美花石斛的定量指标.
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切片与切段对叠鞘石斛多糖、联苄类化合物及石斛酚提取量的影响研究
目的:研究切片、切段对叠鞘石斛中多糖、联苄类化合物及石斛酚提取量的影响,比较叠鞘石斛切片、切段的优劣.方法:将叠鞘石斛焊蒸后切制成长度为10mm的段及厚度为4mm的片,于60℃烘干,然后将叠鞘石斛片(段)煎煮60、90、120 min及温浸60、90 min;采用紫外-可见分光光度法测定其在煎煮及温浸过程中多糖、联苄类化合物提取量,采用高效液相色谱法测定叠鞘石斛片(段)中石斛酚的提取量;另计算浸出物提取率.结果:在煎煮过程中,叠鞘石斛片较石斛段多糖、联苄类化合物提取量分另增加了0.06～0.17、0.08～0.11 mg/g,石斛酚提取率增高了37.5％;在温浸过程中,叠鞘石斛片较石斛段多糖、联苄类化合物提取量分别增加了0.33～0.58、0.17～0.28 mg/g;叠鞘石斛片较石斛段的水溶性浸出物及醇溶性浸出物提取率分别增高了2.89％、0.98％.结论:叠鞘石斛切片优于切段,本研究可为《中国药典》中石斛切制时改段为片提供一定的参考.
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叠鞘石斛与药典品种石斛酚含量对比研究
目的:建立叠鞘石斛与药典收载品种金钗石斛,鼓槌石斛中石斛酚的高效液相色谱含量测定方法.方法:Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.5％冰醋酸(35:65)为流动相,检测波长280 nm,流速1 mg· mL-1,柱温30℃.结果:石斛酚在0.01228～0.2456 mg·mL-1 (r=0.9999)范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率为100.39％,RSD为2.17％.结论:本方法操作简单、快捷、重现性好、准确率高,可用于上述三种石斛中石斛酚的含量测定.
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中心复合设计——效应面法优化叠鞘石斛石斛酚提取工艺
目的:采用中心复合设计一效应面法优化叠鞘石斛中石斛酚的提取工艺.方法:以甲醇体积分数、料液比和超声提取时间为自变量,以石斛酚提取率为因变量,通过对因变量进行多元线性回归拟合,采用效应面法优化佳提取工艺.结果:确定石斛酚提取工艺为甲醇体积分数50％ ～61％,料液比1∶19～1∶22,超声提取时间16～21min,工艺验证预测值与实测值的偏差为-1.82％.结论:该方法可用于优化叠鞘石斛石斛酚提取工艺.
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紫外可见分光光度法测定叠鞘石斛中联苄类化合物的含量
目的:建立叠鞘石斛中联苄类化合物的含量测定方法.方法:以石斛酚为对照品,未加显色剂条件下,建立紫外可见分光光度法测定叠鞘石斛中联苄类化合物的含量.结果:确定佳吸收波长280 nm,石斛酚在浓度4.88～58.56μg/mL范围内呈良好线性关系(r=0.9998),平均加样回收率为97.39％,RSD=2.97％.结论:该方法准确、简单、快捷,重现性好,适用于叠鞘石斛中联苄类化合物含量的测定.
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石斛酚对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞的保护作用
目的:探讨石斛酚对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)的醛糖还原酶(AR)通路及氧化应激的保护作用.方法:将体外培养的HRMECs分为5组:正常组(葡萄糖5.5mmol/L)、甘露醇组(葡萄糖5.5mmol/L+甘露醇24.5mmol/L)、高糖组(葡萄糖30mmol/L)、石斛酚组(葡萄糖30mmol/L+石斛酚5μmol/L)、依帕司他组(葡萄糖30mmol/L+依帕司他1μmol/L).通过MTS实验检测细胞活力,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western blotting法检测核因子 κB(NF-κB)的蛋白表达;qRT-PCR法检测AR、HIF-1α及VEGF的mRNA表达.结果:DCFH-DA荧光探针法结果显示石斛酚可明显降低高糖环境下细胞内的ROS水平.与高糖组相比,石斛酚组NF-κB的蛋白表达,AR、HIF-1α及VEGF的mRNA表达也都明显下降.依帕司他组的AR及NF-κB表达趋势与石斛酚组一致.结论:石斛酚与依帕司他都可抑制AR/NF-κB通路的激活,同时石斛酚还可抑制高糖诱导的HRMECs氧化应激反应.石斛酚在糖尿病视网膜病变的发生发展中可能有一定的保护作用,可能帮助减少新生血管的生成.
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石斛酚与丁香酸的ADMET分子模拟预测
目的 分子模拟预测石斛酚与丁香酸的吸收、分布、代谢、排泄和毒理性(ADMET),为进一步开发研究奠定基础.方法 采用DS2.1中ADMET模决,从吸收性、水溶性、血脑屏障穿透性、与人细胞色素P450 2D6酶结合、肝毒性、与血浆蛋白结合6个方面进行测定.结果 石斛酚的肝毒性比标准稍高,石斛酚与丁香酸的其他各方面的预测值都在正常范围内.结论 石斛酚、丁香酸的ADMET测定结果符合药物研究开发的标准,可作为新药进一步研究.
