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美花石斛茎的淀粉粒数量、多糖含量与生物碱含量的相关性研究
目的:研究美花石斛茎的淀粉粒数量、多糖含量、生物碱含量之间的相关性.方法:显微计数法统计茎的淀粉粒数量,硫酸-蒽酮比色法测定多糖含量,溴甲酚绿比色法测定生物碱含量；Pearson积差相关分析、Kendall's等级相关分析、Spearman’s和谐系数分析研究三者的相关性.结果与结论:美花石斛茎的淀粉粒数量与其多糖含量有极显著的正相关性,而淀粉粒数量及多糖含量均与生物碱含量呈显著的负相关性.
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美花石斛茎组织构造及多糖含量比较研究
目的 比较分析不同生长年限美花石斛茎组织构造及多糖含量.方法 用植物组织切片技术和方法观察比较美花石斛组织构造差异和变化;用硫酸-苯酚法测定多糖含量.结果 不同生长年限美花石斛茎的表皮、基本组织以及维管束差异比较大;1年生、2年生和3年生美花石斛茎多糖含量分别为18.36%、23.60%、15.42%.结论 不同生长年限的美花石斛组织构造特征和差异能够反应"表面金黄色、质地柔软和嚼之黏性"等传统品质评价指标;采收期安排在第2年的生长期结束时比较合适,至于具体采收时间,还需要进一步动态分析和研究才能确定.
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不同居群美花石斛种质资源的RAPD分析
目的 分析不同居群美花石斛种质资源的遗传多样性、濒危现状以及亲缘关系.方法 利用RAPD分子标记技术和方法对不同居群美花石斛进行检测;通过计算遗传相似系数建立其聚类分析图.结果 从117个随机引物中,共筛选出8个有效引物,对8个美花石斛居群进行RAPD-PCR扩增,共扩增出287个条带,平均每个引物的扩增条带为35.88个;287个条带共占据78个位点,其中11个位点是8个居群的共有位点,67个为多态位点,多态性比率达85.95%;8个居群的相似性系数在0.149～0.517.结论 美花石斛遗传多样性水平低于铁皮石斛种内遗传多样性水平;美花石斛的濒危原因与人为过度采收、种子自然萌发力弱和遗传多样性水平较低有一定的关系;美花石斛8个居群比较自然地向3个方向演化发展,并形成3个分支;美花石斛系统演化规律与其地理分布的相关性有待于进一步研究.
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美花石斛种质资源的RAPD分子鉴定
目的 采用RAPD分子标记技术对不同产地美花石斛进行分析,为美花石斛种质资源的准确鉴别提供依据.方法 用RAPD分子标记技术对不同产地美花石斛基因组总DNA进行PCR扩增,根据其扩增产物分子量大小进行编码计算.结果 从117种随机引物筛选出8种有效引物,S2108的PCR扩增产物中的特异性位点能够鉴别出广西玉林居群和贵州安居群.结论 利用RAPD分子标记技术鉴别美花石斛种质资源是可行的,在严格控制各项条件下能够保证鉴别美花石斛种质资源的稳定性和重复性.
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美花石斛多糖提取工艺优化及含量测定
目的:优化美花石斛多糖的提取工艺并对其含量进行测定.方法:采用紫外-可见分光光度法测定美花石斛多糖含量,以D-无水葡萄糖标准品为对照,检测波长为489nm.通过单因素考察及正交试验确定美花石斛多糖的佳提取工艺并测定其含量.结果:采用水加热回流法对美花石斛多糖进行提取,确定佳提取工艺条件为:料液比1∶80,提取时间1.5h,提取次数为2次;在此条件下测得不同产地美花石斛多糖的含量在6.18％～10.48％之间.结论:该方法结果准确、可靠,可作为美花石斛多糖的提取方法,为其质量控制提供了依据.
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不同产地美花石斛形态及多糖含量比较研究
不同产地美花石斛株高、茎粗、叶片大小和形状、侧芽数量、质地以及多糖含量等方面差异显著.贵州省兴义和安龙地区的美花石斛多糖含量较高,分别为22.62%和20.96%.建议在规模化生产中,优先选用产于贵州兴义和安龙地区的美花石斛.
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美花石斛的质量研究及其与近似种石斛的比较
目的 建立美花石斛生物碱、联苄类、黄酮类成分的TLC鉴别方法,以及石斛酚、甘露糖与葡萄糖含量测定方法,并与霍山石斛、金钗石斛、流苏石斛、铁皮石斛进行比较,为其质量控制提供科学依据.方法采用TLC法鉴别生物碱、联苄类、黄酮类成分;石斛酚含量测定:采用HPLC法,色谱柱为Kromasil 100-5 C18;流动相为乙腈-水(36:64);检测波长为210 nm;流速为0.5 mL·min-1;柱温为30℃.甘露糖与葡萄糖的含量测定:采用酸水解柱前衍生HPLC方法,色谱柱为Kromasil 100-5 C18;流动相为乙腈-0.02 mol·L-1乙酸铵溶液(20:80);检测波长为250 nm;流速为1.0 mL·min-1;柱温为30℃.结果TLC鉴别中美花石斛分别检出2个生物碱主斑点、包括石斛酚在内的2个联苄类成分主斑点、包括柚皮素在内的5个荧光主斑点,与霍山石斛、金钗石斛、流苏石斛或铁皮石斛有一定区别.石斛酚、甘露糖、葡萄糖线的性关系良好(r=0.9999);平均加样回收率分别为101.5％(RSD为1.95％)、97.9％(RSD为1.94％)、100.0％(RSD为1.36％);10批美花石斛的石斛酚含量为0.0739～0.171 mg·g-1;7批美花石斛的甘露糖与葡萄糖含量分别为5.07％～9.42％、8.43％～13.71％,甘露糖和葡萄糖含量之和为13.50％～22.61％.结论TLC鉴别方法具有一定专属性,可作为美花石斛的鉴别方法之一;含量测定方法准确可靠,重复性好,可作为美花石斛的定量指标.
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霍山石斛与美花石斛多糖柱前衍生 HPLC 特征图谱比较
目的：研究比较霍山石斛与美花石斛多糖柱前衍生高效液相色谱（HPLC）特征图谱的差异。方法以盐酸水解石斛多糖，水解产物加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）进行衍生化，采用 HPLC 法分析单糖的衍生物。色谱柱为 Kromasil 100-5 C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈-0.02 mol·L-1的乙酸铵溶液（冰乙酸调 pH=6.7），梯度洗脱；检测波长为250 nm；柱温为30℃；流速为1 mL·min-1。采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2004A 版）生成对照图谱。结果10批霍山石斛多糖柱前衍生特征图谱标示出6个特征峰，主要由 D-甘露糖（71.8%）与 D-葡萄糖（27.2%）组成，D-甘露糖与 D-葡萄糖峰面积比值为2.05～3.71，此外含微量的 D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖。10批美花石斛多糖柱前衍生特征图谱亦标示出6个特征峰，主要为 D-甘露糖（42.9%）与 D-葡萄糖（54.0%）组成，D-甘露糖与D-葡萄糖峰面积比值为0.67～0.98，此外含微量的 D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖。与对照图谱比较，10批霍山石斛、美花石斛的相似度分别为0.994～1.000，0.934～1.000，霍山石斛与美花石斛共有模式之间的相似度为0.871。结论该方法准确可靠，重复性好；两种石斛多糖构成差异较大，不宜混用。
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美花石斛HPLC特征图谱研究及其与水煎液相关性分析
目的 建立美花石斛HPLC特征图谱分析方法 ,研究美花石斛及其水煎液指纹图谱的相关性.方法采用Kromasil 100-5 C18色谱柱;流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长为280 nm;柱温为35℃;流速为0.8 mL·min-1.结果 16批美花石斛药材样品,标示出22个特征共有峰,相似度为0.854~0.969;10批美花石斛水煎液样品,标示出药材中的16个共有峰,相似度均在0.909以上.经对照品保留时间定位及特征峰紫外光谱分析,鉴别了2个特征峰(峰14为柚皮素、 峰16为石斛酚).每批药材与其水煎液间的相似度为0.815~0.910.结论 方法准确可靠稳定,重复性好,为美花石斛质量控制和物质基础研究提供参考.
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不同栽培方法和生长时间的美花石斛中多糖含量的比较
目的 测定不同栽培方法、生长时间美花石斛中多糖的含量.方法 栽培美花石斛分为激素处理组、光照处理组和对照组,并采集不同生长时间段的石斛药材,采用蒽酮-硫酸比色法测定其多糖含量,测定波长625_(nm).结果 多糖的线性范围为5.0～17.5 μg·mL~(-1)(r=0.9997),平均加样回收率为100.77%,RSD=1.57%(n=6),各实验组多糖含量均呈递增趋势,增长幅度各有差异.结论 葸酮-硫酸比色法快速、准确、灵敏,可作为美花石斛药材质量的检测手段之一;处理措施对美花石斛的多糖累积产生了影响.
