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锥虫蓝囊膜染色技术在过熟期白内障摘除手术中的应用
随着超声乳化白内障吸除手术的不断发展和普及,连续环形撕囊(conunuous curdlineal capsulorrhexis,CCC)技术在手术中的重要性受到更多眼科医生的重视.CCC后平滑、完整的撕囊口可在一定程度上抵抗超声乳化白内障吸除手术撕、拉等操作的作用力,减少晶状体囊膜放射状撕裂导致沉核及玻璃体脱出等相关并发症的发生;同时清晰的撕囊边缘可确保术中人工晶状体(intraocular lens,IOL)植人晶状体囊袋内[1-5],从而保证术后远期IOL位置的稳定性.但是,部分白内障,如过熟期老年性白内障、先天性白内障、青光眼术后白内障等,在超声乳化吸除手术中缺乏眼底红光反射,由于难以辨识前囊膜,致使CCC操作困难.我院白内障治疗中心对过熟期白内障患者使用锥虫蓝前囊膜染色技术进行环形撕囊,增加了术中撕囊的成功率,现将结果报告如下.
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应用鸡胚尿囊绒膜锥虫蓝吸收法评价化学物质的眼刺激性
背景:传统多采用兔眼刺激实验(Draize实验)评价化学物质眼刺激性,即将化学物涂进兔眼睛后观察其变化,这种方法费时,费力,且给动物带来很大痛苦.各国实验室都在寻找动物替代实验的方法.目的:采用鸡胚尿囊绒膜-锥虫蓝吸收实验作为兔眼刺激实验替代方法评价化学物眼刺激性的可行性.设计、时间及地点:观察实验,于2008-05/09在中国检验检疫科学研究院毒理学实验室完成.材料:无特定病原体级受精鸡卵,9 日龄,购于北京梅里亚通实验动物技术有限公司.方法:将1 g/L的锥虫蓝溶液滴加在受化学物质刺激损伤的鸡胚尿囊绒膜上,通过计算鸡胚尿囊绒膜受损伤后吸收锥虫蓝的敏,半定量测定化学物质对鸡胚尿囊绒膜的刺激性,并将所得结果与体内兔眼刺激实验评分结果进行比对,作相关性分析.同时预测了5种常见有机溶剂的眼刺激性.主要观察指标:鸡胚尿囊绒膜受刺激损伤后吸收锥虫蓝的量.结果:鸡胚尿囊绒膜-锥虫蓝吸收法与体内兔眼刺激实验评分结果相关性很好(R2=0.925 9).5种常见有机溶剂未稀释时,甘油无眼刺激性,丙酮、乙醇、二甲基业砜、甲醇均有较高刺激性.当稀释为1%后,内酮、乙醇、二甲基亚砜无眼刺激性,但甲醇刺激性仍然较高.结论:鸡胚尿囊绒膜-锥虫蓝吸收法可以代替兔眼刺激试验对化学物质眼刺激性进行评价.
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人血红素加氧酶1过表达大鼠骨髓间充质干细胞对缺血缺氧环境损伤的耐受能力
背景:骨髓间充质干细胞移植后在宿主恶劣的缺血缺氧微环境中生存率过低,限制了其治疗急性心肌梗死的疗效.目的:探讨人血红素加氧酶1基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞对缺血缺氧环境损伤的耐受能力.方法:人血红素加氧酶1重组腺病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞,Western blot法确定人血红素加氧酶1蛋白表达的佳时间;以缺氧无血清条件模拟体内缺血缺氧微环境培养人血红素加氧酶1基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞,采用CCK-8试剂盒和锥虫蓝染色法检测缺血缺氧培养12,24,48,72 h的细胞存活率,流式细胞术检测缺血缺氧培养24 h的细胞凋亡情况.结果与结论:①在转染后第4天人血红素加氧酶1蛋白表达量多;②锥虫蓝染色法和CCK-8法检测人血红素加氧酶1组缺血缺氧培养12,24,48,72 h的细胞生存率均高于对照组(P＜0.05);③流式细胞术检测人血红素加氧酶1组缺血缺氧培养24 h的生存率高于对照组(P＜0.05);④结果表明,人血红素加氧酶1修饰的大鼠骨髓间充质干细胞对缺血缺氧环境损伤的耐受能力明显增强.
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大鼠肺移植供肺保存过程中细胞死亡类型的动态变化
目的 通过对供肺保存过程中细胞凋亡和细胞坏死的动态变化的研究,探讨建立一种可以准确评估供肺保存质量的实验模型.方法 清洁级健康雄性Sprague-Dawley大鼠42只,体重250～300 g,预先分为7组,每组6只.整体获取心肺,置于4℃的新鲜制备的低钾右旋糖酐(LPD)溶液中保存.保存不同的时间(0、2、4、6、12、18、24 h)后,通过主肺动脉向肺内灌注20 mL的500 mmol/L锥虫蓝、20 mL生理盐水和10 mL 4%的多聚甲醛后固定,蜡块包埋后按4 μm层厚切片.在光学显微镜下观察锥虫蓝染色情况;另一方面作TUNEL染色和Hoechst染色,在荧光显微镜下观察,严格按照盲法原则由两位研究者对死亡细胞进行分类计数.结果 随着供肺低温保存时间的延长,细胞死亡数量上逐渐增加,而且细胞的死亡类型上发生动态变化.在低温保存的条件下,4 h组才开始有少量的坏死细胞出现,随着保存时间的逐渐延长,细胞坏死也逐渐增加,在供肺保存18 h以上组,坏死细胞显著增加;而细胞的凋亡开始于供肺保存2 h组,在供肺保存12 h组达到高峰,约占所有细胞的9%,在供肺保存18 h组基本消失.结论 通过对不同保存时间的供肺进行锥虫蓝、TUNEL、Hoechst三染色的方法,能很好的显示供肺保存后的细胞凋亡和坏死的情况.
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大鼠前列腺的锥虫蓝透过性实验研究
目的:了解大鼠正常前列腺、炎症前列腺以及良性增生前列腺的锥虫蓝透过性.方法:取60只SD雄性大鼠,随机分为正常组(NP,n=15)、细菌性前列腺炎组(BP,n=15)、良性前列腺增生组(BPH,n=15)、良性增生合并细菌性前列腺炎组(BPH-BP,n=15),各组随机抽取5只作为不注射锥虫蓝的对照组(NC,n=5×4),其余10只分别由尾静脉注射2ml1%锥虫蓝溶液.2h后麻醉处死动物和分离前列腺,肉眼直接观察各组大鼠的前列腺被锥虫蓝染色情况,并用比色法检测前列腺组织的锥虫蓝浓度.结果:注射锥虫蓝的各组大鼠除脑组织和脊髓组织外,前列腺的表面及内部组织与肌肉、肝脏、肠道等组织同样被染成相似的蓝色.BP组和BPH-BP组前列腺的锥虫蓝含量明显高于BPH组及NP组前列腺的锥虫蓝含量(P<0.05).结论:大鼠的正常前列腺、良性增生前列腺以及炎症前列腺都容易被具有较高分子量和离子化性质的锥虫蓝透过,但炎性前列腺具有更加明显增高的锥虫蓝透过性.
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锥虫蓝囊膜二次染色在外伤性白内障手术中的应用
目的 探讨锥虫蓝囊膜二次染色在外伤性白内障手术中应用的效果.方法 对16例(16只眼)外伤性白内障采用0.01%锥虫蓝对晶状体前后囊膜染色后再行囊膜处理,常规进行白内障摘除人工晶状体植入,术后观察视力及前房内炎症情况.结果 术后3天视力及前房内炎症情况与白内障常规手术后反应相似,人工晶状体前表面均未见染色剂沉着.结论 将锥虫蓝应用于外伤性白内障手术,术中能清晰观察到蓝白相间的撕囊轨迹,较容易控制撕囊方向而保持了囊袋的完整性,植入人工晶状体稳定,且位于生理位置,更好地保护视功能.
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锥虫蓝直接染色法鉴定人羊膜细胞活力方案研究
目的 摸索锥虫蓝直接染色法在人羊膜细胞活力快速鉴定中的适宜浓度及染色时间.方法 取健康剖宫产产妇的胎膜6张,浸泡后分离羊膜并剪成1 cm×1 cm备用.(1)取部分制备好的羊膜分别浸泡于1、2、3、4 g/L4种浓度的锥虫蓝溶液中,每个浓度下各浸泡1、3、4、10 min后取出,在PBS中漂洗30s,更换PBS,继续漂洗30 s.存光学显微镜下选取4个视野拍照,每个视野计数1000个细胞,同时计数蓝染细胞计算细胞死亡率.(2)另取部分制备好的羊膜浸泡于0.5 g/L氯己定1h后行锥虫蓝直接染色,锥虫蓝溶液浓度与染色时间为前一实验结果选定的浓度、时间,并与1 g/L锥虫蓝染色10 min对比.后续操作及检测同前一试验.对数据行两因素析因设计方差分析、Duncan多范围检验及LSD检验. 结果 (1)1、2、3 g/L锥虫蓝染色1、3 min后细胞死亡率相近(P值均大于0.05),染色4、10 min后细胞死亡率明显高于1、3 min(P值均小于0.05).4 g/L锥虫蓝染色1、3、4 min后细胞死亡率相近(P值均大于0.05),染色10 min后细胞死亡率显著高于1、3min(P值均小于0.05).锥虫蓝浓度为2、3、4 g/L时,各时相点细胞死亡率都显著高于1 g/L(P值均小于0.05).(2)对经0.5 g/L氯己定浸泡1h羊膜染色显示,1 g/L锥虫蓝染色1 min细胞死亡率[(72.6±7.4)％]显著低于预计死亡率(100.0％,P ＜0.05),染色3 min细胞死亡率[(95.3±5.6)％]、染色10 min细胞死亡率[(99.8±5.0)％]与预计死亡率相近(P值均大于0.05). 结论 锥虫蓝直接染色法鉴定人羊膜细胞活力的适宜方案为浓度1 g/L,染色时间3 min.
