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大鼠肺移植供肺保存过程中细胞死亡类型的动态变化
目的 通过对供肺保存过程中细胞凋亡和细胞坏死的动态变化的研究,探讨建立一种可以准确评估供肺保存质量的实验模型.方法 清洁级健康雄性Sprague-Dawley大鼠42只,体重250～300 g,预先分为7组,每组6只.整体获取心肺,置于4℃的新鲜制备的低钾右旋糖酐(LPD)溶液中保存.保存不同的时间(0、2、4、6、12、18、24 h)后,通过主肺动脉向肺内灌注20 mL的500 mmol/L锥虫蓝、20 mL生理盐水和10 mL 4%的多聚甲醛后固定,蜡块包埋后按4 μm层厚切片.在光学显微镜下观察锥虫蓝染色情况;另一方面作TUNEL染色和Hoechst染色,在荧光显微镜下观察,严格按照盲法原则由两位研究者对死亡细胞进行分类计数.结果 随着供肺低温保存时间的延长,细胞死亡数量上逐渐增加,而且细胞的死亡类型上发生动态变化.在低温保存的条件下,4 h组才开始有少量的坏死细胞出现,随着保存时间的逐渐延长,细胞坏死也逐渐增加,在供肺保存18 h以上组,坏死细胞显著增加;而细胞的凋亡开始于供肺保存2 h组,在供肺保存12 h组达到高峰,约占所有细胞的9%,在供肺保存18 h组基本消失.结论 通过对不同保存时间的供肺进行锥虫蓝、TUNEL、Hoechst三染色的方法,能很好的显示供肺保存后的细胞凋亡和坏死的情况.
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肺移植术的供肺保存研究现状
肺移植术是治疗终末期肺疾病的有效方法,而供肺的保存技术关系到肺移植术的成败.而且,这已成为近10年来肺移植研究的焦点.本文就肺移植术中供肺保存的相关问题作一综述.
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供肺的获取、灌注与保存技术
目前肺移植手术供肺获取后需保存4～6h,即供肺缺血时间不得＞6h.近年来,虽然在动物实验中肺保存时间可长达18～24h,但临床仅有个别报道供肺保存9～12h.延长供肺的保存时间、保持供肺的氧合功能是肺移植成功的保证.因此,对供肺的获取、灌注与保存技术十分重要.
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肺动脉和支气管动脉双循环冲洗在供肺保存中的作用
目的:探讨肺动脉和支气管动脉双循环冲洗在供肺保存中的作用.方法:12只健康新西兰白兔随机分为2组:对照组(肺动脉冲洗组)和实验组(肺动脉和支气管动脉双循环冲洗组),每组6只.供肺经过24 h保存后采用离体肺循环灌流模型再灌流60 min.灌流中观察2组肺动静脉血氧分压差(△pO2)、二氧化碳分压差(△pCO2)、肺动脉压(pPA)、气道压(pAW)、静态肺顺应性(Cstat)的变化和2组保存末、灌流末肺组织和灌流末支气管肺泡灌洗液中的总磷脂(TPL)、卵磷脂(PC)、卵磷脂/总磷脂(PC/TPL)、卵磷脂/鞘磷脂(L/S)的变化.比较2组间肺质量湿干比(W/D).结果:实验组灌流中△po2、△pCO2、Cstat明显高于对照组,PPA、pAW明显低于对照组,保存末、灌流末肺组织和灌流末支气管肺泡灌洗液中的TPL、PC、PC/TPL、L/S均明显高于对照组,W/D明显低于对照组.结论:肺动脉和支气管动脉双循环冲洗能保护肺表面活性物质磷脂,从而改善供肺保存和再灌注后的肺功能.
关键词： 供肺保存 肺动脉和支气管动脉双循环冲洗 肺表面活性物质 磷脂 -
前列腺素E1在低钾右旋糖酐液供肺保存中的作用
目的探讨前列腺素E1(PGE1)是否能改善低钾右旋糖酐液的肺保存效果.方法实验动物分为对照组(单纯肺动脉冲洗组)和实验组(肺动脉冲洗前经肺动脉注射PGE1组).供肺经24 h保存后采用离体肺循环灌流模型再灌流60 min.灌流中观察肺动静脉血氧分压差(ΔPO2)、肺动静脉血二氧化碳分压差(ΔPCO2)、肺动脉压(PAP)、气道压(PAW)、静态肺顺应性(Cstat)的变化,并比较两组间肺重湿干比(W/D).结果实验组肺动脉冲洗时间明显缩短,但冲洗末肺组织中仍残存血液成分.灌流中同对照组一样出现肺不张、肺水肿、肺出血,肺功能也未明确改善.结论前列腺素E1并不能改善低钾右旋糖酐液的供肺保存作用.建议在应用PGE1时为保证彻底冲洗,应加大冲洗液用量.
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兔左肺原位移植模型的建立
随着临床肺移植的发展,需要对包括供肺保存、缺血-再灌注(I/R)损伤等相关领域进行更广泛深入的研究.大鼠是目前在肺移植研究中广泛使用的实验动物[1].但相对于大鼠,家兔是手术操作接近临床实际且经济性较好的异体原位肺移植实验动物,在肺移植研究中有着广泛前景.
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持续灌注氧合血保存的离体猪肺缺血再灌注损伤体外评估
目的 探讨氧合血体外持续灌注对离体供肺的保护作用.方法 将Celsior液单次经肺动静脉灌注后的供肺,分为对照4个组(低温静态法,C4、C8、C12、C18组)及实验4个组(体外灌注法,T4、T8、T12、T18组).保存后的离体供肺再与体外灌注系统及呼吸机连接工作6h,检测离体供肺通气阻力(LR)、左下肺静脉血氧分压(LIPV-PO2)、左下肺静脉血二氧化碳分压(LIPV-PCO2)、肺含水量(LWC)等肺功能指标,光镜观察肺水肿分级(LEC),原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡.结果 肺功能评估:(1)体外灌注法肺功能相对稳定,T18组LR、LWC才显著高于T4组(P值分别为0.012、0.010);低温静态法C12组LR、LWC已显著高于C4组(P值分别为0.018、0.015);相同时间点T12、T18的LR、LWC分别显著低于C12、C18(LR:P值分别为0.025、0.028;LWC:P值分别为0.021、0.027);(2)肺损伤评估:体外灌注法T18组LEC及凋亡细胞数显著高于T4组(P值分别为0.023、0.020);低温静态法C12、C18组LEC显著高于C4组(P值分别为0.023、0.020),凋亡细胞数也显著增高(P值分别为0.015、0.011);C18组LEC及凋亡细胞显著高于T18组(P值分别为0.007、0.026).结论 氧合血体外持续灌注可明显减轻低温保存供肺所致的时间依赖性缺血再灌注损伤,但仍需在完全生理状态下进行进一步评估.
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肺移植手术中供肺保存液的研究现状
肺移植手术是治疗终末期肺部疾病的惟一有效方法,但仍然有许多相关问题须待解决.除了供肺严重缺乏外,因缺血-再灌注损伤导致的移植肺功能异常是肺移植手术患者常见的早期死亡原因之一.保存移植肺的佳状态对减轻肺移植术后缺血器官功能障碍至关重要.因此,寻找一种高度可靠的肺保存液,对减轻移植肺的缺血-再灌注损伤、提高肺移植术后肺功能有着十分重要的意义.现就供肺保存液的种类、灌注方式、灌注条件及其改良措施的研究现状进行综述.
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肺移植中供肺保存的研究进展
作为终末期肺病的唯一有效方案,肺移植受困于器官供体缺乏、术后感染、术后排异反应多之外,原发性移植物功能障碍(primary graft dysfunction,PGD)是术后患者早期死亡的主要原因.缺血再灌注损伤是主要导致肺功能早期损坏的原因.为此,一种稳定的肺保存液,合理规范的灌洗措施对于减轻再灌注损伤、提高肺移植术后肺功能有着十分重要的意义.本文就供肺保存液的种类、灌注方式、灌注条件及其改良措施的研究现状进行了综述.
