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实验性大鼠青光眼模型诱导热休克蛋白27的表达
目的 测定热休克蛋白(HSP)家族中HSP27、HSP70和HSP90在正常和实验性大鼠青光眼模型视网膜中的蛋白质水平,探索其与青光眼视神经病变的潜在关系.设计实验性研究.研究对象 60只Wistar大鼠.方法 将60只大鼠随机分为高眼压组(30只),假手术对照组(30只),右眼为实验眼,左眼为对照眼.采用双极电凝器电凝巩膜表面3组静脉,建立高眼压模型,用Tonopen眼压计检测眼压,每周2次,取眼压在27～35 mmHg的大鼠进行研究.在眼压升高第10、20和60天处死大鼠,匀浆提取视网膜蛋白质用于Western印迹分析,并用β-actin校正点样误差.主要指标眼压、Western印迹分析.结果 Western印迹分析显示,在眼压升高第10、20及60天,视网膜HSP27的蛋白质水平平均为对照组的197%.在实验眼视网膜内未观察到HSP70、HSP90蛋白质水平的变化.结论 在高眼压状态下大鼠视网膜HSP27上调,而HSP70和HSP90无变化.HSP27为眼压升高导致的特定基因改变,其持续过度表达可能与青光眼视神经病变有关.
关键词： 热休克蛋白 青光眼模型 Western印迹分析 动物实验 -
房角金环植入术治疗家兔高眼压模型
目的 评价一种新的抗青光眼滤过性手术--房角金环植入术的疗效.方法 41只新西兰白兔右眼后房内注入α-糜蛋白酶,制成高眼压模型.4周后,15眼行房角金环植入术,14眼行巩膜后唇咬切术,12眼高眼压作对照组.结果 房角金环植入组术后40天内、巩膜后唇咬切组术后22天内的眼压均较对照组有显著下降(P＜0.05);术后第1天,巩膜后唇咬切组低眼压的发生率高于房角金环植入组(P＜0.01);房角金环植入组手术成功维持时间(44.4±18.3天)长于巩膜后唇咬切组(27.7±9.5)(P＜0.05);房角金环植入组滤过泡持续19.7±10.4天,巩膜后唇咬切组持续6.9±2.9天(P＜0.11);术后7～22天,前者滤过泡得分高于后者(P＜0.05).结论 房角金环植入术能有效降低家兔的眼压,其临床应用价值有待进一步验证.
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青光眼家兔玻璃体内游离谷氨酸盐浓度的测定
[目的]建立高效液相荧光检测法,测定青光眼家兔玻璃体游离谷氨酸盐浓度.[方法]于青光眼家兔玻璃体分别灌注葛根素和灯盏乙素阳离子脂质纳米粒和药物溶液,在色谱条件为Diamonsil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为50 mmol磷酸盐缓冲液:甲醇(25:75),流速为1.0 mL/min,柱温30℃,荧光检测器的激发波长(λex)350 nm,发射波长(λem)450 nm下测定透析液中游离谷氨酸盐浓度.[结果]玻璃体内植入探针的在体回收率为33.60%(r=0.9706).在玻璃体内灌注葛根素和灯盏乙素阳离子脂质纳米粒组与药物溶液组后,测定不同时间点的游离谷氨酸盐浓度,结果表明与溶液组相比,制剂组谷氨酸盐浓度降低1.59倍,有统计学差异(P<0.05).[结论]该方法简便、准确、可靠,为玻璃体游离谷氨酸盐的测定提供参考.
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建立猴青光眼模型的方法
猴的特殊性和珍贵性使其在青光眼的研究中被谨慎采用,造模方法 也较其他动物少且发展缓慢.本文就国际公认的几种有效制造猴青光眼模型的方法 作一总结,为研究人员提供参考.
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高渗盐水诱导大鼠高眼压模型的建立和应用价值
采用高渗盐水注入到大鼠眼的房水流出途径诱导的大鼠慢性高眼压性青光眼模型是近年发展起来的新技术,本文就该模型的建立和应用进行了综述.
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针刺降低青光眼模型兔眼压的机理探讨
目的 探讨针刺降低急性高眼压的机理.方法 12只家兔急性青光眼模型造模成功后4 h分为2组,实验组6只家兔进行针灸治疗,对照组6只未做处理.造模前和造模后4 h、针刺后1 h进行眼压测定和酶联免疫检测方法 行血浆β-内啡肽含量的测定.结果 12只家兔眼压值造模前为(7.50±1.62)mmHg,造模后4 h为(19.86士9.45)mmHg,两者比较有统计学差异(P＜0.05).针刺组针刺前、针刺后眼压分别为(20.89±11.3)mmHg、(7.55士5.70)mmHg,有统计学差异(P＜0.05).血浆β-内啡肽浓度,针刺前针刺组与对照组比较无统计学差异,2组针刺前后无统计学差异,但针刺后针刺组比对照组明显升高,有统计学意义(P＜0.05).结论 在高眼压状态下针刺治疗可以降低眼压,同时使血浆中β-内啡肽浓度升高,针刺降眼压的机理可能和血浆β-内啡肽浓度升高有关.
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激光光凝法诱导大鼠高眼压模型的有效性评估
目的 评估激光光凝法诱导大鼠高眼压模型的有效性.方法 532 nm激光光凝小梁网法诱导大鼠左眼高眼压(n=45,右眼为对照眼),评估激光后大鼠眼压、视网膜神经节细胞及视网膜电图的变化;采用Tono-Lab眼压计测量清醒状态下的双眼眼压,每天1次;激光后3周,采用双盲法计数双眼视网膜铺片上免疫组织化学法标记的阳性节细胞数;记录大鼠双眼基线及处死前的视网膜电图.结果 激光后90.70％(39/43眼)的大鼠眼压升高,其中需要第2次激光者占74.42％(32/43眼).激光后右眼的眼压为(16.13±1.11)mmHg(n =39;1 kPa=7.5 mmHg);左眼中有28.21％眼(n=11)眼压升高(18.27±2.53)d,其余眼(n=28)眼压升高(7.93±2.40)d,两者的眼压分别为(35.59±4.57) mmHg、(21.56±3.06) mmHg,两者的峰值眼压分别为(63.36±4.23) mmHg、(49.43±7.22) mmHg;实验眼与对照眼之间的峰值眼压差为(31.13±8.64) mmHg,累积眼压差为(182.31±140.35) mmHg,左右眼的眼压相比差异有显著统计学意义(P=0.000).激光后3周,两个高眼压组的节细胞数相比,差异无统计学意义(P =0.693),左眼的节细胞丢失率为67.4％±14.8％,与右眼相比差异有显著统计学意义(P=0.000).左眼视网膜电图明适应b波、PhNR波及暗适应b波的潜伏期与激光前相比,差异均有统计学意义(P=0.000、0.046、0.000),其振幅与激光前相比,差异也均有显著统计学意义(P =0.001、0.000、0.000),而明适应a波的潜伏期、振幅及暗适应a波的潜伏期与激光前相比,差异均无统计学意义(P =0.138、0.198、0.092).结论 激光光凝法诱导大鼠眼压升高成功率较高,但持续时间有限,峰值眼压过高,且需重复激光,高眼压引起的节细胞丢失率高,视网膜电图提示视网膜损伤主要累及双极细胞及节细胞.
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前房注射衣霉素建立大白兔慢性青光眼模型
目的 本实验采用衣霉素(tunicamycin,Tm)前房注射,利用其对大白兔小梁细胞的过度应激致凋亡作用,旨在建立一种新型的高眼压模型.方法 选择6～8周健康新西兰大白兔22只,通过前房注射衣霉素建立慢性青光眼模型,将大鼠行右眼前房注射4μg衣霉素(实验组),其左眼前房注射等量溶剂作为对照;术后3d、5d、1周、2周、3周、4周、5周、6周用TONO-PEN AVIA眼压计检测眼压,并观察眼部一般情况及术后并发症.分批处死大白兔,取材做石蜡切片并行HE染色观察视网膜各层结构改变.数据采用SPSS 14.0统计软件进行统计学处理.结果 术前大白兔双眼眼压值差异无显著性(P＞0.05),具有可比性.1次注射后,8只大白兔造模成功,成功率为36.36％ (8/22);2周后,给予2次注射后,2次注射造模成功率为68.18％ (15/22).术后3d、5d、1周、2周、3周、4周双眼眼压比较,右眼眼压明显高于左眼,差异均有统计学意义(均为P＜0.01);术后5周、6周双眼眼压比较差异亦均有统计学意义(均为P＜0.05),但左眼高于右眼.病理检查结果显示:高眼压者(实验组)神经节细胞-视网膜神经纤维层及视神经损害,并随时间延长而进一步加重,眼压不高的实验组及对照组眼球病理改变不明显.对照组和实验组的视网膜神经节细胞、内丛状层厚度分别为(74.38±7.27)μm和(58.41±8.29) μm(P ＜0.01);视网膜神经纤维层厚度分别为(92.59±10.21) μm和(74.62±11.65)μm(P ＜0.01).结论 前房注射衣霉素,能诱发大鼠眼压升高,但眼压升高幅度不等、维持时间长短不一、成功率较低,2次注射能显著提高造模成功率;大白兔高眼压模型出现了明显的眼球结构改变以及视网膜神经纤维层及视神经损害.
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青光眼模型家兔血浆β-内啡肽浓度与眼压关系的研究
目的 探讨青光眼模型家兔血浆β-内啡肽浓度与眼压的关系.方法 采用前房内注射20 g·L-1甲基纤维素制作家兔青光眼模型,共6只.造模成功后4 h、8 h、24 h进行眼压测定,采用酶联免疫检测方法测定血浆β-内啡肽浓度.结果 6只家兔眼压值造模前,造模后4 h、8 h、24h分别为(7.61±1.68)mmHg(1 kPa=7.5 mmHg)、(18.83±8.01)mmHg、(12.72±5.30)mmHg、(10.22±5.01)mmHg.血浆β-内啡肽浓度造模前为(22.97±7.68)μg·L-1,造模后4 h、8 h、24h分别为(49.20±21.94)μg·L-1、(39.30±8.56)μg·L-1、(32.18±11.92)μg·L-1.造模后4 h、8 h眼压值与血浆β-内啡肽浓度与造模前比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),造模后24 h眼压值与血浆β-内啡肽浓度与造模前比较差异均无统计学意义(均为P＞0.05).血浆β-内啡肽浓度与眼压水平呈正相关(P＜0.05).结论 血浆中β-内啡肽浓度的异常变化可能是青光眼眼压调控机制中的一个重要环节.
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两种方法建立大鼠慢性青光眼模型的对比研究
目的 评价2种大鼠慢性青光眼模型的效果.方法 通过单纯烙闭3条大鼠巩膜上静脉(单纯手术组,n=19)和烙闭巩膜上静脉同时给予5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)(手术给药组,n=23)2种方法制作大鼠慢性高眼压模型,观察术前和术后1 d、3 d、5 d、1周、2周、1个月和2个月早晚眼压变化,并于术后1周、2周、1个月和2个月摘除眼球,光镜观察大鼠视网膜各层组织厚度变化,荧光金逆行标记视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)并计数,TUNEL染色,比较2组模型检测指标.结果 2组模型大鼠术后眼压均明显升高,随着高眼压时间持续延长,RCGCs逐渐减少及视网膜神经纤维层逐渐变薄,剩余RGCs数量逐渐减少,但2组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 持续高眼压导致大鼠RGCs的病理改变过程及其结果符合青光眼视神经损伤的病理特点.单纯烙闭大鼠巩膜上静脉即可获得稳定有效的慢性青光眼模型.
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房水抽吸联合激光房角光凝法建立大鼠慢性青光眼模型
目的 建立一种新的大鼠慢性青光眼模型并观察相应的眼压变化和视网膜病理改变.方法 Wistar雌性大鼠80只,通过角巩膜缘前房穿刺抽吸房水使前房消失,使用多波长黄绿激光行右眼角膜缘(房角)360°光凝,角膜缘激光斑为60～80个,并光凝颞侧、颞上及颞下巩膜浅层静脉,每条静脉光凝3～4个斑点;左眼为对照眼.于术后1、3、7、14、21、28、35、42、49、56d用Tono-Pen XL眼压计监测眼压.激光术后7、14、28、42、56d制作大鼠眼球视网膜铺片,行Nissl染色、视网膜神经节细胞(RGCs)定量检测.部分标本制备冰冻切片,行苏木精-伊红染色,光学显微镜下观察模型眼房角的病理变化.结果 73只大鼠实验眼眼压较术前明显升高.激光光凝术前大鼠眼压为(16.56±1.84)mmHg,术后1d眼压为(21.33±2.64)mmHg,术后7d模型眼眼压达峰值,为(30.31±3.22)mmHg,高眼压状态持续21d,28d时眼压为(17.08±1.36)mmHg.术后1～21d,眼压值与术前比较差异均有统计学意义(P＜0.05),术后28d眼压值与术前相比差异无统计学意义(P＞0.05).对照眼各时间点眼压间比较差异无统计学意义(P＞0.05).组织病理学检测表明,实验眼前房角明显变窄,小梁网间隙压缩、变窄,部分闭锁、消失;少量梭形成纤维细胞聚集,小梁网组织致密、硬化,小梁细胞减少;部分虹膜卷曲、水肿、肥厚.术后28d RGCs计数实验眼为(56.67±1.64)个,对照眼为(67.56±6.13)个,二者比较差异有统计学意义(P＜0.05);术后56d实验眼为(45.56±12.33)个,对照眼为(68.33±3.25)个,二者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 房水抽吸联合激光房角光凝法是一种成功率高、操作简单的大鼠慢性青光眼模型制作方法.
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大鼠慢性高眼压模型的建立及玻璃体游离谷氨酸变化的实验研究
目的 建立大鼠慢性高眼压模型,观察不同时期的眼压变化、视神经的损伤情况和玻璃体中游离谷氨酸浓度的变化.方法 Wistar大鼠30只,分为3组.用波长为532nm的氪离子黄绿激光光凝大鼠小梁网,光凝前测量一次眼压,以后每周测量眼压.在第3、6、9周分别处死1、2、3组大鼠做全视网膜铺片,1%甲苯氨蓝染色,记数平均视网膜神经元细胞密度;取20μL玻璃体用高效液相色谱分析仪测量游离谷氨酸盐浓度.结果 对照眼平均眼压为(13.25±4.10)mmHg,光凝眼第1～9周平均眼压升高了1.73～2.17倍.对照眼视网膜神经元密度值为2516±196,第3、6、9周光凝眼分别为2124±108,1865±136,1654±125,差异均有统计学意义(P=0.037);第3、6、9周光凝眼玻璃体游离谷氨酸盐浓度分别为(20.10±2.45)μmol/L,(22.35±2.75)μmol/L,(23.56±2.80)μmol/L,对照眼为(18.32±2.3)μmol/L,差异均无统计学意义(P=0.661).结论 激光光凝大鼠小梁网后,眼压中等程度升高;大鼠慢性高眼压模型的视神经损害表现为视网膜神经元密度值逐渐下降,玻璃体中游离谷氨酸盐浓度变化不明显.
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大鼠青光眼模型视网膜神经节细胞凋亡的研究
视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)凋亡是造成青光眼视神经损害的主要原因.本研究建立大鼠青光眼模型,TUNEL法检测大鼠RGCs凋亡,探讨青光眼的发病机制.
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慢性青光眼模型的比较与分析
青光眼是仅次于白内障的第二大致盲眼病,但是其机制目前尚不清楚,目前有多种学说解释青光眼的视神经损伤,其中比较公认的是机械学说、缺血学说、遗传学说等,但都不能完全揭示青光眼的发病机制,所以青光眼模型的建立方法各异.其中增高动物眼压是常用的建立模型的方法,眼压升高可以导致视网膜中央动脉对视网膜内层供血不足,导致缺血缺氧、自由基形成、兴奋性中毒等,从而导致视网膜节细胞不可逆损伤,这也是青光眼的终病理现象.目前尚无两种青光眼模型的比较报道,我们着重研究两种青光眼模型导致视网膜病理变化的比较,试图发现两种模型的区别,指导其应用,报告如下.
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大鼠实验性慢性高眼压对视网膜神经节细胞的损伤
目的:制作高眼压大鼠模型,观察高眼压对视神经的损害.方法:成年Wistar雄性大鼠65只,烧灼右眼上方2支和外侧1支巩膜上静脉,建立慢性高眼压模型.左眼作为对照眼.对造模成功的,分别于造模后1d,1, 2, 3, 4, 6, 8, 10wk各摘除6只大鼠双眼.在取出眼球前24h,用Fluorogold进行视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)逆行性染色,做视网膜铺片计数RGC,观察不同时段高眼压对RGC的影响.结果:右眼巩膜上静脉烧灼后各时间点造模眼平均眼压分别为42.2±1.8mmHg,37.9±2.3mmHg,36.1±2.0mmHg,33.6±2.2mmHg,32.2±2.4mmHg,30.1±2.0mmHg,30.5±2.1mmHg和27.6±1.3mmHg.术后各时间点的成模率分别为80.0%,76.9%,74.5%,71.7%,63.8%,56.1%,42.9%,41.4%.成模率和成模眼的眼压随时间延长呈下降趋势.实验组和对照组的RGC密度在早期(巩膜上静脉烧灼术后3wk内)没有显著差别.造模后4wk高眼压组RGC密度明显低于对照组(P<0.05),随着时间的推移差别越来越显著.结论:巩膜上静脉烧灼法能诱导出持续的肯定的大鼠慢性高眼压模型,成模眼的眼压和随时间而下降.高眼压持续的时间越长,RGC的损失越多.
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脑组织NOS的表达和急性高眼压诱导的视网膜缺血再灌注损伤研究进展
青光眼时眼压升高能造成视网膜缺血性损害,其中一氧化氮(NO)的作用愈来愈受到关注.NO作为一种可扩散的化学信使,在调节神经传导,血管舒张,神经性细胞毒性等方面有重要作用.近年的研究表明,急性青光眼致视网膜缺血再灌注损伤会向中枢视觉系统发展[1].近20年来人们普遍采用视网膜神经节细胞和中枢视觉系统作为体内外研究中枢神经系统损伤与再生的模型[2].在猴实验性青光眼模型中发现,随着视神经的变性损伤,外侧膝状体的神经元会发生不同程度的萎缩,且与视神经纤维的丧失程度[3]和眼压升高程度[4]有关.Lam等[5]在猕猴的青光眼模型中,发现视皮质的神经化学物质重新分布.Imamura等[6]通过对外侧膝状体和视皮质的研究,发现某种可塑性机制可能在这两个层面弥补着急性青光眼视网膜功能的变化.
