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ki-67、细胞周期蛋白依赖性激酶4在胆脂瘤型中耳乳突炎中的表达及意义
目的探讨ki-67、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)在中耳继发胆脂瘤上皮中的表达,研究它们在胆脂瘤型中耳乳突炎中的作用.方法利用免疫组化的方法,检察32例胆脂瘤上皮和11例正常外耳道皮肤中的ki-67、CDK4蛋白的表达情况.结果ki-67在胆脂瘤上皮和外耳道皮肤中均为阳性表达,阳性细胞率分别为33.2%±13.2%、14.5%±4.9%,两组之间的差异具有显著性(P＜0.05);CDK4在胆脂瘤上皮和外耳道皮肤中阳性细胞率分别为35.6%±14.6%、13.6%±5.1%,两组之间的差异具有显著性(P=0.001).结论ki-67和CDK4在胆脂瘤上皮表达增高.
关键词： 胆脂瘤 增生 Ki-67 细胞周期蛋白依赖性激酶4 -
脑星形细胞瘤中CDK4蛋白表达及意义
目的探讨脑星形细胞瘤中CDK4基因蛋白的表达,及其与星形细胞瘤病理学分级关系.探讨G1→S期CDK4在星形细胞瘤发生,发展过程中的作用.方法采用SP免疫组化技术结合高温高压抗原修复法,在光学显微镜下检测33例人脑星形细胞瘤中CDK4蛋白的定位、定量及其阳性表达率与病理分级之间关系.结果星形细胞瘤细胞中CDK4基因的表达高于正常对照脑组织细胞,CDK4阳性表达主要位于胞浆.CDK4阳性表达率在各级别间比较有显著差异性差异(P＜0.05),同时发现低级别肿瘤中有3例CDK4基因呈过度表达,占15%,而在高恶性度组星形细胞瘤中均存在CDK4基因过度表达.结论在脑星形胶质细胞瘤中存在着CDK4基因蛋白的异常表达,其与脑星形细胞瘤的发生及恶性发展可能有关,CDK4基因的异常表达对星形细胞瘤病理分级有指导意义.
关键词： 脑星形细胞瘤 细胞周期蛋白依赖性激酶4 蛋白表达 -
人CDK4 cDNA克隆和原核表达
目的从人肝癌组织细胞中克隆人CDK4基因和原核表达CDK4蛋白.方法用逆转录PCR方法从人肝癌组织RNA中扩增出CDK4 cDNA,然后与T载体和PET28a+载体重组,转化受体菌和诱导表达,DNA序列分析和Western blot鉴定重组质粒和蛋白表达.结果PCR扩增出900 bp的DNA片段,与T载体和PET28a+载体重组得到人CDK4基因的重组质粒,DNA序列显示为人CDK4的cDNA全序列;IPTG可以诱导重组菌表达蛋白;Western blot结果表明为人CDK4蛋白.结论用逆转录PCR方法扩增出人CDK4 cDNA,并与PET28a+载体重组得到能够用IPTG诱导表达的人CDK4蛋白.
关键词： 细胞周期蛋白依赖性激酶4 原核表达 -
SMYD3调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖机制的研究
目的:通过转染技术抑制或增强SMYD3基因的表达,以探讨SMYD3对乳腺癌MCF-7细胞增殖的调控机制机制.方法:以MTT法和软琼脂克隆形成实验研究抑制或增强SMYD3基因表达对细胞增殖的影响,以RT-PCR法和Western印迹法检测MCF-7细胞经转染后,胞内SMYD3、ERK/MAPK通路相关蛋白及其磷酸化产物,以及凋亡和细胞周期调控相关蛋白表达水平的变化.结果:用针对SMYD3基因的shRNAs表达质粒转染MCF-7细胞后,其SMYD3基因mRNA和蛋白表达水平下调,细胞生长受到抑制,细胞中ERK1/2、CyclinD1和CDK4蛋白水平明显下调；软琼脂克隆形成实验显示,增强SMYD3基因表达能明显促进MCF-7细胞克隆形成.结论:SMYD3可通过激活ERK/MAPK信号转导通路和上调细胞周期相关蛋白CyclinD1和CDK4的水平提高肿瘤细胞的增殖能力.
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细胞周期调控系统相关因子 Cyclin D1-CDK4-p21在瘢痕癌中的表达及意义
目的：细胞周期调控机制失调是细胞增生肿瘤发生的重要因素。文中探讨细胞周期调控系统相关因子Cyclin D1-CDK4-p21在瘢痕癌中的表达及意义。方法选取遵义医学院病理教研室和中山大学附属第五医院病理科2005-2011年石蜡包埋标本，分为瘢痕癌组、病理性瘢痕组和正常皮肤组。应用组织化学法，分别检测瘢痕癌、病理性瘢痕和正常皮肤组织中Cyclin D1、CDK4、p21蛋白的表达。采用核酸分子原位杂交技术检测Cyclin D1 mRNA、CDK4 mRNA、p21 mRNA在3组组织中的表达。对各项指标进行相关性分析，计算平均光密度（表达强度）和阳性面积（表达水平）。结果①Cyclin D1、CDK4、p21蛋白和Cyclin D1 mRNA、CDK4 mRNA、p21 mRNA在瘢痕癌癌组织呈强阳性表达，在病理性瘢痕上皮中呈弱阳性表达，在正常皮肤表皮呈弱阳性或阴性表达。瘢痕癌组CDK4蛋白表达强度（0．273±0．024）及表达水平（0．159±0．036）较正常皮肤组（0．194±0．013、0．053±0．086）、病理性瘢痕组（0．214±0．026、0．061±0．014）升高，瘢痕癌组CDK4 mRNA表达强度（0．281±0．033）、表达水平（0．207±0．039）较正常皮肤组（0．195±0．012、0．067±0．027）、病理性瘢痕组（0．235±0．021、0．080±0．032）高，差异有统计学意义（P＜0．01）；瘢痕癌组Cyclin D1蛋白表达强度（0．262±0．023）、表达水平（0．141±0．036）较正常皮肤组（0．169±0．012、0．039±0．095）及病理性瘢痕组（0．176±0．039、0．065±0．013）高，瘢痕癌组Cyclin D1 mRNA表达强度（0．264±0．031）、表达水平（0．201±0．041）较正常皮肤组（0．179±0．022、0．049±0．083）及病理性瘢痕组（0．193±0．021、0．068±0．035）高，差异均有统计学意义（ P＜0．01）；瘢痕癌组p21蛋白表达强度（0．148±0．031）、表达水平（0．275±0．032）较正常皮肤组（0．052±0．020、0．197±0．036）及病理性瘢痕组（0．062±0．021、0．214±0．032）高；瘢痕癌组p21 mRNA表达强度（0．227±0．059）较正常皮肤组（0．072±0．044、0．203±0．024）、病理性瘢痕组（0．075±0．041、0．223±0．021）高，差异均有统计学意义（P＜0．01）；但病理性瘢痕组与正常皮肤组各项指标比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。②相关性分析：在瘢痕癌组织中，Cyclin D1与CDK4、p21与CDK4的表达均呈正相关。结论瘢痕癌的发生与Cyclin D1、CDK4的异常表达有关，Cyclin D1可能是通过与CDK4结合形成复合物，促进细胞周期G1/S期转化，导致细胞异常增生，瘢痕癌发生。瘢痕癌中Cyclin D1-CDK4复合物活性的抑制调控，可能是CKI家族的其他成员或者有CKI家族以外的其他抑制调控因子。
关键词： 瘢痕癌 细胞周期调控 Cyclin D1 细胞周期蛋白依赖性激酶4 p21 -
微小RNA-206通过干扰CDK4和GAK的表达对前列腺癌细胞生长的影响
目的 探讨微小RNA-206(miR-206)对前列腺癌细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期素G相关蛋白激酶(GAK)表达的干扰作用及对前列腺癌细胞生长的影响.方法前列腺癌细胞株DU-145和PC-3为转染对象,转染miR-NC为对照组,转染miR-206为实验组.荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测CDK4和GAK mRNA的表达水平.Western blotting检测CDK4和GAK蛋白的表达水平.流式细胞术检测细胞周期分布.EdU增殖实验和集落形成实验检测细胞增殖能力.结果在DU-145和PC-3细胞株中,miR-NC组CDK4 mRNA表达量分别为1.00±0.09、1.00±0.10,GAK mRNA表达量为1.00±0.05、1.00±0.06;与之相比,两细胞株miR-206组中CDK4 mRNA表达明显下降,分别为0.36±0.18(t=6.572,P=0.001)、0.43±0.17(t=5.794,P=0.001),GAK mRNA表达量亦明显下降,分别为0.23±0.04(t=22.420,P<0.001)、0.32±0.08(t=14.500,P<0.001).Western blotting实验结果与qRT-PCR结果一致.流式细胞术检测结果显示,分别与两细胞株miR-NC组比较,转染miR-206后前列腺癌细胞在S期(23.60%±5.68%∶32.53%±4.52%,t=2.462,P=0.049;22.09%±4.35%∶30.96%±4.86%,t=2.720,P=0.035)和G2-M期(16.28%±7.12%∶26.63%±4.33%,t=2.484,P=0.048;14.60%±1.62%∶24.68%±7.13%,t=2.758,P=0.033)的细胞比例下降,在G0-G1期(60.13%±5.82%∶40.84%±5.37%,t=4.872,P=0.003;63.31%±3.27%∶44.36%±3.82%,t=7.533,P<0.001)的细胞比例升高.EdU增殖实验结果显示,转染miR-206的细胞增殖能力明显减弱(22.56±3.81∶38.90±8.51,t=3.503,P=0.013;25.12±6.42∶48.45±8.92,t=4.244,P=0.005).集落形成实验结果显示,两细胞株miR-NC组形成的集落数分别为218.66±44.59、177.35±24.49,miR-206组形成的集落数分别为125.38±32.80(t=3.370,P=0.015)、82.65±14.05(t=6.708,P=0.001),提示miR-206组细胞增殖能力降低.结论 miR-206可通过干扰CDK4和GAK的表达显著抑制前列腺癌细胞的生长,提示miR-206可能成为前列腺癌的分子靶向治疗工具.
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KLF16对胃癌细胞增殖、克隆能力的影响及机制
目的 探讨Krüppel样转录因子16(KLF16)对胃癌细胞增殖、克隆能力的影响及机制.方法 取处于对数生长期的BGC-823和SGC-7901细胞,每种细胞分为3组,sh-KLF161#、2#、3#组采用脂质体Lipofectamine 3000,分别将sh-KLF161#、sh-KLF162#、sh-KLF163#转染至细胞中,sh-NC组将shRNA无关序列转染至细胞中,以不转染shRNA的细胞为空白对照组.Real-time PCR法检测KLF16 mRNA相对表达量.CCK-8法检测胃癌细胞增殖活性,细胞克隆形成试验检测胃癌细胞克隆能力.Western blotting法检测细胞中细胞周期相关蛋白p21和细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)的表达.结果 BGC-823细胞中,空白对照组,sh-NC组,sh-KLF161#、2#、3#组KLF16 mRNA相对表达量分别为1.13±0.10、1.06±0.15、0.57±0.11、0.72±0.14、0.39±0.13;SGC-7901细胞中,空白对照组,sh-NC组,sh-KLF161#、2#、3#组KLF16 mRNA相对表达量分别为1.09±0.12、1.02±0.14、0.59±0.15、0.53±0.11、0.31±0.15;两种细胞中,sh-KLF16#3组的KLF16 mRNA相对表达量低于sh-KLF16#1组和sh-KLF16#2组(P均<0.05).在BGC-823和SGC-7901细胞中,干扰KLF16基因表达后,细胞增殖受抑制.BGC-823细胞中,空白对照组、sh-NC组、sh-KLF163#组细胞克隆数目分别为(180.45±19.32)、(189.83±22.43)、(109.32±24.31)个,SGC-7901细胞中,空白对照组、sh-NC组、sh-KLF163#组细胞克隆数目分别为(148.41±21.43)、(152.95±24.75)、(87.82±18.43)个,sh-KLF163#组细胞克隆数目低于空白对照组、sh-NC组(P均<0.05).在BGC-823和SGC-7901细胞中,干扰KLF16基因表达后,p21蛋白表达增加(P均<0.05),而CDK4蛋白表达下降(P均<0.05).结论 干扰KLF16基因表达,可抑制细胞增殖和克隆形成能力,其机制可能与上调p21蛋白和降低CDK4蛋白表达有关.
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初发与复发胶质瘤组织中细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白依赖性激酶4及P16蛋白表达差异及意义
目的 探讨胶质瘤患者初发、复发手术切除组织中细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)、P16蛋白表达差异及临床意义.方法 胶质瘤患者75例,初诊后行手术治疗,随访复发后再行手术治疗.取初发及复发后手术切除标本,采用免疫组织化学法检测cyclin D1、CDK4及P16蛋白阳性表达.结果 初发、复发胶质瘤组织cyclin D1、CDK4、P16蛋白阳性表达率在性别、年龄、病理类型上比较差异均无统计学意义(P＞0.05);初发胶质瘤组织cyclin D1、CDK4蛋白阳性表达率在I～Ⅱ级(22.5％、47.5％)低于Ⅲ～Ⅳ级(57.1％、82.9％)(P＜0.05);复发胶质瘤组织cyclin D1蛋白阳性表达率在I～Ⅱ级(38.1％)低于Ⅲ～Ⅳ级(70.4％)(P＜0.05);初发胶质瘤组织cyclin D1、CDK4阳性表达率(38.7％、64.0％)低于复发胶质瘤组织(61.3％、80.0％),P16蛋白阳性表达率(78.7％)高于复发胶质瘤组织(62.7％)(P＜0.05).结论 胶质瘤复发后cyclin D1、CDK4表达率增高、P16蛋白表达率降低提示恶性程度增高,侵袭性增加,预后不良.
关键词： 胶质瘤 复发 细胞周期蛋白D1 细胞周期蛋白依赖性激酶4 p16蛋白 -
正肝方对大鼠癌前病变肝组织细胞周期蛋白D1及依赖性激酶4的影响
[目的]观察正肝方对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱发的大鼠癌前病变肝组织细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)的影响.[方法]Wistar大鼠100只随机分为4组:模型、正肝方小剂量、正肝方大剂量组各30只、正常组10只.除正常组外,先后用AFB1和2-乙酰氨基芴(2-AAF)处理各组大鼠造模.正肝方大、小剂量组在造模期间,将正肝方水剂(0.6、0.3 g/ml)按10 ml/kg分别灌胃;模型组用无菌蒸馏水按10 ml/kg灌胃.8周后处死大鼠,肝组织取材.分别采用免疫组化法和RT-PCR法,检测大鼠肝组织中Cyclin D1、CDK4蛋白和mRNA表达.[结果]模型组Cyclin D1、CDK4染色阳性细胞百分率(LI)和表达强度(PU)高,Cyclin D1、CDK4 mRNA表达水平也高(P<0.01).正肝方能降低大鼠癌前病变肝组织Cyclin D1、CDK4蛋白和mRNA的异常高表达(P<0.01或<0.05),且呈现出一定的量效关系.[结论]正肝方能通过下调Cyclin D1、CDK4异常表达,改善细胞周期G1～S期调控点失控,从而减缓肝细胞异常增生.
关键词： 肝癌前病变 正肝方 细胞周期蛋白D1 细胞周期蛋白依赖性激酶4 -
三七总皂苷对大鼠血管平滑肌细胞增殖模型细胞周期相关蛋白表达的影响
目的 研究三七总皂苷(TPNS)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖细胞周期相关蛋白表达的影响.方法 以血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导大鼠VSMC,观察含药血浆对VSMC增殖的影响,以免疫荧光流式细胞术测定增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期相关蛋白的表达.结果 血小板衍生生长因子(PDGF)刺激VSMC后,VSMC PCNA、VSMC细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白表达增强,细胞周期抑制因子P21蛋白表达下调.阿托伐他汀含药血浆和TPNS含药血浆均可抑制PDGF诱导的VSMC PCNA、cyclinD1和CDK4蛋白表达增强及P21蛋白表达下调.TPNS与阿托伐他汀比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PDGF刺激VSMC后,可促进细胞周期转化,细胞增殖加快.阿托伐他汀、TPNS可抑制PDGF诱导的VSMC增殖,其作用可能是通过抑制了细胞周期相关调节蛋白的表述,从而抑制了VSMC细胞周期转化和增殖.
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曲古抑菌素A对甲状腺鳞癌细胞中Cyclin D1、CDK4、pRB表达的影响
目的:观察曲古抑菌素A(TSA)对甲状腺鳞癌(SW579)细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、视网膜母细胞瘤基因(RB)的蛋白产物(pRB)表达的影响.方法:体外培养SW579细胞,以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照组,另设空白对照(未作任何处理)组,观察50、100、200、400 nmol·L-1 TSA对SW579细胞生长抑制率的影响,及细胞中Cyclin D1、CDK4、RB基因和蛋白的表达情况.结果:与溶剂对照组和空白对照组比较,各剂量TSA作用后SW579细胞的细胞生长抑制率明显升高(P＜0.01),且呈剂量依赖性.与空白对照组比较,各剂量TSA作用后SW579细胞中Cyclin D1 mRNA表达明显降低(P＜0.01),且随剂量增加表达降低,但CDK4、RB mRNA表达和溶剂对照组中这2个基因的表达均无明显变化(P＞0.05);与空白对照组比较,各剂量TSA作用后细胞中CyclinD1和pRB蛋白表达明显降低(P＜0.01),且随剂量增加表达降低,但CDK4蛋白表达无明显变化(P＞0.05).结论:TSA能明显抑制SW579细胞的生长,且呈剂量依赖性;其机制可能与CyclinD1基因和蛋白、pRB蛋白的表达有关.
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口腔扁平苔癣中细胞周期素和细胞周期蛋白依赖性激酶4表达的定量分析
目的检测扁平苔癣中细胞周期素和细胞周期蛋白依赖性激酶4的表达,探讨其在扁平苔癣中的作用及意义.方法选取31例扁平苔癣,其中非糜烂型20例,糜烂型11例,另取10例正常口腔粘膜作对照研究.应用免疫组化SP方法和原位杂交技术检测31例扁平苔癣和10例对照的正常口腔粘膜Cyclin D1蛋白及其mRNA和CDK4蛋白的表达.结果非糜烂型和糜烂型扁平苔癣中Cyclin D1蛋白及其mRNA的表达均显著高于对照的口腔粘膜(P＜0.01).CDK4的表达在非糜烂型、糜烂型和对照的口腔粘膜各组之间均具有显著性差异(P＜0.01).Cyclin D1蛋白及其mRNA的表达呈显著的正相关关系(P＜0.01).结论 Cyclin D1和CDK4参与扁平苔癣的发生和发展.
关键词： 扁平苔癣 细胞周期素 细胞周期蛋白依赖性激酶4 免疫组化 原位杂交 -
慢病毒干扰SKA1对前列腺癌PC-3细胞增殖及CDK4和cyclin D1表达的影响
目的 探究慢病毒介导纺锤体和动粒相关蛋白1(SKA1)沉默对前列腺癌PC-3细胞增殖及细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)水平的影响.方法 构建慢病毒表达载体Lv-shSKA1,转染PC-3细胞.实验分为空白组、Lv-shCon组和Lv-shSKA1组.用实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测细胞SKA1 mRNA表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞周期,用蛋白质印迹(Western blot)技术检测SKA1、CDK4及cyclin D1蛋白表达.结果 ①与LvshCon组比较,Lv-shSKA1组细胞中SKA1 mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P＜0.05).②与Lv-shCon组比较,Lv-shSKA1组细胞增殖速率显著较慢(P＜0.05).③与Lv-shCon组比较,Lv-shSKA1组G0/G1期细胞数显著减少(P＜0.05),S期细胞数显著增加(P＜0.05).④与Lv-shCon组比较,Lv-shSKA1组细胞CDK4、cyclin D1蛋白表达水平均显著下调(P＜0.05).结论 慢病毒介导的SKA1沉默可抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,且细胞增殖相关蛋白CDK4、cyclin D1表达显著下调,提示SKA1可能是前列腺癌基因治疗的新靶点.
