首页 > 文献资料
-
携带Mathl基因的重组腺病毒构建和鉴定及在豚鼠耳蜗中的表达
目的 探讨利用重组腺病毒介导的Mathl基因转移治疗感音神经性耳聋的可行性.方法 利用腺病毒细菌内同源重组方法,构建携带Mathl基因的复制缺陷型重组腺病毒Ad-Mathl,通过向豚鼠耳蜗底回注射重组腺病毒Ad-Mathl后,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内耳Mathl的mRNA的表达,Western Blot方法检测Mathl蛋白表达.结果 构建的重组腺病毒Ad-Mathl酶切电泳鉴定正确,重组腺病毒Mathl通过底回导入豚鼠耳蜗24小时后检测到Mathl的mRNA表达:Western Blot方法检测到Mathl蛋白的表达.结论 本实验成功构建了携带Mathl基因的重组腺病毒,由腺病毒介导的Mathl基因转移可在豚鼠耳蜗内有效表达.
-
Math1基因重组慢病毒的构建及其在293T细胞中的表达
目的 构建携带Math1基因的重组慢病毒载体,检测其滴度,检测其在293T细胞中的表达.方法 PCR扩增Math1基因,将其连入慢病毒栽体pLenti-GFP中;在感受态细胞DH5α中培养扩增,并行Math1基因的测序鉴定;将重组的慢病毒四质粒共转染293T细胞,收获并浓缩病毒;感染293T细胞和提取细胞DNA后用实时定量PCR法检测病毒滴度.用逆转录PCR和westem blot法检测Mathl基因在感染病毒的293T细胞中的表达.结果 构建的慢病毒载体pLenti-Math1-GFP经测序分析证实基因序列正确.四质粒共转染293T细胞后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光.包装后慢病毒测定滴度约为3X10"Tu/L.逆转录PCR和Western blot法均能检测Math1基因在感染病毒的293T细胞中的表达.结论 成功构建携带Math1基因的重组慢病毒,并能在293T细胞中表达.
