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儿童Peutz-Jeghers综合征一例家系临床特征及LKB1基因突变分析
目的 研究一例儿童Peutz-Jeghers综合征家系的临床特征及其LKB1基因突变.方法 收集家系的临床资料,并分别留取家系成员外周血,采用多重连接探针扩增技术、DNA测序分别检测LKB1基因大片段缺失、碱基突变、碱基插入和缺失,同时采用PCR结合变性高效液相色谱筛查验证突变位点在正常人群中的分布.生物信息学分析突变位点对编码蛋白质结构和功能的影响.结果 先证者具有典型的皮肤黏膜黑斑、多发胃肠道错构瘤性息肉,先证者及1名家系成员均携带LKB1基因c.924G＞C位点的病理性胚系突变,导致Trp308 Cys的错义突变的发生；这一突变在正常人群中不存在；蛋白质结构和功能分析结果显示Trp308 Cys突变可改变蛋白质的空间构象,进而影响了蛋白质功能.结论 Peutz-Jeghers综合征具有皮肤黏膜色素沉着、胃肠道多发性错构瘤性息肉和家族遗传性三大特征,呈常染色体显性遗传,LKB1基因胚系突变是其致病因素,利用LKB1基因鉴定和突变筛选所有患者及一级亲属对明确诊断及改善其家族的生存期具有重要意义.
关键词： Peutz-Jeghers综合征 突变 LKB1基因 -
siRNA沉默LKB1基因激活Hedgehog信号通路及对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长的实验研究
目的 探讨应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默抑癌基因LKB1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中Hedgehog信号通路相关因子的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响.方法 构建LKB1基因siRNA质粒LKB1-siRNA;建立LKB1表达抑制的MDA-MB-435细胞模型;裸鼠乳晕皮下接种,建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型;成瘤后,观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间;并用Western印迹法检测瘤组织中LKB1和Hedgehog信号通路中信号肽Shh、Sufu、膜受体Ptch、Smo、转录因子Gli1、Hip 蛋白表达的变化.结果 LKB1-siRNA质粒组裸鼠的肿瘤体积明显增长(P<0.05);肿瘤内LKB1基因表达水平明显下降,而Hedgehog信号通路相关因子Shh、Gli1、Ptch、Smo的表达升高,Hedgehog信号通路抑制因子Sufu、Hip表达下降.结论 LKB1基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的LKB1基因的表达,上调Hedgehog信号通路相关因子的表达,促进肿瘤生长.LKB1基因和Hedgehog信号通路在乳腺癌细胞中呈现负相关表达.
关键词： RNA干扰 LKB1基因 Hedgehog信号通路 裸鼠 乳腺肿瘤 -
LKB1对胰腺癌细胞上皮间质转化及侵袭迁移的影响
目的 探究LKB1基因对胰腺癌细胞上皮间质转化及侵袭迁移的影响情况.方法 通过细胞实验检测LKB1过表达对胰腺癌上皮间质转化相关蛋白E-钙黏蛋白,及间质标记物N-钙黏蛋白、vimentin的影响,并分析其对人胰腺癌细胞PANC-1迁移和侵袭能力的影响.通过免疫荧光法对转染后的细胞进行处理,并通过荧光显微镜高倍镜观察细胞的变化情况.结果 与空载体组、转染试剂组相比,LKB1过表达组中LKB1蛋白及E-钙黏蛋白表达水平显著升高(P<0.05);间质细胞标志物N-钙黏蛋白、Vimentin的蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05).LKB1过表达对胰腺癌细胞PANC-1迁移和侵袭能力的影响分别为转染试剂组(45.56±6.60)、空载体组(45.06±3.85)、LKB1过表达组(22.54±3.74);转染试剂组(111.48±14.90)、空载体组(107.58±13.18)、LKB1过表达组(57.48±7.94);LKB1过表达组细胞迁移和侵袭能力均显著降低(t=-14.501、-14.824、-12.810、-13.808,P均=0.000).结论 LKB1可以抑制人胰腺癌细胞的迁移和侵袭,该抑制过程可能与其参与上皮间质转化有关.
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LKB1基因与乳腺癌细胞侵袭性相关因子的研究
目的 观察LKB1基因对乳腺癌细胞的侵袭性影响及机制.方法 筛选LKB1基因转染的MDA-MB-435乳腺癌细胞,随机取样一株高表达细胞株和一株低表达细胞株,同时与未转染细胞株和空质粒转染细胞株比较.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和明胶-酶谱法观察基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和促进微血管生成的因子VEGF、bFGF的基因表达情况,并应用Western印迹对其蛋白定量分析.应用Tramswell试验对其进行膜穿透能力检测.结果 LKB1基因转染的乳腺癌细胞的mRNA和蛋白水平上MMP-2、MMP-9和VEGF、bFGF基因表达的相对吸光度(A)值皆低于未转染细胞和空质粒细胞,且LKB1基因高表达细胞株较低表达细胞株更低.同时发现Tramswell试验中LKB1转染的细胞侵袭能力下降(18.1%±1.0%、22.4%±1.8% vs 47.6%±1.3%、45.6%±1.2%,均P＜0.01).结论 LKB1基因作为一种抑癌基因对乳腺癌细胞的侵袭性可能起重要作用.
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抑癌基因LKB1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的通过检测新发现的抑癌基因LKB1在乳腺癌中表达情况,探讨其与乳腺癌变的关系及其预后意义.方法用Western印迹法比较不同乳腺癌细胞株LKB1基因的表达情况,构建LKB1基因表达质粒,转染至该基因低表达的细胞株,研究细胞生长数度及凋亡相关蛋白表达的改变;以Western印迹法检测LKB1基因在121例乳腺癌手术标本中的表达,结合临床病理资料分析该基因在乳腺癌中的临床意义.结果 MDA-MB-435细胞中未能检测到LKB1基因的表达,转染LKB1基因表达质粒后,MDA-MB-435细胞的生长受到明显抑制;细胞周期分析,G1期细胞的比例18.3%增至40.9%;细胞中细胞周期相关因子细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白E的含量下降,而其抑制因子p21的含量升高;单因素分析表明LKB1低表达与高复发率(P=0.002)及总生存率差(P=0.008)显著相关.结论在LKB1基因缺表达的乳腺癌细胞株MDA-MB-435细胞中,转入并表达该基因能明显抑制其乳腺癌细胞的生长;其作用与p21介导的G1期阻滞有关;LKB1基因低表达与乳腺癌预后差显著相关.
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RNA 干扰 LKB1基因对前列腺癌细胞增殖的影响
目的：探讨 LKB1/ STKll（Liver kinase B1/ Serine - Threonine Kinase II）基因沉默对前列腺癌细胞株 PC -3中增殖相关因子细胞周期素 D1（cyclinD1）、微小染色体维持缺陷蛋白2（Mcm2）和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响及其可能机制。方法：将重组表达质粒 LKB1- shRNA1（LKB1- shRNA1组）和阴性对照质粒 shNC（阴性对照组）采用脂质体介导法转染至前列腺癌细胞株 PC -3中，并设未转染组，经 G418筛选出稳定转染细胞，RT - PCR 法检测转染前后细胞中 LKB1，cyclinD1，Mcm2和 PCNA 基因 mRNA 的转录水平；Western blot 法检测转染前后细胞中 LKB1，cy-clinD1，Mcm2和 PCNA 蛋白表达水平；CCK -8法检测转染后细胞的增殖能力。结果：与未转染组和阴性对照组相比， LKB1- shRNA1组细胞中 LKB1，cyclinD1，Mcm2和 PCNA 的 mRNA 和蛋白表达水平均明显上调，LKB1- shRNA1组PC -3细胞的生长速度明显增加。结论：LKB1基因沉默上调前列腺癌细胞中 cyclinD1，Mcm2和 PCNA 的表达，LKB1可作为研究前列腺癌细胞增殖分子机制的新靶点。
关键词： 前列腺癌 LKB1基因 细胞周期素D1 微小染色体维持缺陷蛋白2 增殖细胞核抗原 -
hLKB1基因重组质粒构建及蛋白表达和定位
目的 构建hLKB1真核表达载体,证实融合蛋白在胃癌细胞内的表达及定位.方法 提取胃正常黏膜上皮细胞GES-1的总mRNA并进行反转录.以反转录的cDNA为模板PCR扩增hLKB1全长编码基因,克隆至pCDNA3.1/flag的真核表达载体中.将构建的重组质粒测序并转染到胃癌SGC-7901细胞中,分别利用Westernblot和激光共聚焦扫描显微技术检测其表达和在胃癌细胞中的定位.结果 hLKB1全长基因序列克隆到真核表达载体中,酶切鉴定片段为1300bp.Western blot检测到真核转染的Flag-hLKB1在胃癌SGC-7901细胞表达,条带约为50kD,免疫荧光显示蛋白广泛定位于细胞质和细胞核内.结论 成功构建了hLKB1基因真核表达载体,并验证其在胃癌细胞表达.
关键词： LKB1基因 融合蛋白 蛋白质印迹 免疫荧光 胃癌SGC-7901 -
LKB1在子宫内膜样腺癌中的表达及意义
目的 探讨抑癌基因LKB1在子宫内膜样腺癌及正常组织中的表达差异及其与肿瘤临床病理因素和微血管密度的关系.方法 应用免疫组化方法检测LKB1在50例子宫内膜样腺癌和30例子宫内膜单纯性增生组织中的表达,并通过检测CD34在子宫内膜样腺癌的表达确定肿瘤微血管密度.结果 LKB1在子宫内膜样腺癌中的表达低于子宫内膜单纯性增生组织(P=0.033)；在子宫内膜样腺癌中,LKB1的低表达与肿瘤细胞低分化、肌层浸润≥1/2及高微血管密度相关(P =0.022,P =0.035,P =0.030).结论 LKB1能够抑制子宫内膜样腺癌的发生、新生血管形成及侵袭.
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转染LKB1基因乳腺癌细胞与胚胎发育信号通路及cAMP/PKA通路的关系
目的 探讨抑癌基因LKB1与胚胎发育(Sonic Hedgehog,SHH)信号通路、cAMP/PKA信号通路之间的相互关系.方法 抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,分MDA-MB-231组(231组)和转染LKB1基因的MDA-MB-231(LKB1组)两组,每组分别采用0、5× 10-6、1×10-5、2× 10-5 mol/L等4种浓度的SHH信号通路抑制剂环靶明( cyclopamine)作用于细胞,各小组细胞分别用RT-PCR法和Western blot法检测SHH-信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA表达水平和蛋白表达水平,用cAMP、PKA试剂盒检测cAMP、PKA数值水平.结果 LKB1组的细胞通过不同剂量环靶明抑制后,SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA和蛋白表达水平相应较231组明显抑制,且与环靶明剂量呈正相关,抑制效果在环靶明浓度为10 × 10-6mol/L时明显,继续增加环靶明浓度到20 × 10-6mol/L,抑制效果保持不变.231组和LKB1组中细胞的PKA和cAMP数值均随环靶明浓度增加而增高,至10×10-6mol/L时达到高,继续增加环靶明浓度到20×10- 6mol/L,两组中的PKA和cAMP数值保持不变.在相同环靶明浓度下,LKB1组中PKA和cAMP数值高于231组中相应数值.结论 抑癌基因LKB1协同环靶明抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的SHH信号通路的同时亦协同增加cAMP/PKA信号通路的表达,且在环靶明浓度为10× 10-6 mol/L时效果明显；推测存在LKB1-SHH-cAMP/PKA通路.
关键词： LKB1基因 胚胎发育信号通路 cAMP/PKA信号通路 乳腺癌 -
散发性Peutz-Jeghers综合征患者LKB1基因突变情况
目的 研究LKB1基因突变和甲基化在散发性Peutz-Jeghers综合征(P-J综合征)患者中的作用.方法 提取5例散发性Peutz-Jeghers综合征患者外周血和其中3例的大肠息肉组织DNA,采用PCR法分析其序列的突变情况,MSP法检测基因启动子区域甲基化情况.结果 在所有患者外周血和大肠息肉组织DNA中均未发现有病理意义的突变位点,在1例发生癌变的息肉组织DNA中检测到LKB1基因的甲基化.结论 并非所有P-J综合征的患者都出现LKB1基因的序列突变,P-J综合征的发病可能存在其他的分子机制,但甲基化状态的改变可能是其息肉发生癌变的机制.
关键词： Peutz-Jeghers综合征 LKB1基因 基因突变 甲基化 -
LKB1基因对前列腺癌细胞增殖的影响
目的 探讨LKB1/STK11 (liver kinase B1/serine-threonine kinase 11)基因过表达对前列腺癌细胞增殖的影响及其可能机制.方法 构建LKB1重组过表达稳转细胞株和阴性对照组稳转细胞株,同时加入空白对照组,通过qPCR法检测各组细胞中LKB1 mRNA的转录水平,Western blot法检测各组细胞中LKB1蛋白的表达水平,CCK-8法检测各组细胞系的增殖能力.结果 Westem blot和qPCR法检测空白对照组、阴性对照组、LKB1组PC-3细胞中LKB1蛋白及mRNA的表达,结果显示LKB1组PC-3细胞中LKB1表达显著升高.CCK-8法检测空白对照组、阴性对照组、LKB1组PC-3细胞0、24、48、72 h各时间点的细胞活力,发现LKB1组PC-3细胞的生长活力于铺细胞24 h后开始,明显低于空白对照组及阴性对照组PC-3细胞,LKB1组PC-3细胞与空白对照组PC-3细胞相比,生长速度受到明显抑制.结论 LKB1基因过表达可以抑制前列腺癌细胞的增殖,LKB1是抑制前列腺癌细胞增殖分子机制的潜在靶点.
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抑癌基因LKB1在胃癌组织表达及意义
目的 探讨抑癌基因LKB1在胃癌组织表达及意义.方法 应用免疫组织化学方法检测60例胃腺癌组织(胃癌组)、16例正常胃黏膜组织(正常组)和21例癌旁胃黏膜组织(癌旁组)标本LKB1的表达,并分析其与肿瘤临床病理特征的关系.结果 LKB1正常组100.0%强阳性表达,癌旁组61.9%强阳性、38.1%弱阳性表达,胃癌组46.7%弱阳性表达,各组间比较差异有显著性(H=60.412,P<0.001).胃癌组LKB1阳性表达与pT分期及分化程度有关(χ2=9.386、4.275,P<0.05),与病人年龄、性别、大体分型、解剖位置及淋巴结有无转移无关(P>0.05).结论 LKB1基因表达与胃癌存在密切关联,检测其在胃癌组织或胃癌细胞中的表达,可为胃癌的诊断提供参考依据.
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家族性Peutz-Jeghers综合征患者LKB1基因胚系突变的分析
目的 研究家族性Peutz-Jeghers综合征患者中LKB1基因胚系突变特征.方法 收集11个Peutz-Jeghers综合征家系,各家系先证者均有典型的黏膜黑斑以及肠道错构瘤性息肉.提取先证者外周血DNA,PCR扩增LKB1基因的9个外显子及其侧翼的部分内含子序列,测序并分析其变异情况和突变性质.收集250名正常人外周血并提取DNA,聚合酶链反应-变性高效液相色谱筛查验证.结果 11个家系先证者中有8例患者LKB1基因外显子及侧翼碱基序列存在杂合性变异,变异类型共9种,包括7种点突变,1种外显子区域小片段碱基缺失以及1种侧翼内含子小片段碱基插入.其中4种考虑为病理性突变,还有4种仅为基因多态性表现,另外有1种变异性质未定.结论 LKB1基因病理性突变是中国人家族性Peutz-Jeghers综合征患者的常见病因,且以点突变为主.
关键词： Peutz-Jeghers综合征 LKB1基因 胚系突变 -
Sonic Hedgehog信号通路与乳腺癌抑癌基因LKB1的相互影响
目的:研究环靶明(cyclopamine)抑制Sonic Hedgehog(SHH)信号通路后,转染LKB1基因的乳癌细胞的凋亡、周期及信号通路相关基因表达的改变.方法:抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA - MB - 231,分MDA - MB - 231组(231组)和转染LKB1基因的MDA - MB - 231(LKB1组)两组,每组分别采用0,5×10 -6mol/L,10×10-6mol/L,20×10-6mol/L 4种浓度的环靶明处理细胞,各小组细胞分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,用RT - PCR法和Western blot法检测Sonic Hedgehog信号通路相关基因Shh、Smo、Ptch、Sufu、Hip及LKB1的mRNA和蛋白表达水平.结果:在LKB1组和231组中,各小组细胞的凋亡率变化与Sonic Hedgehog相关基因Shh、Smo表达变化一致,随环靶明浓度增大凋亡率增加、基因表达受抑制,在环靶明浓度达10×10-6mol/L时变化明显,且LKB1组较231组的变化更为明显.在231组中,各小组细胞周期变化与Sonic Hedgehog相关抑制基因Sufu、Hip表达变化一致.而在LKB1组中,各小组细胞周期与抑制基因Sufu、Hip表达变化均无明显差异.在231组中,各小组抑癌基因LKB1的表达随药物浓度增加渐增强.Pteh表达在两组均无明显变化.结论:抑癌基因LKB1可协同Sonic Hedgehog信号通路抑制剂环靶明促进乳腺癌细胞凋亡,调控细胞周期,推测其机制可能是通过如上信号通路相关基因表达变化而实现.信号通路抑制剂环靶明可提高乳腺癌细胞抑癌基因LKB1的表达,推测此也是信号通路抑制剂降低癌细胞活性机制之一.
关键词： 乳腺癌 Sonic hedgehog信号通路 LKB1基因 凋亡 细胞周期 -
LKB1基因对乳腺癌细胞促进微血管生成的因子基因表达的影响
目的研究LKB1基因对乳腺癌细胞促进微血管生成的因子基因表达的影响及机理.方法筛选LKB1基因转染的MDA-MB-435乳腺癌细胞,随机取样一株高表达细胞株和一株低表达细胞株,同时与未转染细胞株和空质粒转染细胞株比较.用RT-PCR观察促进微血管生成的因子的基因表达和分泌情况,并用Western blot 对其蛋白定量分析.并采用Tramswell试验(Ma trigel 胶侵袭力检测法)对其进行膜穿透能力检测.结果无论从mRN A还是蛋白水平上分析LK B1转染的乳癌细胞的促进微血管生成的因子基因表达VEGF和bFGF较未转染细胞和空质粒细胞为低,且高表达LKB1的细胞较低表达者为低.相似的结果在 Tramswell试验得到证实.结论 LKB1基因作为一种抑癌基因在乳腺癌细胞的侵袭和转移中起到重要作用,特别对促进微血管生成的因子作用不容忽视.
关键词： LKB1基因 促进微血管生成的因子 乳腺癌细胞 侵袭和转移
