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糖原合成酶激酶-3与糖代谢异常的关系
糖原合成酶激酶(glycogen synthase kinase,GSK)-3是表达于各种组织的丝/苏氨酸激酶,初因其底物是糖原合成酶而得名.现在的研究结果发现,GSK-3具有多种功能,与细胞内糖原代谢、胰岛素信号途径、细胞增殖、神经功能、胚胎发育、肿瘤发生等都有密切的关系.
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栀子苷降糖作用及相关机制研究
目的 探讨栀子苷对糖尿病小鼠的降糖作用及机制.方法 C57BL/6J小鼠通过一次性注射90 mg/kg链脲佐菌素(STZ)后结合4周喂养高脂食料建立糖尿病小鼠模型.实验小鼠随机分为对照组、模型组、栀子苷(100 mg/kg)治疗组.ig给药,每日1次,定期检测小鼠空腹血糖及体质量.治疗30d后,检测小鼠空腹血浆胰岛素和口服糖耐量(OGTT)变化.采用胰岛素及Ki67抗体对小鼠胰腺组织切片进行免疫荧光染色,观察胰腺组织形态学的改变,以及胰岛β细胞增殖情况;Western Blotting方法检测小鼠肝脏组织中p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达水平.结果 与模型组相比,栀子苷治疗组小鼠血糖水平降低,体质量下降,而血浆胰岛素水平升高,OGTT有所改善;胰腺组织切片免疫荧光染色结果表明,模型组小鼠胰岛结构被破坏,而栀子苷治疗组有明显改善,并且观察到Ki67表达,表明栀子苷能够促进胰岛β细胞增殖;栀子苷治疗组小鼠肝脏中Akt、GSK-3β蛋白磷酸化水平较模型组均有显著上调.结论 栀子苷能够有效改善糖尿病模型小鼠的高血糖症状,并增加血浆胰岛素水平,其作用可能与促进胰岛β细胞增殖,激活胰岛素受体下游Akt通路有关.
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α7烟碱型乙酰胆碱受体激动剂对缺氧复氧大鼠心肌细胞糖原合成酶激酶3β活性的影响
目的 评价α7烟碱型乙酰胆碱(α7nACh)受体激动剂对缺氧复氧大鼠心肌细胞糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)活性的影响.方法 大鼠心肌细胞培养72 h后,按照随机数字表法分为3组(n=18):对照组(C组)、缺氧复氧组(AR组)和α7nACh受体激动剂组(PNU282987组).C组心肌细胞正常培养;AR组心肌细胞缺氧6h后复氧;PNU282987组心肌细胞缺氧6h后复氧,在复氧培养基中加入用DMSO溶解的PNU282987,终浓度30 μmol/L,C组和AR组加入等浓度DMSO.于复氧6h时采用比色法检测心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,Annexin V/PI双染流式细胞术检测凋亡情况,Westernblot法检测GSK-3β与磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β Ser9)、NF-κcB p65与磷酸化NF-κB p65 (p-NF-κB p65Ser536)蛋白的表达,ELISA法检测心肌细胞培养上清液IL-6与TNF-α的浓度.结果 与C组比较,AR组和PNU282987组心肌细胞LDH漏出率升高,正常细胞百分比降低,早期凋亡细胞百分比和晚期凋亡细胞百分比均升高,心肌细胞p-GSK-3β Ser9、NF-κB p65和p-NF-κB p65 Ser536蛋白表达上调,心肌细胞培养上清液IL-6和TNF-α浓度升高(P＜0.01),心肌细胞GSK-3β蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);与AR组比较,PNU282987组LDH漏出率降低,正常细胞百分比升高,早期凋亡细胞百分比降低(P＜O.01),晚期凋亡细胞百分比差异无统计学意义(P＞0.05),心肌细胞p-GSK-3β Ser9蛋白表达上调,心肌细胞p-NF-κB p65 Ser536蛋白表达下调,心肌细胞培养上清液IL-6和TNF-α浓度均降低(P＜0.01),NF-κB p65蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 α7nACh受体激动剂可通过降低GSK-3β活性抑制炎性反应,从而减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.
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糖原合成酶激酶3β过表达心肌干细胞移植治疗心肌梗死
背景：糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)与细胞的各项生命活动之间存在密切的联系，关于其在心肌干细胞向心肌细胞分化中的作用机制和效果尚不清楚。
目的：探讨GSK-3β过表达心肌干细胞移植治疗心肌梗死大鼠的效果。
方法：分离培养乳鼠心肌干细胞，使用慢病毒感染心肌干细胞使其过表达GSK-3β或对照基因LacZ。30只SD大鼠制备心肌梗死模型随机分为3组：GSK-3β组、LacZ组、PBS组。模型制备后6周，于梗死心肌内局部注射过表达GSK-3β、LacZ心肌干细胞以及等量PBS。移植后4周，检测心功能及心室胶原生成情况。
结果与结论：①GSK-3β组的左室射血分数显著大于其他两组(P<0.05)，左室舒张末内径显著小于其他两组(P<0.05)；②GSK-3β组羟脯氨酸含量、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA表达显著小于其他两组(P<0.05)；③经Masson染色发现，GSK-3β组的心室肌蓝染的胶原含量明显低于LacZ组；④GSK-3β组的心肌梗死范围显著小于其他两组(P<0.05)；⑤实验结果表明，心肌干细胞过表达GSK-3β能提高心肌干细胞移植治疗效果。 -
大鼠糖原合成酶激酶-3β过表达基因慢病毒载体的构建与鉴定
糖原合成酶激酶-3β( Gsk-3β)是哺乳动物中广泛表达的丝氨酸/苏氨酸激酶,它不但能磷酸化糖原合成酶,促进糖代谢,还可磷酸化一系列底物,包括代谢相关蛋白、信号转导蛋白、结构蛋白和一些转录因子,并参与PI-3K、Wnt及Hedgehog等信号通路,影响细胞的生存与凋亡、运动与迁移及肿瘤的生成等[1].我们通过构建大鼠Gsk-3β基因过表达慢病毒载体并实现该基因在WBF-344细胞中的稳定高表达.
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氯化锂对白血病THP-1细胞生长的抑制作用及其对Wnt通路的影响
目的 研究氯化锂(LiCl)在体外对白血病细胞THP-1增殖、凋亡、周期以及Wnt通路的影响.方法 氯化锂不同浓度不同时间作用THP-1细胞后,用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布,Western blot检测细胞内Wnt通路的变化.结果 氯化锂能抑制白血病THP-1细胞的增殖,诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,且均呈浓度和时间依赖性.氯化锂不同浓度不同时间作用THP-1细胞后,t-GSK3β、cyclinD1表达不变,p-GSK3β、β-catenin表达升高,短时间低浓度作用后c-myc表达升高,但随作用时间延长和浓度增加,c-myc表达降低.结论 氯化锂对THP-1细胞有显著的增殖抑制、凋亡诱导、细胞G2/M期阻滞作用,并激活Wnt通路,影响Wnt通路下游蛋白c-myc、cyclinD1的表达.
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蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β信号途径在左心室肥厚大鼠心肌组织中的变化
目的建立左心室肥厚大鼠模型,研究蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β在肥厚心肌组织中的变化.方法将Wistar 大鼠随机分为主动脉结扎组和假手术组,结扎大鼠胸主动脉成功建立左心室肥厚模型.用Western Blot方法检测左心室心肌蛋白激酶B、磷酸化蛋白激酶B、糖原合成酶激酶3β和磷酸化糖原合成酶激酶3β的表达.结果主动脉结扎组与假手术组比较,室间隔厚度(1.60±0.10 mm比0.90±0.10 mm)和左心室后壁厚度(1.60±0.07 mm比1.00±0.07 mm) 升高(P＜0.01);左心室短轴缩短率升高 (56.9%±3.4%比47.8%±2.1%, P＜0.05);左心室压力大上升速率则显著降低 (3 508±310 mmHg/s比4 675±322 mmHg/s, P＜0.05);心肌组织蛋白激酶B磷酸化明显增加(1.2±0.3比0.9±0.3, P＜0.05),而磷酸化糖原合成酶激酶3β降低(0.7±0.2比0.9±0.2,P＜0.05).结论蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β这一信号转导途径参与压力负荷所致心肌肥厚的病理生理过程, 肥厚心肌糖原合成酶激酶3β表达下调,提示糖原合成酶激酶3β对心肌肥厚可能有抑制性作用.
