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中医中药在肺癌干细胞治疗领域的应用
肿瘤干细胞（cancer stem cells，CSC）是指存在于肿瘤组织内一种数量极少、但具有无限增殖及自我更新潜能的细胞群体，是形成不同分化程度肿瘤细胞、和驱使肿瘤不断增大并转移的根源。随着对肺癌研究的不断深入，越来越多的证据表明肺癌的复发、转移及其对放射治疗和化学药物治疗的耐受等生物学特性都与肺癌干细胞有关。中医因思路独道，治疗方案个体化，中药因其化学结构特殊而具有作用多靶点、疗效确切及不良反应轻等特点，近年来成为肺癌干细胞研究领域的新方向。现就中医中药在肺癌干细胞领域的应用进行综述。
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姜黄素上调caspase-3和p53表达后对人肺癌干细胞增殖与侵袭的影响
目的:探讨姜黄素干预人肺癌干细胞caspase-3与p53后对肺癌细胞增殖和侵袭的影响.方法:采用流式细胞仪分选技术从肺癌细胞株A549中分选出CD44 +/CD133+的肺癌干细胞(carcinoma-initiating cells,CICS)；用四甲基偶氮唑蓝比色法检测不同浓度姜黄素对肺癌干细胞增殖的影响；用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测肺癌干细胞系中caspase3和p53的mRNA和蛋白水平；Transwell小室侵袭实验检测姜黄素对肺癌干细胞体外侵袭能力的影响.结果:姜黄素浓度增加至40 μmol/mL后,姜黄素处理组的肺癌干细胞增殖抑制率大于阴性对照组和空白对照组(P＜0.01),姜黄素对肺癌干细胞体外增殖抑制呈显著的剂量依赖性(IC50为61.06 μmol/mL).姜黄素处理组肺癌干细胞中caspase-3和p53基因mRNA的表达水平(3.64±0.59,4.98±0.82)高于阴性对照组(1.00±0.04,0.99±0.07)和空白对照组(0.99±0.07,1.03±0.27),差异有统计学意义(P均＜0.01).姜黄素处理组肺癌干细胞中caspase-3和P53蛋白表达水平(0.65±0.12,0.43±0.05)高于阴性对照组(0.05±0.02,0.08±0.03)和空白对照组(0.09±0.03,0.12±0.17),差异有统计学意义(P＜0.01和0.05).姜黄素处理组侵袭细胞数(26±15)少于阴性对照组(82±13)和空白对照组(78±12),差异有统计学意义(P＜0.01).结论:姜黄素能上调caspase-3及p53的表达,能显著抑制人肺癌干细胞在体外的增殖及侵袭.
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小干扰RNA抑制成纤维细胞激活蛋白3的表达对肺癌干细胞增殖和侵袭的影响
目的:探讨小干扰RNA(siRNA)抑制成纤维细胞激活蛋白3(fibroblast activation protein 3,FAP3)基因表达对肺癌干细胞增殖和侵袭的影响.方法:采用流式细胞术从肺癌细胞株A549中分选出CD44+/CD133+的肺癌的肿瘤干细胞(cancer stem cells.CSCs).将肺癌CSCs分为3组:空白对照组(不转染任何质粒)、siRNA-FAP组(转染靶向沉默FAP3表达的siRNA质粒)、阴性对照组(转染包含随机序列的siRNA质粒).采用MTT比色法检测靶向FAP3表达的siRNA(siRNA-FAP3)转染12、24、48和72 h后对细胞增殖的影响；采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测转染72 h后细胞株中FAP3、Ki67的mRNA和蛋白质的表达情况；采用软琼脂克隆集落形成实验检测siRNA-FAP3对肺癌CSCs侵袭能力的影响.结果:转染48 h和72 h后,siRNA-FAP3组的细胞增殖抑制率[(24.67±1.08)％,(53.98±3.75)％]大于阴性对照组[(3.76±0.88)％,(4.53±1.01)％]及空白对照组[(2.34±0.41)％,(3.28±0.65)％],差异均有统计学意义(P分别＜0.05和0.01).转染72 h后,siRNA-FAP组细胞中FAP3和Ki67基因的mRNA表达水平(0.32±0.06,0.18±0.02)显著低于阴性对照组(1.03±0.12,0.99±0.17)和空白对照组(1.02±0.09,0.97±0.11),差异有统计学意义(P＜0.01).转染72 h后,siRNA-FAP组细胞中FAP3和Ki67蛋白表达水平(0.16±0.05,0.25±0.09)显著低于阴性对照组(0.49±0.26,0.47±0.13)和空白对照组(0.59±0.27,0.63±0.22),差异有统计学意义(P＜0.05).siRNA-FAP组细胞克隆形成率[(13.09±5.21)％]显著低于阴性对照组[(77.59±8.29)％]和空白对照组[(83.86±10.11)％],差异有统计学意义(P＜0.01).结论:转染siRNA可有效抑制肺癌CSCs中FAP3蛋白的表达,并且还可抑制CSCs的体外增殖和侵袭能力.
关键词： 小干扰RNA 成纤维细胞激活蛋白3 肺癌干细胞 增殖 侵袭 -
肺癌干细胞的研究进展
肺癌干细胞(lung cancer stem cell,LCSC)是肺癌组织中一小群具有自我更新及分化潜能,并且具有耐药性的特殊细胞.LCSC是目前肺癌研究中的热点.研究者通过对肺癌中CD133阳性细胞侧群(side population,SP)细胞及耐药存活细胞(drug surviving cell,DSC)的研究,证实了LCSC的存在;而乙醛脱氢酶Ⅰ(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)、八聚体结合转录因子-4(octamer-binding transcription factor 4,Oct-4)及CD44可能是鉴定LCSC的新标志物.Notch、Wnt及Hedgehog信号通路与LCSC的发生及维持关系密切,靶向组断这些信号通路可以减少肺癌组织中LCSC的比例,可能成为肺癌靶向治疗的新策略.
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靶向肺癌干细胞的海绵抗肿瘤活性化合物的发现
目的 追踪并分离海绵Aaptos aaptos中靶向抑制肺癌干细胞的活性化合物.方法 首先构建肺癌干细胞A549-Nanog-GFP的药物筛选模型,用Western blot和免疫荧光验证构建的肺癌干细胞模型中干性基因的表达.利用肺癌干细胞模型对海绵Aaptos aaptos二氯甲烷萃取物的8个组分进行活性初筛,采用多种色谱分离手段对活性部位进行分离,用CCK8法对分离得到的化合物进行体外抗肺癌干细胞活性筛选.结果 成功构建了高表达CD44和ALDH1A1蛋白的肺癌干细胞模型;初筛发现组分D6具有显著的肺癌干细胞抑制活性(P<0.01);从组分D6中分离得到4个aaptamine类生物碱,化合物AP-1具有显著的抗肺癌干细胞活性(P<0.01),其IC50值为(3.84±0.12) μmol/L.结论 海绵Aaptos aaptos提取物中分离得到的aaptamine类生物碱AP-1具有良好的抗肺癌干细胞活性.
关键词： aaptamine类生物碱 肺癌干细胞 增殖 AP-1 -
肺岩宁方对肺癌干细胞Wnt信号通路的影响
目的:分离、鉴定肺癌干细胞,并探讨肺岩宁方对肺癌干细胞Wnt信号通路的干预作用.方法:分离、鉴定肺癌干细胞；将分离出的SP+肺癌干细胞分为对照组(空白血清+生理盐水)、单纯化疗(空白血清+ DDP组)、肺岩宁方组(肺岩宁方含药血清+生理盐水)、综合治疗组(肺岩宁方含药血清+DDP),予体外药物干预后检测β-catenin蛋白表达及SP+肺癌干细胞凋亡情况.结果:分离的SP+、CD24+ IGF-1R+、CD133+细胞具有肺癌干细胞特性,分离的β-catenin蛋白完整；综合治疗组诱导Sp+干细胞凋亡优于其他组,各组凋亡率分别为综合治疗组79.2％、肺岩宁方组21.3％、DDP组33.7％、对照组0.3％.结论:本课题组已掌握分离、鉴定肺癌干细胞的技术,中药肺岩宁方联合化疗具有一定的诱导肺癌干细胞凋亡的作用.
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支气管肺泡干细胞的研究进展
肺腺癌的发生与肺腺癌干细胞有关,肺腺癌干细胞和肺支气管肺泡干细胞(BASCs)具有相似的表型特征,肺腺癌可能源于BASCs的恶性转化.小鼠肺腺癌模型的建立,对支气管肺泡干细胞有了较为深入的了解:BASCs能耐受细支气管和肺泡损伤,并使上皮细胞得以更新、增殖;正常状态下的BASCs处于静止期,但在K-ras转基因模型中,BASCs异常增生导致肺腺癌的发生.对小鼠BASCs的研究为探讨人肺腺癌干细胞的相关生物学特性提供借鉴,本文对BASCs研究进展方面作简要总结.
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Wnt信号通路影响肺癌干细胞机制的研究进展
检索2001年至2011年Medline、PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统与Wnt信号通路及肺癌干细胞相关的中、英文文献发现,Wnt信号主要通过Wnt经典信号传导途径、Wnt-Ca2+途径、Wnt-细胞平面极化途径在细胞中起作用.作为Wnt信号通路中关键的通道传递分子,Wnt/β-catenin信号通路在维持肺癌干细胞的增殖和克隆形成方面发挥着重要作用,通过对关键蛋白的影响抑制肺癌干细胞增殖,为肺癌的治疗提供了新路径.
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细胞集落刺激因子诱导肺癌干细胞分化的临床应用
目的 诱导肺癌干细胞进入分裂期以提高对化疗药物的敏感度.方法 未手术晚期肺腺癌患者115例随机分为诱导化疗组(试验组)和常规化疗组(对照组).两组均予以长春瑞滨+顺铂(NP)方案化疗；试验组化疗期间加用重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)诱导肺癌干细胞分化.化疗2个周期后2周比较两组的疗效.结果 试验组近期有效率明显高于对照组(61.8％ vs.41.5％)(P＜0.05).结论 通过诱导肺癌于细胞向相应的成熟细胞分化使其对化疗敏感,可以提高治疗效果.
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肺癌干细胞与肺癌转移相关机制的研究进展
肺癌干细胞是来源于肺癌具有自我更新及多向分化潜能的一部分细胞群,被认为是肺癌发生发展的根源,其在肺癌转移过程中扮演重要角色,可能的作用机制主要包括上皮间质转化、肿瘤微环境、肿瘤血管生成、肿瘤耐药性、信号转导通路等几个方面.本文将对肺癌干细胞与肺癌转移相关机制做进一步探索,以期为防治肺癌转移提供新策略.
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肺癌干细胞标志物研究现状
肿瘤干细胞是近年肿瘤领域研究热点,其理论的提出为肿瘤的治疗提供了新的思路及靶点.肺癌是当今社会威胁人类健康的主要恶性肿瘤,深入研究肺癌干细胞有望提高其治疗有效率.而肺癌干细胞的识别是其研究的第一步,找到行之有效的肺癌干细胞标志物十分必要.全文对目前肺癌干细胞标志物研究现状作一综述.
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序贯处理交联-免疫共沉淀法制备肺癌干细胞伴侣分子抗原肽瘤苗的研究
[目的]探索制备肺癌干细胞伴侣分子肿瘤抗原肽复合物的方法.[方法]采用肿瘤干细胞微球体培养分离法进行肺癌干细胞的培养与富集.选择鸦胆子油乳和125放射性碘粒子序贯处理肺癌干细胞,诱导伴侣分子抗原肽表达,同时选用普通肺癌细胞作为对照.采用交联—免疫沉淀法分离与鉴定伴侣分子抗原肽复合物制作成肺癌干细胞和普通肺癌细胞瘤苗.将肺癌干细胞与普通肺癌细胞进行荷瘤小鼠实验对比治疗效果.[结果]通过肺癌干细胞微球体培养分离法,成功培养出肺癌细胞微球体.结果显示鸦胆子油乳联合125放射性碘粒子可充分诱导肺癌细胞及肺癌干细胞中伴侣分子抗原肽的合成,且表达量与鸦胆子油乳的浓度成正比.肺癌细胞和肺癌干细胞中HSP70、HSP90表达与生理盐水比较,差异均有统计学意义(P＜0.001).两种细胞抑制肿瘤生长作用、延长小鼠生存期上亦均有统计学差异(P＜0.05).[结论]鸦胆子油乳联合125放射性碘粒子序贯处理和交联—免疫共沉淀法可充分诱导、分离与鉴定肺癌细胞及肺癌干细胞伴侣分子抗原肽的合成,肺癌干细胞较肺癌细胞更多地表达伴侣分子抗原肽,可提高肿瘤细胞的免疫原性,制作的瘤苗疗效更好,以期在防治肺癌和其复发上有较好的应用价值.
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肺癌组织及其肺癌干细胞中FOXO3的表达及意义
目的：探讨FOXO3在肺癌组织与肺癌干细胞中的表达特点,为肺癌的诊断和治疗提供新的着手点。方法应用免疫组化、RT-PCR及Western blot法检测肺癌组织中FOXO3的表达,同时应用RT-PCR和Western blot法验证肺癌干细胞中FOXO3 mRNA及蛋白的表达,比较其在不同分型肺癌中的阴性率。结果免疫组化结果显示FOXO3在肺癌组织中呈明显低表达, RT-PCR和Western blot检测结果显示肺癌组织及肺癌干细胞中FOXO3 mRNA及蛋白均呈明显低表达,FOXO3蛋白在所有病例中的阴性率为66.7%,且随着癌细胞的分化及转移,其阴性率逐渐升高。结论 FOXO3在肺癌组织及肺癌干细胞中均呈低表达,同时其与肺癌的恶性程度、转移密切相关,或许可成为治疗肺癌的新靶点。
关键词： 肺肿瘤 FoxO3 肺癌干细胞 RT-PCR Western blot -
支气管肺上皮干细胞与肺癌干细胞
全世界每年有1000000以上人死于肺癌.预计2030年,将有近10000000人死于吸烟导致的疾病,其中1/4为肺癌.肺癌早期多无症状,临床诊断者大部分为晚期肺癌,手术切除加辅助治疗后易于复发.近数十年,虽治疗技术有明显进步,但肺癌总的5年生存率仅有很小改变(某些发展中国家5%左右;发达国家,如美国为15%左右).提高患者生存率需要进一步阐明肺癌起源,其焦点之一是肺癌干细胞与肺上皮干细胞生物学的研究.
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肺干细胞的研究进展
肺干细胞(lung stem cells)是指在特定条件下能分化为功能性肺组织,在维持肺组织更新和肺损伤修复中起着重要作用的细胞.近年来对肺干细胞的研究已取得了很大的进展,该文就肺干细胞的来源、分离方法 、应用以及肺癌干细胞等方面的研究进展作如下综述.
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A549肺癌细胞株干细胞表面标志的初步研究
目的:研究人肺癌干细胞的表面特征.方法:将肺癌细胞株制成单细胞悬液,接种到96孔板,每孔只有一个细胞,观察每孔细胞的存活,增殖以及分裂情况,将接种后能够持续分裂增殖的肿瘤细胞(实验组)和常规培养的肿瘤细胞(对照组)分别进行CD133细胞免疫组化,比较两组细胞的阳性表达率,将两组细胞按不同浓度梯度接种裸鼠,分析两组细胞的成瘤能力.结果:(1)仅有4.11％的肿瘤细胞具有增殖形成细胞克隆的能力.(2)单细胞体外培养具有增殖能力的细胞CD133阳性率明显高于常规培养的肿瘤细胞.(3)体外能够持续分裂的细胞成瘤能力强于常规培养的肿瘤细胞.结论:CD133可能是人肺癌干细胞的表面标志.
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白血病抑制因子受体过表达对肺癌干细胞凋亡的影响及其机制
目的 探讨白血病抑制因子受体(LIFR)过表达对肺癌干细胞(LCSC)凋亡的影响及其机制.方法 从肺癌患者的原发癌灶中分离培养原代肺癌细胞,用流式细胞术筛选出CD133+表型的LCSC.将包含LIFR的重组慢病毒过表达质粒及其阴性对照空载体质粒分别以病毒/细胞数量为18的比例感染LCSC,经2.0μg/mL的嘌呤霉素筛选,成功构建稳定表达LIFR的LCSC细胞株及其对照细胞株,分别作为观察组和对照组.采用实时荧光定量PCR法检测两组LIFR mRNA相对表达量,采用流式细胞术检测培养48 h时两组细胞凋亡率,采用Western blotting法检测两组细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3相对表达量.结果 观察组、对照组LIFR mRNA表达量分别为8.54±1.32、1.03±0.02,细胞凋亡率分别为(35.00±5.29)％、(11.33±1.76)％,两组比较P均<0.05.与对照组比较,观察组Bcl-2蛋白相对表达量降低(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白相对表达量升高(P均<0.05).结论 LIFR过表达可促进LCSC凋亡;其机制可能与抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax、Caspase-3蛋白表达有关.
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SALL4在肺腺癌组织中的表达及其意义
目的 研究SALL4基因在人肺腺癌组织中的表达及其意义.方法 采用免疫组化法检测48例人肺癌组织及其癌旁组织SALL4表达,分析SALL4表达与临床病理特征之间的关系.结果 SALL4在肺腺癌组织的表达明显高于癌旁组织(37.5％比10.4％,P=0.002).SALL4的表达与区域淋巴结转移、细胞分化程度密切相关(P ＝ 0.006,P ＝0.013),与性别、年龄及T分期无关(P＞0.05).结论 SALL4表达明显与肺腺癌相关,可能在肺腺癌的发生发展中发挥作用.
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芪连扶正胶囊对肺癌干细胞增殖及Foxp3表达的影响
目的:观察芪连扶正胶囊对肺癌干细胞增殖及Foxp3表达的影响,探讨其抑制肺癌转移的相关机制.方法:体外常规培养肺癌A549细胞,免疫磁珠法分选干细胞,制备芪连扶正胶囊含药血清,按实验分组干预,采用MTT法测定肺癌干细胞增殖情况;分剐采用Western blot和RT-PCR法检测各组Foxp3的表达情况.结果:芪连扶正胶囊抑制肺癌干细胞增殖24h、48 h的抑制率分别为19.04％、25.39％,呈时间依赖性;且芪连扶正胶囊可明显下调Foxp3的蛋白与基因表达,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而联合顺铂可提高芪连扶正胶囊的下调能力,二者有协同作用.结论:芪连扶正胶囊可有效减少肺癌干细胞增殖,并通过下调Foxp3表达调节免疫而抑制肺癌转移.
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芹菜素对NCI-H446细胞系球细胞自我更新和uPAR表达的影响
目的:研究芹菜素对人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞自我更新的影响及机制.方法:采用于细胞条件培养基超低黏附板悬浮培养法从体外培养NCI-H446细胞系得到球细胞.测定球形成率用以评价0(0.1％ DMSO对照组),5.0,10.0,20.0μmol/L芹菜素对NCI-H446细胞系球细胞自我更新的抑制作用;Western印迹分析球细胞尿激酶型纤维蛋白酶原激活物受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,uPAR)的表达.结果:0,5.0,10.0,20.0 μmol/L芹菜素呈剂量依赖性抑制NCI-H446细胞系第2代球细胞的球形成率[球形成率分别为(18.2±1.9)％,(13.6±1.7)％,(10.6±1.6),(6.9±1.3)％],并呈浓度依赖性下调uPAR蛋白的表达(P＜0.05).结论:芹菜素抑制人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞自我更新作用,可能与下调uPAR表达相关.
关键词： 小细胞肺癌 肺癌干细胞 芹菜素 自我更新 尿激酶型纤维蛋白酶原激活物受体
