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IL-17、TNF-α在胶原诱导的关节炎大鼠模型外周血的表达
目的 探讨白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)在胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型的表达特点.方法 建立CIA大鼠模型,以X线片及组织病理学证实造模成功;用ELISA分析CIA大鼠模型血清炎性细胞因子IL-17、TNF-α的水平.结果 与对照组比较,CIA大鼠模型外周血IL-17、TNF-α水平明显升高(P<0.05).结论 在成功建立的CIA大鼠模型中,IL-17、TNF-α大量产生,提示IL-17可能参与了类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发病过程.
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抗TNFα单克隆抗体在Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型中的应用
目的 制备胶原诱导的关节炎(collagen induced arthritis,CIA)模型,对AT132进行药效评价.方法 制备Ⅱ型胶原诱导的CIA模型,且对新药AT132进行药效评价.HE染色观察膝关节和踝关节的病理变化.ELISA法检测血清中CⅡ、TNFα的表达.流式细胞仪检测小鼠关节滑膜中TNFα、IL-1、IL-6、IL-10的表达.结果 (1)模型组小鼠关节表现为小指关节、足爪、足趾肿胀以及变形,AT132组小鼠关节则表现为轻微的红肿.(2)模型组小鼠膝关节和踝关节病理结果表现为炎性细胞的浸润、滑膜增生、血管翳和破骨细胞的出现,软骨和骨的破坏.AT132组病理结果表现为轻微炎性细胞的浸润和滑膜增生.(3) ELISA法检测结果发现:模型组中CⅡ的表达明显上升,AT132给药组中CⅡ的表达明显下降(P＜0.01).(4)流式细胞仪检测结果发现:模型组小鼠关节滑膜中TNFα、IL-1、IL-6、IL-10的表达明显增加,AT132组小鼠关节滑膜中TNFα、IL-1、IL-6、IL-10的表达明显降低(P＜0.01).结论 CIA模型造模成功率为100％,AT132能够有效地治疗关节炎小鼠.
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雷公藤甲素对CIA大鼠γδT细胞胞内细胞因子表达的影响
目的观察雷公藤甲素对II型胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠外周血γδT细胞表达细胞因子TNF-α和IL-10的影响,探讨γδT细胞在CIA中的作用机制和雷公藤甲素对γδT细胞的免疫调节作用.方法 Wistar大鼠背部及尾根部多点皮内注射牛Ⅱ型胶原诱导CIA动物模型,大鼠经雷公藤甲素治疗后,取外周血分离淋巴细胞,用流式细胞仪,通过直接荧光标记的抗TNF-α和抗IL-10抗体来检测单个细胞水平γδT细胞胞内细胞因子的表达.结果 CIA模型大鼠外周血中γδT细胞与正常大鼠相比较,所占淋巴细胞的百分比显著下降(6.96±0.74) %,γδT细胞胞内 TNF-α(2.22±0.36)%和IL-10(1.00±0.20)%的表达均明显降低(P<0.01).通过雷公藤甲素治疗后,γδT细胞的数量和TNF-α与IL-10的表达均恢复至正常水平.结论雷公藤甲素可调节CIA大鼠外周血γδT细胞的数量和TNF-α及IL-10表达水平,而达到治疗类风湿性关节炎的目的.
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Wistar大鼠胶原诱导的关节炎造模因素的分析
目的 通过比较不同的造模方法,分析影响胶原诱导关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型建立的因素.方法 选用Wistar大鼠造模,通过改变性别、剂量、年龄、注射部位及免疫方式,来比较造模成功率.结果 不同性别、剂量、年龄及免疫方式造模成功率不同.结论 4 ～ 5周龄Wistar雌性大鼠,初次免疫注射乳剂4点共0.20 mL,加强免疫在14 d之后3点共0.15 mL的造模成功率高.
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雷公藤甲素对胶原诱导的关节炎大鼠关节局部热休克蛋白和主要组织相容性复合体Ⅰ类分子表达的影响
目的观察雷公藤甲素对胶原诱导的关节炎大鼠关节局部热休克蛋白(HSPs)和主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(MHC-Ⅰ)表达的影响.方法建立胶原诱导的关节炎大鼠模型,雷公藤甲素按40μg/kg im给药,运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫酶组织化学染色的方法,观察大鼠关节滑膜细胞和软骨细胞HSP60、HSP70和MHC-Ⅰ类分子的表达情况.结果与正常对照组相比,模型组大鼠关节滑膜细胞及软骨细胞HSP60、HSP70和MHC-Ⅰ类分子的表达均显著增高(P＜0.05),与模型组相比,雷公藤甲素可以下调关节炎大鼠关节局部HSP60、HSP70和MHC-Ⅰ类分子的表达(P＜0.05).结论降低关节炎大鼠关节局部软骨细胞和滑膜细胞异常表达的HSPs与MHC Ⅰ类分子的表达,可能是雷公藤甲素治疗类风湿关节炎(RA)的作用机制之一.
关键词： 雷公藤甲素 胶原诱导的关节炎 类风湿关节炎 热休克蛋白 主要组织相容性复合体 -
胶原诱导的关节炎动物模型研究现状及进展
胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型由Trentham于1977年首次报道[1].此后20余年来国内外利用该模型对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的病因、发病机制、药物筛选及免疫治疗等方面进行了大量研究并取得了不少进展.目前,国内许多实验室利用CIA模型筛选药物或进行关节炎发病机制、转基因及免疫治疗等的研究.但是,在有些研究中,CIA模型的建立及应用尚不规范,对CIA与Ⅱ型胶原(CⅡ)及主要组织相容性复合体(MHC) Ⅱ类分子关系了解较少.本文主要针对CIA的分子基础及研究进展进行了综述,希望能为CIA的研究及应用提供借鉴.
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胶原诱导性关节炎小鼠Th17细胞及相关信号蛋白的动态变化
目的：研究鸡Ⅱ型胶原蛋白诱导性关节炎（ CIA ）小鼠淋巴细胞 Th17及其转录激活因子 STAT3和细胞因子信号蛋白抑制分子SOCS3的动态变化。方法取168只DBA1／J小鼠随机平均分为模型组和对照组，用制备的Ⅱ型胶原乳剂免疫模型组小鼠，在初次免疫后第7、14、21天及加强免疫后第7、14、35天在无菌条件下取腹股沟淋巴结，应用流式细胞术和 Western 印迹技术检测各组 Th17细胞及 STAT3、SOCS3的变化情况。结果模型组Th17细胞在加强免疫14 d时比正常组明显升高（ P＜0.05）。模型组STAT3的表达量在初次免疫14 d 时比正常组显著升高（ P＜0.05）；加强免疫14、21 d比正常组显著升高（P＜0.05）。模型组SOCS3的表达量在初次免疫14 d时开始上升并持续到加强免疫14 d，与正常组比较具有明显差异（P＜0.05）。结论 Th17细胞参与了RA的炎症进展，其主要在CIA小鼠病程进展中期起作用，Th17细胞在CIA小鼠病程中的变化与转录激活因子STAT3和细胞因子信号蛋白抑制分子SOCS3有关。
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胶原诱导的关节炎小鼠髓样抑制细胞Arg-1、iNOS的mRNA表达
探讨胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠发病过程中骨髓和脾脏扩增的髓样抑制细胞(myeloidderived suppressor cells,MDSC)产物Arg-1、iNOS的mRNA表达水平.应用牛Ⅱ型胶原免疫DBA/1J小鼠诱导CIA模型,在第一次免疫后的第45天,采用流式细胞术分选小鼠骨髓和脾脏CD11b+ Gr-1+的MDSC(纯度＞98％),利用定量RT-PCR技术检测MDSC产物Arg-1、iNOS的mRNA表达水平.结果发现,脾脏中,CIA小鼠MDSC细胞Arg-1 mRNA表达低于正常小鼠,而iNOS mRNA表达高于正常小鼠,二者差异均具有统计学意义(P均＜0.01).CIA小鼠的骨髓MD-SC细胞Arg-1 mRNA表达低于正常小鼠,而iNOS mRNA表达高于正常小鼠,但差异均无统计学意义(P均＞0.05).上述结果提示CIA小鼠骨髓和脾脏中的MDSC可能通过产生高水平的iNOS参与CIA的发病.
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胶原诱导的关节炎小鼠脾脏髓样抑制细胞检测
研究髓样抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)在Ⅱ型胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠发病过程中的动态变化.使用牛Ⅱ型胶原建立DBA/1J小鼠CIA模型并进行关节炎指数评分.在CIA诱导的第21d、28d、35 d、40 d和45 d,采用流式细胞术检测CIA小鼠及正常对照小鼠脾脏中CD11 b+ Gr-1+的MDSC比例动态变化.采用流式细胞术检测第35 d CIA小鼠和正常小鼠脾脏MDSC表面CD80、CD86和MHCⅡ分子的表达水平.结果发现,CIA造模小鼠脾脏中MDSC比例在第二次免疫时(第21d)即明显增高,至第28 d达高峰(P均＜0.05).CIA诱导第35天脾脏中MDSC比例和绝对细胞数较正常对照组明显升高(P＜0.05).CIA小鼠脾脏MDSC CD80和CD86的表达水平高于正常对照组(P＜0.05),但MHCⅡ的表达水平在模型组与正常对照组间无显著差别(P＞0.05).MDSC在CIA小鼠造模和发病过程中呈现规律性的变化,提示MDSC可能参与了类风湿关节炎发展的免疫病理过程.
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EGCG与Andro对胶原诱导的关节炎的联合治疗作用
采用Ⅱ型胶原诱导小鼠关节炎(collagen induced arthritis, CIA)模型,观察(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯 [(-)-epigallocatechin-3-gallate, EGCG]与穿心莲内酯(andrographolide,Andro)联合治疗作用并初步探讨其作用机制.研究发现EGCG和Andro联合用药能显著减轻疾病严重程度.体内、体外实验证实联合用药在基因水平及蛋白水平上协同抑制炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α的产生;另外,EGCG和Andro联合用药也可明显降低血清中抗Ⅱ型胶原抗体含量.结果表明,EGCG和Andro联合治疗CIA具有明显的疗效,为研发治疗RA的药物提供一条思路.
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Th17细胞及相关细胞因子在乙型病毒性肝炎中的作用机制
Th17细胞是在对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）和胶原诱导的关节炎（CIA）这两种动物模型的研究中被发掘的。研究者在实验中发现，通过清除 Th1样细胞因子 IL-2或 IFN-γ并不能有效预防或缓解病情，而 IL-23在这些疾病的进程中反而显示出了极为重要的作用。之后研究表明，IL-23可以促进 CD4＋ T 细胞产生炎性细胞因子 IL-17，由此，这种不同于Th1、Th2的 IL-17＋细胞作为一种新的 Th 细胞亚群才被发掘并命名为 Th17［1］。
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高迁移组蛋白1-A盒对大鼠胶原诱导的关节炎的治疗作用
目的 探讨高迁移组蛋白1-A盒(A-box of high mobility group protein-1,A-BOX)对类风湿性关节炎的治疗作用.方法 以胶原诱导的关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型为研究对象,在胶原造模4周后,进行关节炎症状评分,并将实验动物随机分为三组(每组12只),腹腔内分别注射A-BOX(每只大鼠注射0.62 mg,A-BOX组)、甲氨蝶呤(1 mg/Kg,MTX组)和生理盐水(阴性对照组),每周一次,连续治疗4周.治疗后进行关节炎症状评分、踝关节病理学及X线摄片检查.结果 所有造模大鼠均出现了关节炎症状,造模后关节炎评分为(7.25±0.70),显著高于正常大鼠(P＜0.01).治疗4周后,阴性对照组症状评分为(7.77±0.44),显著高于MTX组(6.25±1.03)(P＜0.05)和A-BOX组(6.12±0.99) (P＜0.01).MTX组与A-BOX组无显著差异(P＞0.05).病理学显示,A-BOX组滑膜增生、血管新生和炎症评分分别为(0.00±0.00),(1.14土0.69)和(1.71土0.75)；MTX组分别为(0.71±0.48),(1.57±0.78)和(1.42±0.53),均显著低于阴性对照组的(2.28±0.45),(1.85±0.69)和(2.14±0.89)(P＜0.05).A-BOX组未见滑膜增生,评分低于MTX组(P＜0.05)；两组间其他改变无显著差异(P＞0.05).X线摄片A-BOX组、MTX组及阴性对照组评分分别为(1.85±1.06),(1.85±1.06)和(3.28±0.48),均有统计学差异(P＜0.05).结论 A-BOX对大鼠CIA治疗作用稍优于MTX,具有药物开发前景.
关键词： 高迁移率族蛋白1-A盒 甲氨蝶呤 胶原诱导的关节炎 -
青藤碱对胶原诱导的关节炎大鼠血清OPG/RANKL、IL-17含量的影响
目的 探讨青藤碱(SIN)对胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠血清骨破坏因子血清骨保护素(OPG)、核周因子κB受体活化因子的配体(RANKL)、白细胞介素17(IL-17)的作用,了解其治疗的骨保护作用.方法 建立CIA大鼠模型,以炎症指标、X线片证实造模成功；分为对照组、模型组、SIN组、MTX组,用ELISA法分析CIA大鼠血清OPG、RANKL、炎性细胞因子IL-17的水平.结果 与正常组比较,模型组大鼠外周血RANKL、IL-17水平明显升高(P＜0.05),OPG水平明显降低(P＜0.05),OPG/RANKL比值下降.与模型组比较,SIN组外周血OPG水平及OPG/RANKL比值明显升高(P＜0.05)；与MTX组比较,SIN组OPG、OPG/RANKL比值无明显差异(P＞0.05).结论 在成功建立的CIA大鼠模型中,青藤碱能够提高外周血OPG/RANKL比值,提示青藤碱对类风湿性关节炎有骨保护作用.
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OPG-HSP70融合蛋白对CIA大鼠的保护性作用
目的:研究人骨保护素(OPG)-分枝杆菌热休克蛋白70(HSP70)融合蛋白对类风湿关节炎动物模型--胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠的保护性作用.方法:将OPG-HSP70重组基因菌株诱导表达,收集蛋白并鉴定,大量提取,纯化,复性;实验大鼠分为OPG-HSP70组、OPC组、HSP70组、模型组和正常对照组,CIA大鼠模型制备后分别给予相应处理,观察对大鼠关节病变的影响.结果:与模型组相比,OPG-HSP70组关节炎指数明显降低(P<0.05);关节病理切片显示关节滑膜无明显增生;骨密度值增高(P<0.05).结论:OPGHSP70融合蛋白具有减轻CIA大鼠关节病变的作用.
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胶原诱导的关节炎和佐剂诱导的关节炎大鼠模型的制备
目的 制备实用性的胶原诱导的关节炎(CIA)和佐剂诱导的关节炎(AA)动物模型.方法 采用牛Ⅱ型胶原蛋白溶于0.5 mol/L醋酸中,加入等量弗氏不完全佐剂混匀乳化配成牛Ⅱ型胶原蛋白乳剂和灭活卡介苗溶于弗氏不完全佐剂中配成弗氏完全佐剂分别足跖皮内免疫Wistar大鼠,第21天加强免疫,利用YLS-7B足趾容积测量仪测量大鼠足部体积,利用PLANMECA TNTRAX线摄片机对大鼠足部拍摄,然后进行大鼠后足的近端趾间和跖趾关节病理观察.结果 CIA加强组和AA高剂量组大鼠免疫足出现明显的红肿,且肿胀足体积与正常对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01);X线和病理HE染色结果亦显示,关节组织呈现关节间隙狭窄、滑膜纤维组织增生、软骨及骨的破坏等病变.结论 经改进的CIA和AA大鼠模型呈现典型的关节病变的特征,可为进一步研究人类类风湿性关节炎的发病机制和新药研发提供良好实用性动物模型.
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γδT细胞在类风湿关节炎发病机制中的作用的实验研究
目的 检测胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠外周血γδT细胞、滑膜组织热休克蛋白60(HSP60)和70(HSP70)以及骨和软骨MHC-Ⅰ和NF-κB表达的变化,探讨γδT细胞在类风湿关节炎发病中的作用机制.方法 通过背部及尾根部多点皮内注射牛Ⅱ型胶原乳剂的方法制作Wistar大鼠CIA动物模型,运用流式细胞仪检测动物外周血γδT细胞百分比、ELISA法检测关节液TNF-α和IL-10的含量、SP免疫组化染色法检测滑膜组织HSP60和70以及关节软骨和骨MHC-Ⅰ类分子和NF-κB的表达.结果 与正常对照组相比,CIA模型组动物外周血γδT细胞百分比明显下降(P＜0.01),关节液中TNF-α含量升高(P＜0.05)、IL-10含量降低(P＜0.05),滑膜组织HSP60和70的表达上调(P＜0.05),关节软骨和骨MHC-Ⅰ、NF-κB的表达上调(P＜0.05).结论 关节液中细胞因子的变化,以及关节滑膜、软骨和骨细胞HSP60、HSP70和MHC-Ⅰ表达的上调,将有助于γδT细胞活化,进而引起关节的破坏.
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流式细胞仪检测胶原诱导的关节炎大鼠γδT细胞胞内TNF-α和IL-10的表达
目的研究牛Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型(CIA)大鼠外周血中γδT细胞胞内TNF-α和IL-10的表达情况,探讨其在CIA中作用的分子机制.方法于Wistar大鼠背部及尾根部多点皮内注射牛Ⅱ型胶原乳剂制作CIA模型.运用流式细胞仪,通过直接荧光标记的抗TNF-α和抗IL-10抗体来检测单个细胞水平γδT细胞胞内细胞因子的表达.结果与正常大鼠相比,CIA模型大鼠外周血中γδT细胞所占淋巴细胞的百分比显著下降(P＜0.01),γδT细胞胞内TNF-α(P＜0.01)和IL-10(P＜0.01)的表达均明显降低.结论γδT细胞在CIA中其前炎症细胞因子表达下调,可能γδT细胞在CIA的发病中不起致病作用.
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抗VEGF中和抗体对II型胶原诱导的关节炎形成的影响
目的: 了解抗血管内皮生长因子(VEGF)中和抗体对Ⅱ型胶原(CoⅡ)诱导的关节炎(CIA)形成的影响.方法: 于8～10 wk龄的DBA/1J小鼠尾根部皮内注射鸡CoⅡ进行被动免疫, 建立小鼠CIA模型, 以CIA发生率、关节炎指数及关节组织的病理变化为指标,评价抗VEGF抗体对CIA形成的影响.结果:与对照组相比较, 在CIA形成的早期, 注射抗VEGF中和抗体能有效地抑制关节炎的产生及减轻其严重程度(P ＜0.05); 而在CIA已形成后再注射抗VEGF中和抗体对关节炎的严重程度则无明显影响( P ＞0.05).结论: 抗VEGF中和抗体明显抑制滑膜细胞增殖、血管新生及血管炎, 因此有望成为类风湿性关节炎(RA)治疗的新型制剂.
