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多效蛋白基因的小干涉RNA慢病毒表达载体的构建及其对人小细胞肺癌H446细胞株生长与凋亡的影响
目的 构建针对多效蛋白(pleiotrophin,PTN)基因的小干涉RNA(siRNA)慢病毒表达载体并观察其对人小细胞肺癌H446细胞株PTN表达抑制及对细胞生长和凋亡的影响.方法 设计4对针对PTN基阒的小发夹RNA(shRNA)序列,与Plvthm载体连接,构建慢病毒表达载体LV(lentiviral)-shPTN,连接产物转化到DH5α感受态细胞,阳性克隆测序鉴定.再用LV-shPTN与pRsvREV、pMDlg-pRRE、pMD2G三种质粒共转染293T细胞,小量包装与纯化产生慢病毒颗粒.感染H446细胞后,用荧光定量PCR及Western blot法检测PTN的表达.将包含对PTN基因十扰效率高的序列慢病毒载体进行大量包装、纯化及病毒滴度测定,将包装好的病毒感染H446细胞.实验分为正常未干扰细胞组、阴性对照组、PTN抑制组、化疗组及PTN抑制加化疗组,四甲基偶氮唑盐比色法观察细胞生长,流式细胞仪分析细胞凋亡.结果 测序结果与构建慢病毒载体的预期结果一致,对PTNmRNA的高抑制效率为72%,对PTN蛋白的高抑制效率为59%.大量包装与纯化后病毒滴度为1×10~8 TU/ml.PTN基因抑制组H446细胞活力明显低于正常未干扰细胞组和阴性对照组,基因抑制联合化疗组较单纯基因抑制组及化疗组细胞活力下降,凋亡率增高,并具有浓度依赖性.结论 构建PTN RNA干涉载体,转染后可有效降低H446细胞FIN的转录和表达,抑制H446细胞的生长并促进其凋亡,有望成为小细胞肺癌基因治疗的可选择的方法之一.
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肺癌患者血清多效蛋白表达水平及其临床意义
目的 探讨血清多效蛋白(PTN)在肺癌患者中的表达及其临床意义.方法 采用ELISA检测57例非小细胞肺癌(NSCLC)患者、20例小细胞肺癌(SCLC)患者和12例正常对照组血清PIN水平,分析其对肺癌的诊断价值及与NSCLC病理分期和手术的关系.结果 正常对照组PTN水平明显低于SCLC组(P＜0.001)和NSCLC组(P=0.003),并且SCLC组PTN水平显著高于NSCLC组(P=0.010).ROC曲线分析PTN对肺癌诊断的AUC为0.821 (95％CI 0.730～0.913)(P＜0.001);对NSCLC诊断的AUC为0.794(95％CI 0.684～ 0.904)(P=0.001);对SCLC诊断的AUC为0.900(95％CI 0.783～ 1.000)(P＜0.001).NSCLC患者PTN水平与病理分期(P＜0.001)和肿瘤远处转移(P=0.019)密切相关,与病理类型和淋巴结转移无关(P＞0.05).NSCLC患者手术后PTN水平较手术前明显降低(P＜ 0.001).结论 血清PTN可作为诊断肺癌的指标,PTN还可用于NSCLC病情监测和疗效判断.
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多效蛋白基因沉默对小细胞肺癌H446细胞中部分肿瘤生长相关基因表达的影响
目的 观察多效蛋白(PTN)基因沉默后,人小细胞肺癌H446细胞中与血管新生、肿瘤生长、侵袭过程相关的血管内皮细胞生长因子(VEGF)、angiomotin(Amot)、schlafen5(Slfn5)和金属蛋白酶9(MMP-9)4种基因的表达变化.方法 利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法 检测PTN在H446细胞中的表达.构建干扰PTN表达的慢病毒载体,在293T细胞中包装成病毒后感染H446细胞.RT-PCR检测未干扰细胞组、阴性对照组、PTN抑制组和PTN抑制加化疗组细胞中Amot、Slfn5、MMP-9和VEGF的表达.结果 RT-PCR和Western blot检测结果 均表明,PTN基因在H446细胞中高表达.所构建的shRNA序列(GCAGCTGTGGATACTGCTGAA)对H446细胞PTN mRNA表达的抑制效率达72.1%,对PTN蛋白表达的抑制效率为59.2%.FIN基因沉默后,H446细胞中Slfn5和MMP-9的表达分别较阴性对照组上调了165.1%和47.3%,而Amot和VEGF的表达分别较阴性对照组下调了33.1%和26.6%.协同化疗后,上述趋势更为明显.结论 通过构建PTN小干扰RNA(siRNA)慢病毒表达载体沉默PTN基因,可以影响H446细胞增殖和转移相关基因的表达变化.
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β-磷酸三钙促进狗下颌骨中多效蛋白的基因表达
目的：研究狗下颌骨中β-磷酸三钙(β-TCP)对多效蛋白(pleiotrophin, PTN)基因表达的影响。方法：将β-TCP植入比格犬下颌骨前磨牙区人造骨缺损中,用RT-PCR法观察4、7、14天时植入区多效蛋白mRNA的表达。结果：与对照组相比,β-TCP组多效蛋白的mRNA电泳条带明显增强。结论：β-TCP增强了狗下颌骨中多效蛋白的基因表达。
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骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化中褪黑素受体和多效蛋白的表达
目的 体外诱导成人骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化,并探讨分化过程中多效蛋白(PTN)和褪黑素(Mel)受体亚型MT1、MT2 mRNA的表达,以探索MSCs向神经元样细胞分化的特性和机制.方法 密度梯度离心加贴壁培养法分离成人MSCs,原代和传代培养.取第6代MSCs设对照和实验组进行诱导,诱导后30 min至3 d,观察细胞形态并计数.免疫细胞化学法和RT-PCR法测定分化后细胞神经细胞特异性表面标志神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2(MAP-2)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和诱导前、诱导后12h PTN和MT1、MT2 mRNA的表达.结果 接种24 h后MSCs开始贴壁,呈圆形或椭圆形.3 d后可见梭状细胞呈集落状生长,10 d～14 d融合.第5代～第6代时呈现较均一的成纤维细胞样形态.诱导后胞体向胞核收缩;出现双极及多极细胞.12 h变形细胞增多,细长突起相互连接.24 h后变形细胞增多不明显.诱导后12 h大部分细胞表达NSE、MAP-2,未检测到GFAP的表达.实验组诱导后12 h细胞有PTN和MT1mRNA的表达.结论 PTN和Mel信号传导可能参与调控了MSCs向神经元样细胞的分化.
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多效蛋白在肺癌患者中的表达及其临床意义
目的 探讨肺癌组织中多效蛋白(PTN)的表达及其临床意义.方法 肺癌组织标本92例(肺癌组);其中,鳞癌46例(鳞癌组),腺癌31例(腺癌组),小细胞癌15例(小细胞癌组);良性病变肺组织标本15例(对照组).采用组织芯片结合免疫组织化学法检测PTN的表达.结果 PTN蛋白主要表达于细胞的胞浆和胞膜.肺癌组PTN表达高于对照组(P＜0.01).小细胞癌组PTN表达高于鳞癌组和腺癌组(P＜0.05).PTN在肺癌患者中的表达量与肿瘤的TNM分期(P＜0.05)、病理类型(P＜0.05)及肿瘤分化程度(P＜0.05)密切相关.结论 PTN在肺癌,尤其是小细胞肺癌组织中的表达异常增高,有可能成为新的肺癌诊断及预后肿瘤标志物.
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人多效蛋白对肺癌早期诊断的价值
目的 评价肿瘤标志物多效蛋白(PTN)对肺癌早期诊断的价值.方法 采用特异性酶联免疫吸附试验对11例小细胞肺癌(SCLC)及50例非小细胞肺癌(NSCLC)的血清PTN水平进行检测,并与17例肺部良性病变及10例健康者进行比较.结果 PTN在健康者血清中微量存在;在肺部良性病变、NSCLC及SCLC患者的血清中浓度呈梯度上升,差异均具有统计学意义(均P＜0.01).血清PTN对SCLC灵敏度、特异度分别达90.9%和94.1%.结论 PTN是一种有效检测肺癌的标志物,尤其在SCLC的血清中升高更明显,因此血清PTN可作为早期诊断SCLC的指标.
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PTN、Cyfra21-l和CEA联合检测对肺癌诊断的研究
目的:血清PTN与肿瘤关系密切,尤其是PTN与肺癌之间的关系.近来国外关于PTN的研究较多.探讨血清多效蛋白(PTN)、细胞角质蛋白(Cyfra21-l)和癌胚抗原(CEA)单独或联合检测诊断肺癌的价值. 方法:选择61例肺癌和17例肺部良性疾病患者,均在治疗前行血清PTN、Cyfra21-l和CEA的检测,比较3种方法单独或联合检测诊断肺癌的价值. 结果:血清PTN、Cyfra21-l和CEA联合检测,对肺癌的阳性检出率可达95.08%,与肺良性疾病组比差异有显著性意义(P<0.05). 结论:血清PTN、Cyfra21-l和CEA联合检测不仅对诊断肺癌价值较高,而且具有互补作用.
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胃癌患者腹水及外周血中PTN、IL-16表达及其意义
[目的]探讨胃癌患者腹水及外周血中PTN、IL-16表达水平及其临床意义.[方法]以52名胃癌伴腹水患者、48名胃癌不伴腹水患者以及20名健康者为研究对象,采用ELISA法测定PTN、IL-16的表达水平.[结果]胃癌伴腹水组患者腹水及外周血中PTN、IL-16表达水平均明显高于胃癌不伴腹水组和健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);PTN与IL-16在胃癌患者中表达呈正相关(P＜0.01).[结论]胃癌患者腹水及外周血中PTN、IL-16表达升高,且具有高度相关性.
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血清和组织多效蛋白水平在乳腺肿瘤诊断和预后评估中的临床价值
目的:探讨乳腺肿瘤患者血清和组织多效蛋白(PTN)表达及其在乳腺肿瘤诊断和预后评估中的价值.方法:选择120例乳腺肿瘤患者(观察组)和100例健康人群(对照组)作为研究对象,采集各组受试对象静脉血3 ml,采用酶联免疫吸附试验检测血清PTN含量,同时用化学发光免疫分析法检测血清CA15-3和CEA含量,利用受试者工作曲线(ROC)研究血清PTN对乳腺肿瘤的诊断价值.采用免疫组织化学染色检测观察组肿瘤组织及肿瘤旁组织中PTN表达水平,按照乳腺肿瘤组织PTN表达水平将乳腺肿瘤患者分为PTN高表达组和低表达组,分析PTN表达水平与患者生存预后的关系.结果:观察组血清PTN含量明显高于对照组,2组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).在佳截断值时,PTN诊断乳腺肿瘤的曲线下面积(AUC)为0.947(95％ CI:0.916～0.978,P＜0.05),血清PTN诊断乳腺肿瘤的AUC高于血清CA15-3、CEA.乳腺肿瘤组织PTN表达评分为7.15±0.49分,肿瘤旁组织PTN表达评分为2.04±0.12分,肿瘤组织PTN表达明显高于肿瘤旁组织(P＜0.05);PTN低表达组术后生存时间明显高于PTN高表达组,2组间比较差异有统计学意义(x2=4.003,P=0.038).PTN表达与肿瘤直径、淋巴结转移、雌激素受体(ER)表达、孕激素受体(PR)表达、表皮生长因子受体-2(HER2)表达无相关性(P＞0.05),PTN高表达组TNM分期更高,分化程度更低(P＜0.05).结论:血清PTN可以作为乳腺肿瘤的辅助诊断,组织PTN表达能够为乳腺肿瘤预后评估提供帮助.
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痰液肿瘤标志物在中老年肺结核合并肺癌早期诊断中的应用价值
探讨多效蛋白(PTN)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)3项肿瘤标志物联合检测对中老年肺结核合并肺癌的诊断价值.方法:采用化学发光法和酶联免疫法对肺结核合并肺癌组48例、肺结核组82例、健康对照组104例的痰液PTN、CEA、CYFRA21-1 3项肿瘤标志物进行检测及统计分析.结果:PTN、CEA和CYFRA21-1在肺结核合并肺癌组显著高于肺结核组和健康对照组.PTN在小细胞肺癌中的水平较高,CEA在肺腺癌中的水平较高,而CYFRA21-1在肺鳞癌中的水平较高.单项肿瘤标志物在肺癌诊断中敏感性CEA＞ CYFRA21-1 ＞PTN;腺癌诊断中CEA敏感性高(59.1％),鳞癌中CYFRA21-1敏感性高(70.0％),小细胞肺癌诊断中CEA、CYFRA21-1和PTN敏感性均较低(分别为0.0％、20.0％和20.0％).联合检测可以提高诊断试验的敏感性,在肺癌诊断中PTN、CEA、CYFRA21-1组合敏感性高(72.9％),特异度也较好(91.3％);腺癌诊断中PTN、CEA组合敏感性高(77.3％),鳞癌诊断中PTN、CEA、CYFRA21-1组合敏感性高(85.0％),小细胞肺癌中PTN、CYFRA21-1组合敏感性高(60.0％).结论:痰液PTN、CEA、CYFRA21-1对肺结核合并肺癌的诊断均有一定意义,选择合适的组合有利于肺结核合并肺癌的早期诊断.
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肺癌患者外周血中多效蛋白的表达及其临床意义
目的:检测肺癌患者血清中多效蛋白(PTN)的表达水平,并探讨其临床意义.方法:收集2014年08月至2016年06月嘉兴学院附属第二医院呼吸内科收治的肺癌患者40例,男28例,女12例,年龄49～79岁,平均(65±7)岁.所有肺癌患者均为初诊且经组织或细胞病理学确诊;同时选择40名健康志愿者作为对照组.采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测肺癌组和对照组血清中PTN的表达水平.结果:肺癌患者外周血中PTN平均水平为238.9(49.82～684.5)pg/ml,明显高于健康志愿者的126.2(34.04～281.8)pg/ml(P<0.05).肺癌患者外周血中PTN的高表达与肿瘤病理类型密切相关(X2=5.625,P<0.05).达客观缓解的肺癌患者化疗后PTN水平比化疗前显著下降(P<0.01).结论:肺癌患者外周血清中PTN的表达异常增高,且与肺癌的病理类型和疗效有关.
