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应用酵母双杂交技术筛选肝细胞cDNA文库中乙型肝炎病毒前-X蛋白结合蛋白基因
目的:用酵母双杂交技术筛选肝细胞中与乙型肝炎病毒(HBV)前-X蛋白结合蛋白的编码基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBV基因组中的前-X基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DH5α),提出质粒并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出HBV的前-X基因,构建表达载体并在酵母细胞中表达,配合后选出在四重缺陷(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基及铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四重缺陷培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落19个,其中5个是人铁蛋白;1个是人的胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3);1个是人醛缩酶B;1个是人糖基化磷脂酰肌醇锚定结合因子1(GPAAl);1个是人血红素结合蛋白;1个是人C1酯酶抑制子(C1-INH);1个是人玻连蛋白;1个是人电压依赖性阴离子通道1(VDACl);1个是丝氨酸穿膜蛋白酶(hepsin);1个是人梭素;1个是人纤溶酶原(PLG);3个是人假想蛋白;1个是RP11-542M13克隆,位于染色体16.结论:成功克隆出前-X的结合蛋白,为进一步研究HBV的前-X蛋白的作用提供了新线索.
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成骨细胞的钙离子通道
离子通道(ionic channels)是神经、肌肉和其它组织细胞膜兴奋性的基础,是产生与传递电信号的主要成分.离子通道的各种性质决定了包括大脑在内的神经、肌肉以及其它组织细胞的电活动,在生物功能上它们具有重要的作用.近年来,离子通道结构与功能的研究随着生物化学、分子生物学、药物学的不断创新以及膜生物物理学特别是膜片钳技术(patch clamp)的新突破而有了飞速的发展.因此,人们对离子通道的认识,无论是阳离子通道,例如:钙离子通道、钾离子通道、钠离子通道等,还是阴离子通道,例如:氯离子通道等都有了飞跃的进步.而且随着研究的不断深入,学者们在发现了包括成骨细胞在内的部分非兴奋性细胞细胞膜上存在离子通道后,对存在于非兴奋性细胞的离子通道的作用进行了大量研究.本文针对非兴奋性细胞成骨细胞的钙离子通道的研究进行综述.
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容量敏感的有机渗透分子和阴离子通道与细胞容量调节
维持细胞容量相对恒定是生物进化过程中逐渐形成的一种调节能力.容量敏感的有机渗透分子和阴离子通道广泛存在于人、动物和植物细胞中,并对氯离子具有选择性.该通道参与细胞容量调节,在调节性容量减少过程中发挥主要作用.
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阴离子及其通道阻断剂对大鼠主动脉张力的影响
目的:研究阴离子及其通道阻断剂在去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)引起的血管收缩中的作用.方法:常规离体血管灌流法.结果:阴离子通道阻断剂尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)和5-硝基-2-(3-苯丙氨基)-苯甲酸[5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)-benzoic acid,NPPB]可以抑制去甲肾上腺素NE引起的血管收缩;用胆碱替代灌流液中的Na+后血管张力无明显变化,而谷氨酸钠替代灌流液中的NaCl后血管张力下降,用同族元素Br-替代Cl-后血管张力增加,并能被NFA和NPPB所抑制.结论:阴离子在维持血管张力中的作用比Na+更为重要,提示阴离子通道可能在高血压发病中起一定作用.
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体积调节性氯离子通道的研究进展
体积调节性氯离子通道对维持细胞容积平衡、影响细胞周期与凋亡、调节细胞的电活动等多种生物功能发挥重要的作用.综述近年来对体积调节性氯离子通道在通道的特性、分子结构、生物功能及有关调节机制等方面的研究.
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电离辐射对小鼠腹腔巨噬细胞阴离子通道活动的影响及康复新对其的作用
目的 探讨电离辐射对小鼠腹腔巨噬细胞阴离子通道活动的影响及康复新对其的作用。方法 采用电生理膜片钳离子单通道记录方法。结果 用调理的zymosan刺激腹腔巨噬细胞后,阴离子通道开放的阳性率在受照射组显著减少,且受刺激至通道开放的时间间隔显著延长。受照射组较正常对照组通道开放概率显著降低、开放时间常数缩短而关闭时间常数延长,康复新对正常对照组离子通道活动的影响不显著,但可使照射组的通道开放有一定程度的加强。结论 电离辐射抑制巨噬细胞膜上阴离子通道的开放可能是其抑制巨噬细胞功能的一个重要途径。康复新可减弱电离辐射的这一抑制作用。
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尼氟灭酸对大鼠心室肌细胞钠通道及动作电位的影响
目的:观察尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)对大鼠心室肌细胞钠电流及动作电位的影响.方法:分别用全细胞膜片钳及电流钳技术记录单个心室肌细胞电压门控钠电流(INa)和动作电位(AP).结果:尼氟灭酸(100μmol/L)能可逆性地抑制INa和AP,与对照组比较,抑制的程度分别为:60.1%±12.1%(-30 mV,n=6,P<0.01)及78.2%±10.3%(n=5,P<0.01).天冬氨酸根离子(Asp-)替代细胞外液的氯离子可引起类似尼氟灭酸的作用.结论:尼氟灭酸对钠通道有抑制作用并影响动作电位.
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阴离子通道与原发性高血压
原发性高血压为严重危害人类健康的常见病,它的发病机制迄今仍不确定.近年来,随着对心血管系统中的阴离子通道功能研究的深入,发现阴离子通道是维持心脏功能和血管张力的重要因素.阴离子通道功能异常可能是原发性高血压发病原因中的一个重要因素,有可能成为治疗高血压的新靶点.