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KLF6和WWOX蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义
目的:探讨KLF6和WWOX蛋白在结直肠癌组织中的表达及其临床病理意义.方法:采用免疫组织化学法分别检测40例结直肠癌及40例正常结直肠黏膜组织中KLF6和WWOX蛋白的表达,并分析两者的表达水平与其,临床病理因素的关系.结果:结直肠癌组织中的KLF6和WWOX蛋白的阳性表达率明显低于正常结直肠黏膜组织(45.0% vs 82.5%;37.5% vs 90.0%,均p<0.05),KLF6和WWOX蛋白在结直肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.320,P<0.05),并与肿瘤组织的分化程度、淋巴结转移及浸润深度均密切相关(均P<0.05).结论:KLF6和WWOX的低表达可能与结直肠癌的发生、发展及预后有关,联合检测两者对结直肠癌的诊断及预后判断具有重要意义.
关键词： 结直肠癌 Kruppel样因子6 包含氧化还原酶的WW域 免疫组织化学 -
Krüppel样因子6对于TGF-β1诱导的晶状体上皮细胞纤维化的调控作用研究
目的 探讨Krüppel样因子6(KLF6)高表达对于转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人晶状体上皮细胞(HLECs)纤维化的促进作用.方法 利用脂质体转染的方法将已成功构建的真核表达质粒pEGFP-C2-KLF6及pSilencer-KLF6转染到HLECs中,经实时定量PCR反应(q-PCR)与反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞中KLF6蛋白的表达水平,以及上皮钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达水平.经Transwell细胞迁移实验观察细胞迁移情况.结果 pEGFP-C2-KLF6转染72 h后可有效上调HLECs中KLF6的表达水平,pSilencer-KLF6转染72 h后可有效下调HLECs中KLF6的表达水平(P<0.05),从而为后续实验奠定基础;与对照组相比较,KLF6高表达组细胞中E-cadherin表达水平显著下降,Vimentin表达水平显著增高,细胞迁移能力升高(P<0.05);在0.5 ng/ml TGF-β1刺激72 h后,随KLF6表达量的增加,E-cadherin表达水平进一步降低,而Vimentin表达水平进一步增高,细胞迁移能力进一步升高(P<0.05).结论 高表达的KLF6通过调控E-cadherin和Vimentin的表达水平,促进了TGF-β1所诱导的人晶状体上皮细胞纤维化过程,KLF6基因表达与体外基础条件下的上皮-间充质转化(EMT)相关.通过生物学手段特异性下调KLF6的表达可在一定程度上发挥对晶状体上皮细胞的保护作用.
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青蒿琥酯对人源肝星状细胞LX-2增殖、胶原产生以及KLF6表达的影响
目的:探讨青蒿琥酯(Art)对人源肝星状细胞(HSCs)LX-2增殖的影响以及其抗肝纤维化的作用机制.方法:将肝星状细胞LX-2分为对照组和实验组,对照组为细胞培养液,实验组为不同浓度的青蒿琥酯.应用MTT法检测青蒿琥酯对细胞增殖的影响,比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,酶消化法测定羟脯氨酸(Hyp)含量,Western blotting法测定青蒿琥酯对HSCs内KLF-6蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,青蒿琥酯能抑制肝星状细胞LX-2的增殖(P＜0.01),且呈剂量-效应和时间-效应关系;青蒿琥酯各浓度组LDH活性与对照组比较,无显著性差异(P＞0.05);青蒿琥酯能降低肝星状细胞LX-2中Hyp含量(P＜0.01),且呈剂量-效应关系,并能降低KLF6蛋白的表达(P＜0.01).结论:青蒿琥酯对人源肝星状细胞LX-2有明显的抑制作用,其作用机制是降低胶原的生成以及KLF6蛋白的表达减少,进而抑制肝纤维化的发生.
关键词： 青蒿琥酯 肝星状细胞 Kruppel样因子6 肝纤维化 -
Kruppel样因子6基因对巨噬细胞中胆固醇蓄积的影响
背景：研究表明，Kruppel样因子6与巨噬细胞极化密切相关。但是，关于Kruppel样因子6在巨噬泡沫细胞形成中的作用尚不清楚。
目的：观察Kruppel样因子6过表达对氧化低密度脂蛋白刺激下的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)胆固醇蓄积及对ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响。
方法：取Raw264.7巨噬细胞株分别转染慢病毒空载体和重组载体pCDH-KLF6，作为对照组和Kruppel样因子6组，另取稳定感染慢病毒空载体的Raw264.7巨噬细胞株和稳定感染重组载体pCDH-KLF6的Raw264.7巨噬细胞株均加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白共孵育48 h后，得到氧化低密度脂蛋白组和Kruppel样因子6+氧化低密度脂蛋白组。
结果与结论：与对照组相比，氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平显著增加(P <0.05)。与氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞相比，Kruppel样因子6+氧化低密度脂蛋白组细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平明显下降，胆固醇酯/总胆固醇明显降低(P <0.05)。而未加入氧化低密度脂蛋白处理的2组细胞内脂质表达水平少，且对照组与Kruppel样因子6组相比，细胞内脂质表达水平差异无显著性意义。提示Kruppel样因子6可能通过促进ATP结合盒转运蛋白A1的表达，抑制氧化低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积。 -
KLF6蛋白在胃腺癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨Kruppel样因子6(Kruppel-like factor6,KLF6)蛋白在胃腺癌组织中的表达及其临床病理意义.方法 采用免疫组织化学法分别检测90例胃腺癌及60例正常胃粘膜组织中KLF6蛋白的表达情况,并分析其表达水平与其临床病理参数的关系.结果 KLF6蛋白的阳性表达率在胃腺癌组织中为28.9%,明显低于正常胃粘膜组织的46.7%(P＜0.05),KLF6蛋白在胃腺癌组织中的表达与淋巴结转移密切相关(P＜0.05).Kaplan-Meier法生存分析显示胃腺癌患者KLF6蛋白表达阳性与阴性的累积生存率差异有统计学意义(P＜0.05),且2年以上生存率差别明显.结论 KLF6蛋白的低表达可能与胃腺癌的发生、发展、转移及预后有关,在某些程度上可以作为判断胃腺癌预后的重要指标之一.
关键词： 胃肿瘤 Kruppel样因子6 免疫组织化学 -
三氟拉嗪对人子宫内膜癌Ishikawa细胞的抑制作用
目的 观察盐酸三氟拉嗪(TFP)在体外对人子宫内膜癌Ishikawa细胞生长和增殖的影响,探讨可能的作用机制.方法 采用MTT法检测不同浓度TFP体外干预对Ishikawa细胞生长的抑制作用,计算药物的半抑制浓度(IC50)并选择佳作用时间.流式细胞仪分析TFP对Ishikawa细胞周期的影响;Real-Time PCR检测TFP对Ishikawa细胞内叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)和抑癌基因Kruppel样因子6(KLF6)表达的调控作用.结果 不同浓度TFP对Ishikawa细胞的生长均有抑制作用,呈剂量和时间依赖性,IC50为16.56μmol/L;20 μmol/L作用24 h的抑制效果佳.20 μmol/L TFP干预Ishikawa细胞24 h,S期细胞比例明显降低(P＜0.01),KLF6 mRNA表达显著上调(P＜0.05).结论 三氟拉嗪体外干预可抑制子宫内膜癌Ishikawa 细胞的生长和增殖,其作用机制可能与抑癌基因KLF6表达上调有关.
关键词： 子宫内膜癌 三氟拉嗪 细胞生长 细胞增殖 Kruppel样因子6 -
Krüppel样因子6经活化转录因子4通路对晶状体上皮细胞凋亡的调控作用
目的 以活化转录因子4(ATF4)为靶点,探讨Krüppel样因子6(KLF6)调控紫外线B(UVB)诱导的晶状体上皮细胞(HLECs)凋亡的分子机制.方法 HLECs系(HLE-B3)进行常规培养,采用脂质体转染法将构建的真核表达质粒pEGFP-C2-ATF4转染HLECs作为UVB+ ATF4转染组,并用能量密度为20 mJ/cm2的UVB照射细胞;未转染的ATF4细胞作为正常对照组.采用苏木精-伊红染色法和Hoechst染色法观察ATF4对HLECs细胞形态学的影响.将培养的细胞分为KLF6转染组及相应空质粒对照组,小干扰KLF6(siKLF6)组(转染pSilencer-KLF6质粒)及相应的空载体对照组(转染pSilencer空质粒),采用Western blot法检测细胞中ATF4蛋白的相对表达量.将培养的细胞分为4个组,联合空载体组HLECs联合转染pEGFP-C2空载体和pSilencer空载体;KLF6+ pSilencer空质粒组HLECs联合转染pEGFP-C2-KLF6和pSilencer 空载体;小干扰ATF4(siATF4)+pEGFP-C2组HLECs联合转染pEGFP-C2空载体和pSilencer-ATF4;KLF6+ siATF4组HLECs联合转染pEGFP-C2-KLF6和pSilencer-ATF4,各组细胞均暴露于UVB 200 s,采用ELISA法检测上述各组HLECs凋亡值.结果 正常对照组培养的HLECs大小均匀,排列整齐,细胞核呈卵圆形,数量多且完整;UVB照射后部分细胞核固缩,细胞间隙增大,少数细胞出现核分裂;UCB+ATF4转染组细胞数量减少,多数细胞出现核固缩和核分裂.UVB+ATF4转染组细胞中ATF4蛋白表达条带灰度明显强于UVB+空载体组,ATF4蛋白相对表达量分别为0.99±0.06和0.13±0.02,差异有统计学意义(t=23.13,P＜0.01).KLF6转染组细胞中KLF6和ATF4蛋白相对表达量均明显高于其空载体对照组,siKLF6组细胞中KLF6和ATF4蛋白相对表达量均明显低于其空载体对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.01).ELISA检测显示ATF4转染组HLECs凋亡值为1.37±0.11,明显高于正常对照组的0.31±0.11,差异有统计学意义(t=8.034,P=0.001);KLF6+pSilencer空质粒组细胞凋亡值明显高于联合空载体组,siATF4+pEGFP-C2组细胞凋亡值明显低于联合空载体组,差异均有统计学意义(P＜0.01,P=0.02);KLF6+siATF4组细胞凋亡率明显低于KLF6+ pSilencer空质粒组,差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 KLF6通过活化ATF4促进UVB诱导的HLECs凋亡,ATF4基因沉默可使细胞凋亡值明显降低,因此ATF4可作为KLF6调控HLECs凋亡的靶因子,也是KLF6调控LECs凋亡的主要生物机制之一.
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高糖刺激对人晶状体上皮细胞中KLF6基因表达的影响
背景 上皮-间充质转化(EMT)是后发性白内障的主要病理机制.锌指蛋白Kruppel样因子6( KLF6)在糖尿病肾病近曲小管中的表达增加,参与并促进转化生长因子-β(TGF-β)诱导的EMT.目的 观察高浓度葡萄糖刺激对人晶状体上皮细胞(LECs)中KLF6及其调控的靶基因转化生长因子β1(TGFB1)、转化生长因子βⅠ型受体(TGFBR1)、Ⅰ型胶原α1链(COLIAl)、热休克蛋白47(HSP47)等表达的影响.方法 用高浓度D-葡萄糖刺激人LECs系SRA01/04,运用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot法检测KLF6mRNA及蛋白水平,同时运用荧光定量PCR检测KLF6下游靶基因TGFBI、TGFBR1、COLlA1、HSP47的mRNA 表达水平.结果 与对照组(5.5 mmol/L)比较,高浓度葡萄糖(22.2、44.4、66.6 mmol/L)刺激后的t-KLF6和wt-KLF6 mRNA水平明显上升,差异均有统计学意义(F=72.53、42.02,P＜0.01)；结合人体血糖范围,在进一步实验中选择22.2 mmol/L作为葡萄糖刺激浓度.各时间点t-KLF6和wt-KLF6 mRNA水平之间的差异有统计学意义(F=100.12、125.52,P＜0.01),两者mRNA水平均于处理后12h达到高峰,24 h则开始出现下降,48 h下降更为明显.Western blot结果显示,对照组(0 h)KLF6蛋白表达很弱,高糖处理24 h后的细胞表达KLF6蛋白增加,而处理48 h后的表达量进一步增加.随着KLF6表达的增加,TGFB1、TGFBR1、COLlA1、HSP47的mRNA水平在高糖刺激12h时明显上升,但24 h后开始下降,48 h时进一步下降至接近对照组水平(F=6.73、162.35、64.39、12.05,P＜0.05). 结论 高浓度葡萄糖可诱导人LECs上调KLF6基因的表达,并短暂促进了其下游与EMT密切相关的靶基因TGFB1、TGFBR1、COLlA1、HSP47等的转录表达.
关键词： 人晶状体上皮细胞 高糖 Kruppel样因子6 上皮-间充质转化 -
CSE/H2S通过KLF6拮抗ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应
目的 氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞炎症反应,促进单核巨噬细胞黏附是动脉粥样硬化发生的重要病理生理机制.硫化氢(H2S)是新型气体信号分子,可拮抗动脉粥样硬化并抑制内皮细胞炎症反应.本研究以Krüppel样因子(KLF)家族为切入点,探究KLF6在H2S拮抗ox-LDL诱导内皮细胞炎症反应中的调节机制.方法 以人主动脉内皮细胞(HAEC)为研究对象,观察ox-LDL对HAEC内源性胱硫醚γ裂解酶(CSE)/H2S系统及内皮细胞炎症反应的影响.实时定量PCR检测外源性给予H2S供体或过表达CSE对KLF家族及炎症因子表达的改变,进一步采用siRNA干扰KLF6观察其对内皮细胞炎症反应、单核细胞黏附的影响.同时采用染色质免疫共沉淀(ChIP)技术观察H2S供体对KLF6转录活性的影响.结果 Western blot检测及H2S荧光探针细胞内染色发现,ox-LDL可以呈时间及剂量依赖性下调CSE表达以及内皮细胞H2S的产生.实时定量PCR检测发现,ox-LDL抑制KLF6表达而上调KLF10表达,H2S处理后则上调KLF6表达,抑制KLF10表达.Western blot证实NaHS或过表达CSE均可显著上调KLF6蛋白表达.NaHS处理显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞炎症因子ICAM-1、VCAM-1的表达水平和单核细胞对内皮细胞的黏附,敲低KLF6则阻断NaHS的抑炎效应.ChIP结果也显示,ox-LDL促进KLF6与CXCL2、IL-8以及自噬基因ATG7启动子区的结合,NaHS处理或过表达CSE均可显著抑制KLF6的DNA结合活性.结论 ox-LDL下调内皮细胞CSE/H2S系统,H2S供体或增加内源性CSE可通过KLF6这一转录因子拮抗ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应.
关键词： 氧化型低密度脂蛋白 内皮细胞 胱硫醚γ裂解酶 硫化氢 Kruppel样因子6 -
壮族家系Krüppel样因子6基因多态性与肝癌易感性的关系
目的 探讨Krüppel样因子6(KLF6)基因rs7634位点多态性与壮族人群肝细胞癌(HCC)易感性的关系.方法 选取广西扶绥县壮族人群10个正常对照家系(40例)及20个肝癌家系(79例),后者包括HCC患者20例及其未患HCC的直系亲属59例.运用质谱方法检测KLF6基因rs7634位点基因型及等位基因的分布频率;应用非条件logistic回归分析不同基因型及等位基因与HCC发病的关系.结果 在肝癌患者、肝癌家系亲属和正常家系人群中,KLF6基因rs7634位点TT基因型的分布频率分别为40.00％、54.24％和87.50％,TA基因型的分布频率分别为60.00％、42.37％和12.50％,AA基因型的分布频率分别为0、3.39％和0,T等位基因的分布频率分别为70.00％、75.42％和93.75％,A等位基因的分布频率分别为30.00％、24.58％和6.25％.在肝癌患者及正常家系人群中,携带TA基因型个体发生肝癌的风险是TT基因型个体的10.5倍(P＜0.05),携带A等位基因个体发生肝癌的风险是T基因型个体的6.429倍(P＜0.05);在肝癌患者及肝癌家系直系亲属中,携带TA基因型个体发生HCC的风险是TT基因型个体的1.667倍,携带A基因型个体发生肝癌的风险是T基因型个体的1.257倍,但差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 KLF6基因rs7634多态性与壮族家系肝癌易感性关系密切,携带TA基因型或A等位基因可能是HCC发生的危险因素.
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抑癌基因kruppel样因子6及其剪接体蛋白对HepG2细胞增殖和分化的影响
目的 研究抑癌基因Kruppel样因子(KLF)6及其剪接体蛋白对肝癌细胞株HepG2细胞增殖和分化的影响. 方法 RT-PCR扩增肝细胞癌组织中KLF6剪接体cDNA并测定其序列;构建KLF6剪接体真核表达质粒pcDNA3.1A(-)/KLF6V.转染HepG2细胞后,经G418筛选获得稳定表达KLF6全长和其剪接体蛋白的HepG2细胞,分别命名为HepG2/KLF6和HepG2/KLF6V.四甲基偶氮唑盐法测定该两种HepG2细胞的增殖活性;同时分别以放射免疫法或Western blot技术测定白蛋白、甲胎蛋白或P21WAF1,细胞周期素D1蛋白在HepG2/KLF6或HepG2/KLF6V细胞中的表达情况.结果从肝细胞癌组织中扩增出一种KLF6剪接体,序列分析提示该剪接体缺失127 nt,引起KLF6蛋白近羧基端缺失42个氨基酸;KLF6V mRNA在肝癌及癌旁组织均有表达,但癌组织表达水平明显增高.HepG2/KLF6细胞生长速度较慢而HepG2/KLF6V细胞增殖较快,同时HepG2/KLF6细胞P21WAF1蛋白表达及白蛋白分泌水平明显高于HepG2/KLF6V细胞,而细胞周期素D1表达及甲胎蛋白分泌水平在HepG2/KLF6V细胞高于HepG2/KLF6细胞.结论 肝细胞癌组织中存在KLF6剪接体,该剪接体能对抗全长KLF6基因抑制细胞生长、促进细胞分化等的功能.
