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P53抑制剂诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究
目的 研究P53特异性抑制剂对骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响.方法 分离SD大鼠骨髓间充质干细胞,取第4代骨髓间充质干细胞分为对照组(CON)和P53特异性抑制剂(PFT-α)组.观察骨髓间充质干细胞诱导前后细胞形态变化,流式细胞仪鉴定骨髓间充质干细胞表面抗原及诱导后心肌样细胞分化率,免疫荧光法检测诱导后cTnI、CX-43表达,Western Blot法测定诱导后cTnI、P53、P21蛋白表达情况.结果 原代培养的骨髓间充质干细胞2周形成集落,传代诱导后细胞体积变大,呈长梭形,排列趋一致.流式细胞仪测定骨髓问充质干细胞表面抗原CD44阳性表达率为(89.98±1.29)%,CD45阳性表达率为(2.14±0.22)%.心肌样细胞鉴定结果 显示:诱导后1周,空白对照组未见cTnI和CX-43免疫荧光表达,PFT-α组少量表达cTnI和CX-43;诱导后4周时,可见空白对照组少量表达cTnI和CX-43,PFT-α组强表达cTnI和CX-43.Western Blot检测诱导1周时PFT-α组cTnI表达与对照组比较,有统计学差异(P<0.01).诱导后4周,PFT-α组cTnI表达与对照组比较,有统计学差异(P<0.01).两组cTnI表达量4周与1周比较有统计学差异(P<0.05).诱导1周时,PFT-α组几乎不表达P53蛋白,PFT-α组与对照组比较有统计学差异(P<0.05).诱导4周时,PFT-α组与对照组比较有统计学差异(P<0.05).PFT-α组诱导4周时P53、P21表达量与1周时比较均有统计学差异(P<0.05).心肌细胞分化率结果 显示,诱导4周时,PFT-α组与空白对照组比较有统计学差异(P<0.01).结论 通过P53特异性抑制剂PFT-α阻断P53-P21蛋白通路,能诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化.
关键词： 间充质干细胞 心肌 肿瘤抑制蛋白质p53 癌基因蛋白质P21(ras) -
非霍奇金淋巴瘤组织p53和p21ras的表达及其临床意义
目的:研究非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)中p53和p21ras蛋白的表达情况及相关性.方法:应用免疫组化法检测58例NHL的p53和p21ras蛋白表达情况,并作相关性分析.结果:58例NHL中,阳性表达率p53蛋白为62.1%(36/58),p21 ras蛋白为56.9%(33/58).p53蛋白在低度及高度恶性组表达率为29.2%(7/24)和85.3%(29/34),P＜0.05.p21 ras 蛋白在低度及高度恶性组表达率20.8%(5/24)和82.4%(28/34),P＜0.01.结论:在NHL发展中,p53和p2l ras蛋白的高表达起着重要作用.
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miRNA-370对肾癌细胞株ACHN和786-O中抑癌基因p21表达的调控作用及其对细胞生长的影响
目的 探讨miRNA-370(miR-370)对肾癌细胞株ACHN和786-O中抑癌基因p21表达的调控作用以及对细胞生长的影响.方法 采用脂质体Lipofectamine 3000将已知的缺少人类基因同源性的dsRNA(对照组)和miR-370(实验组)分别转染ACHN和786-O细胞.采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白印迹法分别检测p21 mRNA和蛋白的表达变化.流式细胞术鉴定细胞周期分布,采用MTS法和集落培养实验检测细胞活力和增殖能力.结果 在ACHN细胞中,对照组和实验组中p21 mRNA的表达量分别为1.04±0.33、3.68±0.62,两者比较差异有统计学意义(t=7.535,P<0.001).在786-O细胞中,对照组和实验组中p21 mRNA的表达量分别为1.04±0.31、3.15±0.29,两者比较差异有统计学意义(t=9.975,P<0.001).在两种细胞中,实验组p21 mRNA表达与对照组相比均上调.蛋白印迹法检测结果显示,p21蛋白表达水平增加,与p21 mRNA水平上调一致.ACHN和786-O细胞转染miR-370后,细胞周期被阻滞在G0~G1期.MTS结果显示,在ACHN细胞中,对照组和实验组中细胞形成的集落数分别为(113±30)、(53±17)个,两者比较差异有统计学意义(t=2.982,P=0.041).在786-O细胞中,对照组和实验组中细胞形成的集落数分别为(106±27)、(50±16)个,两者比较差异有统计学意义(t=3.089,P=0.037).在两种细胞中,实验组形成的集落数与对照组相比均减少.结论 miR-370可上调肾癌细胞中抑癌基因p21的表达,并抑制肾癌细胞的生长.
关键词： 肾肿瘤 微RNAs 癌基因蛋白质P21(ras) -
k-rasp21分子在胃黏膜上皮癌变过程中的表达及意义
1 材料和方法1.1 材料 ①市中心医院、二院和三院66例病理诊断标准统一的存档蜡块,其中高、中、低分化腺癌39例,慢性浅表性胃炎11例、慢性萎缩性胃炎10例,不典型增生6例.蜡块均为近两年所得,抗原保存较好.②小鼠抗入P21(k-ras)单克隆抗体为迈新生物制剂有限公司产品.IgG/Bio通用型二抗和S-A/HRP三抗试剂盒均为中山生物制剂有限公司的产品.③制作标本,分别作HE染色和免疫组化染色.同时均设立乳腺癌标本为阳性对照,PBS代替一抗为阴性对照.
关键词： 胃肿瘤 癌基因蛋白质P21(ras) 免疫组织化学 -
肿瘤DNA含量与p53,p21,p16,Rb基因异常表达的肿瘤生物学特性
背景:p53,Rb,p16和p21蛋白是肿瘤相关基因产物,其异常表达在细胞周期的不同阶段直接或间接影响着肿瘤的形成和发展,DNA倍体异常也是肿瘤细胞周期频发事件,而肿瘤细胞DNA倍体与P53,Rb,P16和P21蛋白异常表达关系间的研究鲜见报道.目的:研究流式细胞仪(FCM)检测肿瘤组织DNA倍体与多种癌相关基因蛋白p53,Rb,p16和p21异常表达的意义.设计:以诊断为依据设立对照的前瞻性研究.地点和对象:实验地点:江苏省肿瘤防治研究所,实验对象:30例女性癌症患者,其中卵巢癌10例,乳腺癌20例,平均年龄55岁.干预:对30例卵巢癌和乳腺癌瘤体中心灶进行3点取样,应用FCM检测DNA倍体及p53,Rb,p16和p21异常表达.主要观察指标:肿瘤组织DNA倍体及p53,Rb,p16和p21蛋白阳性细胞百分率.结果:瘤灶多点取样法可检测出90%(27/30)的异倍体;不同倍性的肿瘤普遍存在程度不同地p53,Rb,p21和p16基因蛋白异常表达.96.7%(29/30)的肿瘤存在至少一种以上癌相关基因(p53,Rb,p16,p21)异常表达.结论:DNA异倍体与多种癌相关基因蛋白异常表达均是肿瘤恶性指标,FCM同步检测这些指标,为快速了解肿瘤细胞生物学特性、把握患者l临床治疗及预后提供了良好途径.
关键词： DNA 基因 P53 p16 癌基因蛋白质P21(ras) -
胃癌p53、p21 ras、nm23/NDPK基因表达及意义
1 材料与方法55例胃癌标本均取自弋矶山医院外科根治手术标本,其中男44例,女11例.标本均经10%福尔马林固定,石蜡包埋,切片厚度5 μm.p53、nm23、p21 ras单抗均购自福州迈新生物技术开发公司.采用免疫组化S-P法,按S-P试剂盒说明书操作,每次染色均以已知阳性的大肠癌组织作为阳性对照,以PBS取代一抗作为阴性对照.染色结果判断参考文献打分[1].
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p21 ras和CD44在非小细胞肺癌中的表达及其与淋巴结转移的关系
ras癌基因和CD44基因异常表达与非小细胞肺癌的发生及转移行为有关.作者应用免疫组化S-P法检测非小细胞肺癌中p21 ras和CD44的表达情况,并探讨它们表达的相关性及其与淋巴结转移的关系.
关键词： 肺肿瘤 癌基因蛋白质P21(ras) CD44 转移灶 免疫组织化学 -
甲状腺乳头状癌中p21ras蛋白、转化生长因子β1和ki-67的表达
目的观察p21ras蛋白、转化生长因子(TGF)β1和ki-67在甲状腺良恶性乳头状增生性疾病中的表达情况,探讨它们的表达对甲状腺乳头状癌(PTC)发病机制的意义.方法采用免疫组织化学的方法对103例PTC、57例良性乳头状增生性疾病(包括27例滤泡性腺瘤和30例甲状腺肿组织)进行p21ras蛋白、TGFβ1和ki-67表达的检测.结果 (1)p21ras蛋白、TGFβ1和ki-67在PTC组中的表达显著高于滤泡性腺瘤组、甲状腺肿组及癌旁正常甲状腺组织(P<0.01).(2)PTC组中,p21ras蛋白、TGFβ1和ki-67的表达在晚期患者、伴淋巴结转移的患者中分别显著高于早期患者、无淋巴结转移的患者(P<0.01).结论在PTC的发生、发展过程中,p21ras蛋白和TGFβ1的高表达起了重要的作用,它们共同促进PTC的生长、浸润和转移.ki-67能较可靠地反映细胞的增殖活性,可作为甲状腺良恶性乳头状增生性疾病的鉴别诊断及PTC生物学行为评估的参考指标.
关键词： 癌基因蛋白质P21(ras) 转化生长因子 Ki-67抗原 甲状腺肿瘤 -
外源性dsRNA对肾透明细胞癌细胞中p21表达的影响
目的 探讨dsP21-555转染对肾透明细胞癌细胞株ACHN和786-O中抑癌基因p21表达的影响.方法 肾透明细胞癌细胞分别使用脂质体Lipofectamine 3000转染dsControl和dsP21-555.荧光实时定量PCR(RT-qPCR)及Western blotting分别检测分析p21 mRNA及蛋白的表达情况.流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布,使用细胞活力实验(MTS法)和集落培养实验分析细胞活力和增殖能力.结果 在ACHN和786-O细胞株中,dsP21-555组p21 mRNA的表达(2.86±0.33、1.96±0.35)相比dsControl组(1.05±0.34、1.01±0.14),分别升高至2.72倍(t=7.640,P<0.001)和1.95倍(t=5.058,P=0.002).Western blotting实验证明两种细胞株中P21蛋白表达水平的上升与p21 mRNA上调相一致.FCM结果显示,转染dsP21-555后,细胞周期被阻滞在G0-G1期(57.08%±5.66%∶46.06%±4.60%,t=3.023,P=0.023;61.58%±6.23%∶42.25±6.08%,t=4.444,P=0.004).MTS结果显示,转染dsP21-555后两种细胞的活力较dsControl组明显下降,其吸光度分别为0.85±0.20∶1.27±0.13,t=3.410,P=0.014;1.04±0.25∶1.55±0.10,t=3.758,P=0.009.集落培养实验显示,两细胞株dsControl组形成的集落数分别为110.91±26.21、129.89±22.87,dsP21-555组形成的集落数分别为59.37±14.23(t=3.456,P=0.014)、71.26±21.38(t=3.745,P=0.010),表明dsP21-555组细胞增殖能力明显降低.结论 dsP21-555可明显上调肾透明细胞癌细胞中p21基因的表达,并显著抑制癌细胞的生长,提示dsP21-555可能成为一种新型的基因治疗工具.
关键词： 肾肿瘤 癌基因蛋白质P21(ras) 细胞增殖 dsP21-555 -
p53及p21waf1蛋白表达与人舌癌细胞多药耐药性的关系
目的 探讨p53及p21waf1蛋白表达与人舌癌细胞系Tca8113多药耐药性(MDR)的关系.方法 采用脂质体介导的转染技术,将野生型p53(wt-p53)基因导入人舌癌耐药细胞系Tca8113/BLM ;分子信标(Molecular Beacon)法检测人舌癌细胞系Tca8113及其耐药细胞系Tca8113/BLM中p53基因的mRNA水平; Western blot检测亲本、耐药细胞和转染细胞中p53、p21waf1、P-gp 和MRP蛋白的表达变化;MTT法检测不同细胞的药物敏感性,流式细胞仪检测细胞周期的改变,激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡.结果 在人舌癌耐药细胞系Tca8113/BLM中p53基因的表达明显下调,并且未检测到p21waf1蛋白的表达;转染了wt-p53的耐药细胞Tca8113/BLM/ p53中p53和p21waf1蛋白表达均显著上调,而P-gp和MRP的蛋白表达则明显下调,其对药物BLM的敏感性增加10.1倍(P＜0.01); 转染细胞的周期也发生改变,G2期细胞增加,G1和S期细胞减少,转染细胞明显出现凋亡.结论 人舌癌耐药细胞系Tca8113/BLM多药耐药性的产生,可能通过p53和p21waf1的表达下调使得多药耐药性相关蛋白P-gp和MRP表达上调来实现.
关键词： 舌肿瘤 抗药性 肿瘤 蛋白质p53 癌基因蛋白质P21(ras) -
p21WAF1在胃癌癌变多阶段组织中的表达及其意义
目的 探讨细胞周期素依赖性激酶抑制子p21WAF1在胃癌癌变多阶段组织中的表达,及其发生中的作用.方法 采用免疫组织化学ABC法检测104例慢性浅表性胃炎、98例慢性萎缩性胃炎、112例胃黏膜肠上皮化生、106例胃黏膜不典型增生和93肠型胃癌组织中p21WAF1蛋白的表达.结果 p21WAF1在各种胃癌癌变多阶段组织中均有表达,随着病变恶性程度的演进,p21WAF1表达水平明显下降.结论 p21WAF1可作为检测胃黏膜恶性病变的特异性分子标志物,p21WAF1蛋白表达减少或缺如在胃癌的发生中发挥重要作用.
关键词： 癌基因蛋白质P21(ras) 胃肿瘤 -
细胞周期调节因子在原发和复发鼻咽癌的表达
【目的】探讨细胞周期调节因子在鼻咽癌复发中的作用。【方法】采用LsAB法同时检测69例患者原发和复发鼻咽癌组织中p53、MDM2、p21ras和p21WAF1蛋白的表达。【结果】复发癌与原发癌相比：阳性表达率方面，p53蛋白(78%和80%)或MDM2蛋白(84%和83%)很相近，p21ras蛋白(73%和93%)或p21WAF1蛋白(52%和84%)明显下降；高表达率方面，p53蛋白(42%和51%)很相近,MDM2蛋白(57%和32%)明显升高,p21ras蛋白(16%和65%)或p21WAF1蛋白(17%和46%)明显下降。其中，MDM2蛋白表达水平在复发癌明显升高主要见于复发间期<34个月患者组（P<0.05),p21ras蛋白和p21WAF1蛋白表达水平在复发癌明显下降见于复发间期<34个月和≥34个月患者组（均<0.02以下)。【结论】原发鼻咽癌临床治愈后，p53蛋白和MDM2蛋白过度表达以及p21WAF1蛋白低表达或不表达可能仍然对鼻咽癌的复发起重要作用；MDM2蛋白表达水平显著升高和p21WAF1蛋白表达水平显著下降可能进一步加促鼻咽癌的复发过程。
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口腔鳞癌K-ras基因测序分析及p21ras蛋白的表达
目的:探讨K-ras基因在口腔鳞癌中的序列改变和p21ras蛋白的表达.方法:采用聚合酶链反应直接测序检测口腔鳞癌K-ras基因外显子1、2突变,免疫组织化学法检测口腔鳞癌组织、癌旁正常组织p21蛋白的表达.结果:30例口腔鳞癌中4例(13.3%)存在K-ras基因突变,突变方式为C→T转换,突变位点在第6位和第79位密码子,口腔鳞癌组织p21ras蛋白阳性率为73.3%(22/30),高于癌旁正常组织20%(6/30).结论:口腔鳞癌中K-ras基因的突变谱较广,K-ras基因突变和p21蛋白表达与口腔鳞癌发生发展有关.
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氟伐他汀对哮喘大鼠气道重建的影响及其机制
目的:观察羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂氟伐他汀对大鼠哮喘模型气道重建的影响.方法:将50只SD雄性大鼠随机分为5组:空白对照组(A组),哮喘组(B组),地塞米松组(C组),氟伐他汀组(D组)及氟伐他汀与地塞米松合用组(E组).以10 g/L卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏并长期吸入激发制备慢性哮喘模型.用免疫组织化学方法检测各组大鼠肺组织中增殖细胞核抗原(PCNA),P21ras和Ⅲ型胶原的表达,采用图像分析方法测量气道壁内周长(Pi)及平滑肌面积(WAm).结果:①氟伐他汀对气道重建具有抑制作用:D组的WAm/Pi (4.44±0.95)μm2/μm,Ⅲ型胶原和PCNA表达(32±6,38±10)均低于B组[(7.01±1.54)μm2/μm,55±8,68±12] (P均＜0.05); ②D组对气道重建的抑制作用弱于C组和E组:D组的WAm/Pi,Ⅲ型胶原和PCNA表达均高于C组 [(3.14±1.06)μm2/μm,21±6,26±6]和E组 [(3.03±0.87)μm2/μm,20±7,25±7 ](P均＜0.05); ③D组P21ras表达的吸光度值(24±11)明显低于B组(57±10)(P＜0.05).P21ras表达与PCNA (rs=0.685,P＜0.05)和Ⅲ型胶原(rs=0.530,P＜0.05)的表达分别呈正相关.结论:氟伐他汀可延缓哮喘气道重建的进程,这种作用与P21ras抑制相关,但其抑制增生的作用弱于地塞米松.
关键词： 氟伐他汀 支气管哮喘 气道重建 癌基因蛋白质P21(ras)
