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DNA甲基化与心力衰竭的相关性研究进展
心力衰竭是心血管疾病的共同终末阶段，具有预后差、死亡率高等特点。DNA 甲基化与心力衰竭存在着相关性，DNA甲基化状态可以逆转为心力衰竭的治疗提供了一个契机。肌浆网Ca2＋-ATP酶参与心力衰竭的进程，通过改变肌浆网Ca2＋-ATP酶的表达情况可以干预心力衰竭的进程。因此本文就DNA甲基化与心力衰竭研究的关系进行论述，探讨其在心力衰竭发病及治疗方面的相关作用机制，并论述肌浆网Ca2＋-ATP酶在心力衰竭过程中所发挥的作用。
关键词： DNA甲基化 心力衰竭 肌浆网钙转运ATP酶类 -
腺相关病毒介导心肌肌浆网三磷酸腺苷酶基因治疗心力衰竭犬的安全性分析
目的 研究心肌注射重组腺相关病毒(rAAV)2/1介导心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)基因治疗慢性心力衰竭犬的安全性.方法 选取成年比格犬8只,随机分为对照组和SERCA2a基因转导组(转导组),每组4只.分别采用PCR、RT-PCR和Weslern blot法从DNA、RNA和蛋白水平检测rAAV2/1-SERCA2a转导后在犬体内的分布;采用双夹心ELISA法检测转导组犬的血清.结果 除注射rAAV2/1的心肌区域外,未注射rAAV2/1 的心肌区域、主要脏器、骨骼肌和性腺中均未检测到rAAV2/1 SERCA2a.对照组与转导组犬心肌、腰大肌、咀嚼肌和睾丸表现出相同的SERCA2a蛋白表达谱,未在其他组织中检测到.转导组犬血清内未检测到抗rAAV2/1 抗体.结论 rAAV2/1 介导的基因转导是相对安全的,未整合到心脏以外的其他组织,也未在犬体内引发体液免疫.
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慢性心力衰竭基因治疗的临床研究进展
慢性心力衰竭是大多数心血管病的终阶段,是世界范围发病率和死亡率主要的病因之一.据估计,目前全世界超过2300万人患有慢性心力衰竭,随着老龄化社会的到来,其发病率将会在未来10年继续增长.近几十年新的医学观念和手段已经使多种心脏疾病的预后获得改观,但慢性心力衰竭死亡率(5年死亡率近50％)依然高居不下[1].心脏移植是目前晚期心力衰竭患者为有效的治疗手段,但供者不足、术后免疫抑制以及花费巨大严重阻碍其发展和推广.
关键词： 心力衰竭 基因疗法 心脏移植 肌浆网钙转运ATP酶类 腺苷酸环化酶 -
过表达肌浆网钙ATP酶治疗实验性慢性缺血性心力衰竭
目的 研究肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)基因过表达对慢性缺血性心力衰竭(心衰)心功能及心肌内质网应激(ERS)相关凋亡的影响.方法采用ameroid环束扎小型猪前降支制备慢性缺血性心衰模型.开胸心肌内注射重组腺相关病毒以过表达SERCA2a或对照报告基因绿色荧光蛋白.60 d后检测血流动力学、SERCA2a的表达和活性、心肌凋亡及ERS标志蛋白-分子伴侣GRp78、凋亡蛋白caspase-12的表达.结果基因转导后60 d,与心衰对照及报告基因组相比,转基因组SERCA2a蛋白表达和活性显著增高,心功能参数改善,心肌凋亡指数降低,伴GRP78和活化caspase12表达下降.结论过表达SERCA2a可改善慢性缺血性心衰的心脏功能,其机制可能涉及减轻ERS相关的心肌细胞凋亡.
关键词： 心力衰竭 充血性 心肌缺血 基因疗法 肌浆网钙转运ATP酶类 -
姜黄素对心力衰竭兔肌浆网钙泵表达的影响
目的 探讨姜黄素对心力衰竭(心衰)兔肌浆网钙泵表达的影响.方法 采用主动脉瓣反流联合腹主动脉缩窄制作慢性心衰家兔模型.随机分为心衰姜黄素组、心衰安慰剂组、对照姜黄素组、对照安慰剂组.8周后计算心脏重量与体重比值,观察超微结构,检测肌浆网钙泵mRNA和蛋白的表达水平及活性.结果 心衰姜黄素组和心衰安慰剂组心脏重量与体重比值均大于对照组(P＜0.05);且心衰姜黄素组比值小于心衰安慰剂组(P＜0.05).电子显微镜显示心衰姜黄素组的心脏超微结构有所改善.心衰姜黄素组和心衰安慰剂组肌浆网钙泵mRNA、蛋白表达及活性均小于对照组(P＜0.05),但心衰姜黄素组均显著高于心衰安慰剂组(P＜0.05).结论 姜黄素能在mRNA水平和蛋白水平提高心衰家兔肌浆网钙泵的表达,提高肌浆网钙泵的活性,这可能是姜黄素改善心衰的机制之一.
关键词： 心力衰竭 充血性 肌浆网钙转运ATP酶类 姜黄素 -
组织微电极芯片技术观察大鼠肌浆网钙ATP酶基因修饰骨髓干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的心电活动变化
目的 对比骨髓干细胞(BMSC)移植以及肌浆网钙ATP酶(SERCA2a)基因修饰的BMSC移植治疗急性心肌梗死(AMI)的疗效,同时运用组织微电极芯片技术(MEA)进行心电学方面的评估.方法 建立大鼠AMI模型(n=30),随机分为4组:正常组(n=6),盐水对照组(对照组,n=8),BMSC细胞移植组(BMSC组,n=8),SERCA2a基因修饰的细胞移植组(BMSC+rAd.SERCA2a组,n=8).14d后心脏B超、体表心电图及MEA技术评估心功能和心脏电活动变化.结果 (1) rAd.SERCA2a基因对BMSC的感染效率为80％～90％.(2)BMSC组、BMSC+rAd.SERCA2a组大鼠左心室射血分数均明显优于对照组(P均＜0.05).(3) BMSC+ rAd.SERCA2a 组大鼠体表心电图QT间期为(80.30±6.53) ms比对照组的(105.31±21.89) ms少了23.8％(P＜0.05),对照组室性早搏较多.(4)MEA记录可发现对照组离体心脏搏动频率明显减慢,并出现室性心律失常和房室传导阻滞.梗死面心肌组织大场电位BMSC组为(0.51±0.15) mV、BMSC+ rAd.SERCA2a组为(0.55±0.16) mV,均明显高于对照组的(0.23±0.10) mV(P均＜0.05),场电位时程BMSC组为(104.50±25.43) ms、BMSC+ rAd.SERCA2a组为(107.67±24.01) ms,均显著长于对照组的(63.00 ±20.34) ms(P均＜0.05).(5) BMSC+ rAd.SERCA2a组传导时间短,且能显著改善梗死面心室肌组织的均一性传导.结论 短时间内,BMSC及SERCA2a基因修饰的BMSC移植均可明显改善AMI后心脏功能,后者还可有效改善梗死面心室肌组织的均一性传导,并可预防梗死后心律失常的发生.MEA技术在细胞或基因治疗的心肌电活动研究方面有重要的应用价值.
关键词： 心肌梗死 干细胞移植 肌浆网钙转运ATP酶类 微阵列分析 -
rAAV1-SERCA2a转导对慢性心力衰竭beagle犬的治疗作用
目的 研究重组1型腺相关病毒(rAAV1)介导的肌质网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)基因转导对慢性心力衰竭(HF)beagle犬的治疗作用及町能的机制. 方法 经快速右心室起搏建立beagle犬的慢性HF模型.16只beagle犬分为4组:对照组(n=4),HF组(n=4),HF+EGFP组(n=4)和HF+SERA2a组(n=4).应用开胸心肌内注射术,分别将携带EGFP基因rAAW1和携带SERCA2a基因rAAV1导人HF+EGFP组和HF+SERCA2a组的beagle犬心肌,剂量为1×10 12/ml,而对照组和HF组未进行任何处理.基因转导后30d,应用超声心动图、血流动力学检测各组beagle犬的心脏收缩和舒张功能、Westem blotting检测SERCA2a蛋白表达水平,TUNEL法检测心肌细胞的凋亡指数,免疫组织化学染色检测Bax的表达. 结果 在基因转导后30d,HF+SERCA2a组SERCA2a蛋白表达水平较HF组明显增加,随着SERCA2a表达增加心功能也得到改善,左室收缩压峰值(LVSP)、左室舒张末压(IVEDP)、左室内压大上升速率(LV+dp/dtmax)和左室内压大下降速率(LV-dp/max)均接近对照组水平,较HF组明显改善(P＜0.05).SERCA2a基因治疗后心肌细胞凋亡指数、Bax表达比HF组显著降低(P＜0.05). 结论 SERCA2a基因转导能够治疗慢性心力衰竭,改善心功能,抑制心肌细胞凋亡.
关键词： 心力衰竭 充血性 肌浆网钙转运ATP酶类 腺病毒科 基因疗法 -
肌浆网Ca2﹢-ATP酶在柔红霉素致大鼠心肌损伤中的作用
目的：探讨柔红霉素（ DNR）致大鼠心肌损伤的作用机制。方法用随机数字表法将健康清洁的SD大鼠分为DNR组和对照组，每组20只。DNR组腹腔注射DNR 3.5 mg/kg，对照组腹腔注射等容积0.9%氯化钠注射液，均每周1次，连续4周。注射DNR或0.9%氯化钠注射液1、3和4周末2组分别各取5只大鼠进行心电图、心肌组织肌浆网Ca2﹢-ATP酶（ SERCA2a）蛋白表达及组织病理学检测。结果腹腔注射DNR可成功复制亚急性心肌损伤大鼠模型。实验第2周时DNR组大鼠出现精神差、活动缓慢、嗜睡、进食减少等症状，对照组大鼠活动、体重、进食均正常；第4周大鼠心电图QRS波电压下降>30%，ST段抬高，P波尖耸，心肌组织病理学检查显示心肌细胞胞质浑浊，有空泡形成，肌纤维排列紊乱，间隔增宽。实验1周时2组大鼠心肌组织SERCA2a蛋白表达均呈中等阳性，而实验3及4周末DNR组大鼠心肌组织SERCA2a蛋白表达均呈弱阳性。实验3及4周末，DNR组大鼠SERCA2a蛋白表达阳性细胞数明显低于同时点对照组大鼠[（42.2±1.2）个比（65.30±1.6）个，（35.2±6.0）个比（66.7±1.5）个，均P﹤0.05]。结论 DNR可抑制大鼠心肌组织SERCA2a蛋白表达，可能是其心肌毒性的机制之一。
关键词： 柔红霉素 肌浆网钙转运ATP酶类 大鼠 -
liguzinediol基于肌浆网钙泵促进钙释放发挥正性肌力作用
目的：研究liguzinediol（LZDO）正性肌力动力学特点及其作用机制。方法①大鼠在体实验，经左侧颈外静脉缓慢推注LZDO 20 mg·kg-1，连续记录30 min左心室压力-容积环。②采用大鼠离体心脏，分别灌流咖啡因0.5 mmol · L-1以及咖啡因0.5 mmol · L-1+LZDO 100μmol · L-1，记录其左心室收缩力。③心肌细胞钙释放实验，分别灌流毒胡萝卜素2μmol·L-1以及毒胡萝卜素2μmol·L-1+LZDO 100μmol·L-1，记录其肌浆网钙释放。④采用灌流后的心脏，分离肌浆网膜蛋白之后，测定LZDO（1，10和100μmol·L-1）对肌浆网钙转运ATP酶（SERCA2a）活性作用。结果①除心率及舒张末期容积外，LZDO 20 mg·kg-1显著减少收缩末期容积，显著增加收缩末期压力、每搏输出量、射血分数、心输出量、左室压力大上升速率及搏出功（P<0.05）。②咖啡因0.5 mmol·L-1灌流5 min，大鼠离体心脏心率、左心室发展压及左心室内压大上升速率增加，灌流30 min后各指标均降低。而LZDO 100μmol · L-1则能对抗咖啡因0.5 mmol · L-130 min的这种降低作用（P<0.05）。③毒胡萝卜素2μmol·L-1显著降低心肌细胞钙释放，从标准化的正常灌流液组（100±5）%降低到（51±5）%（P<0.05），而LZDO 100μmol·L-1未能对抗毒胡萝卜素的作用〔（49±4）%〕。④LZDO（10和100μmol·L-1）显著增加心肌肌浆网钙泵活性，从正常灌流液组0.98±0.10分别增加到1.17±0.20及（1.43±0.09）μmol Pi·g-1·h-1，呈现浓度依赖性（r=0.85，P<0.05）。结论 LZDO通过增加钙泵活性提高肌浆网钙浓度梯度，从而间接增加钙释放而发挥正性肌力作用。基于其作用机制，LZDO有可能被开发为临床上使用的正性肌力药物。
关键词： liguzinediol 钙释放 强心药 肌浆网钙转运ATP酶类 -
过表达肌浆网钙ATP酶对心肌细胞内质网应激的影响
目的 研究过表达肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)对心肌细胞内质网应激的影响.方法 构建含SERCA2a cDNA的重组腺病毒载体(Adv-SERCA2a),以缺氧和衣霉素诱导内质网应激,随机将体外培养的心肌细胞分为以下6组:正常对照组、缺氧组、衣霉素组、过表达SERCA2a组、SERCA2a+缺氧组和SERCA2a+衣霉素组.采用Western印迹法检测内质网应激蛋白GRP78及C/EBP同源蛋白(CHOP)表达水平,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,台盼蓝染色检测心肌细胞存活率.结果 过表达SERCA2a+缺氧组GRP78及CHOP蛋白表达较缺氧组分别低49.1%和52.7%,细胞凋亡率较缺氧组低66.0%,细胞存活率较缺氧组高13.4%,差异有统计学意义(均P<0.05);过表达SERCA2a+衣霉素组GRP78及CHOP蛋白表达较衣霉素组分别低50.4%和66.1%,细胞凋亡率较衣霉素组低54.0%,细胞存活率较衣霉素组高6.7%,差异有统计学意义(均P<0.05).结论 过表达SERCA2a通过下调内质网应激蛋白表达,降低心肌细胞内质网应激水平,缓解过度内质网应激介导的细胞损伤.
关键词： 内质网 应激 肌细胞 心脏 肌浆网钙转运ATP酶类 -
吸人布地奈德对哮喘大鼠气道平滑肌细胞SERCA表达的影响
目的:探讨吸人布地奈德混悬液对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)肌浆网钙-ATP酶(SERCA)表达的影响.方法:按照随机数字分组的方法将大鼠分为正常组、哮喘组及布地奈德干预组,每组8只.哮喘组用卵蛋白雾化吸入法制作哮喘大鼠模型；正常组用PBS代替卵蛋白吸入；布地奈德干预组在卵蛋白吸入后用布地奈德混悬液泵吸干预.各组大鼠ASMC原代培养；实时定量PCR检测SERCA2 mRNA于ASMC中的表达；Western blot检测SERCA2于ASMC中表达.结果:SERCA2 mRNA表达及蛋白水平在哮喘组ASMC中较在正常组中降低,差异有统计学意义(P＜0.05).SERCA2 mRNA表达及蛋白水平在布地奈德干预组ASMC中均较在哮喘组ASMC中增高,差异有统计学意义(P＜0.05)；而与在正常组ASMC中表达相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:布地奈德有可能通过增加SERCA2表达促进细胞内钙离子储备,从而改善哮喘气道高反应性.
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ATP2A2通过钙离子浓度变化参与肿瘤发生机制的研究进展
ATP2A2是ATP2As基因家族的成员,编码肌浆(内质)网钙转运ATP酶中的一种,即SERCA2b.由于该酶的主要功能为将钙离子从胞质转运至肌浆(内质)网内,因而它在控制肿瘤生长、分化、血管生成、转移和凋亡的钙离子相关信号通路中发挥着重要作用.近期研究已在一些类型的肿瘤中明确了ATP2A2表达水平的具体变化,在探究ATP2A2是如何参与肿瘤形成以及它是否可作为肿瘤标记物和治疗靶点方面迈出了第一步.本文对ATP2A2参与肿瘤发生的可能机制的相关研究进行了总结,认为其表达异常可引起细胞胞质内和内质网间钙离子稳态的破坏,从而造成细胞的恶性增殖并促进肿瘤的迁移和血管形成等.本文还对该基因的研究和应用前景进行了展望.
关键词： 肌浆网钙转运ATP酶类 ATP2A2 钙通道 肿瘤 -
肌浆网钙ATP酶过表达对急性心房颤动兔心房有效不应期的影响
目的 探讨肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)基因过表达对急性心房颤动(AF)兔心房有效不应期(AERP)的影响.方法 40只成年健康新西兰大白兔随机分4组:正常对照组(control组,n=8)、房颤组(AF组,n=8)、绿色荧光蛋白+房颤组(EGFP+AF组,n=12)、肌浆网ATP酶2a+绿色荧光蛋白+房颤组(SERCA2a+EGFP +AF组,n=12).control组仅植入电极不起搏;AF组、EGFP+AF组和EGFP+SERCA2a+AF组采用快速心房起搏(频率600次/min)制作急性AF模型,后两组起搏前30 d分别向心包腔内注射携带EGFP和SERCA2a+EGFP基因的rAAV载体.转染30 d,荧光显微镜下观察心肌组织绿色荧光表达情况,观察起搏0、4、8、12、24 h AERP的变化.结果 EGFP+AF组兔心肌冰冻切片在荧光显微镜下可见弥漫绿色荧光,起搏4 h后AF组和EGFP+AF组AERP较control组显著缩短(P<0.05),随起搏时间延长呈进行性加重,AERP在AF组和EGFP+AF组间无明显差异(P>0.05),SERCA2a+EGFP+AF组自起搏12 h后AERP较AF组和EGFP+AF组缩短程度减轻(P<0.05).结论 以rAAV9为载体介导SERCA2a基因转导可有效逆转快速心房起搏兔心房肌的电重构,是一种潜在的治疗AF的方法.
关键词： 肌浆网钙转运ATP酶类 快速心房起搏 有效不应期
