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CCL2对白血病细胞趋化作用及高表达后降低白血病细胞迁移侵袭能力的实验研究
目的 探讨趋化因子配体2(CCL2)对白血病细胞的趋化作用及高表达后降低白血病细胞迁移侵袭的能力.方法 以白血病细胞K562为研究对象,在Transwell小室的下室加入重组CCL2蛋白进行趋化,检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测重组CCL2蛋白作用后的K562细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平.K562细胞转染CCL2过表达载体,RT-PCR和Western blot检测转染效果,ELISA法检测转染后细胞培养液上清中CCL2含量.Transwell小室检测过表达CCL2的细胞迁移和侵袭能力,ELISA法检测侵袭实验Tr-answell小室上室和下室中CCL2含量.结果 Transwell小室下室中加入CCL2蛋白后K562细胞的迁移和侵袭穿膜指数分别为:2.35±0.26、2.58±0.18,均明显高于不加CCL2蛋白的K562细胞迁移和侵袭穿膜指数1.00±0.09、1.01±0.09.重组CCL2蛋白作用后K562细胞中MMP-2表达水平分别由0.26±0.12升高至0.99±0.08,MMP-9水平由0.39±0.06升高至1.18±0.13.K562细胞转染CCL2过表达载体后能够成功过表达细胞中CCL2水平,提高细胞分泌CCL2水平.过表达CCL2后的K562细胞穿膜侵袭指数从0.99±0.11降低至0.58±0.16,侵袭实验小室上室和下室中CCL2含量依次为:(900.58±69.63)ng/L、(98.84±58.64)ng/L.过表达CCL2后迁移穿膜指数无明显变化(1.02±0.14 vs.0.99±0.08).结论 CCL2能够定向趋化白血病细胞迁移和侵袭,而高表达CCL2后白血病细胞由于自分泌功能导致侵袭能力降低,作用机制可能与MMP-2和MMP-9水平有关.
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罗格列酮对胰岛MIN6细胞趋化因子配体2表达的影响
目的 研究罗格列酮对胰岛MIN6细胞趋化因子配体2(CCl2)表达的影响与潜在机制.方法 细胞分为5组:正常对照组,正常MIN6细胞不做任何处理;模型组,用LPS 10 mg·L-1刺激MIN6细胞12 h;实验组,用罗格列酮20μmol·L-预处理12 h后,加LPS 10mg· L-1刺激MIN6细胞12 h;阴性对照组(siRNA-NC),MIN6细胞预先转染siRNA-NC,再用罗格列酮20 μmol·L-1预处理12 h后,加LPS10mg· L-1刺激细胞12 h;PPAR-γsiRNA组,MIN6细胞预先转染PPAR-γsiRNA,再用罗格列酮20 μmol·L-1预处理12 h后,加LPS10 mg·L-1刺激细胞12 h.以逆转录PCR法(RT-PCR)检测CCL2、胰岛素mRNA表达,以免疫印迹法检测CCL2、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化κ基因结合核因子(p-NF-κB)蛋白表达.结果 经LPS刺激MIN6细胞后,正常对照组、模型组与实验组的CCL2 mRNA表达量分别是2.27±0.15,8.83±0.55,4.00±0.40,胰岛素mRNA表达量分别是2.47 ±0.12,0.63±0.03,1.63±0.24,正常对照组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.001);实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.001).与siRNA-NC组相比较,PPAR-γsiRNA组PPAR-γ蛋白水平下降,而CCL2、p-ERK、p-NF-κB的蛋白水平增加.说明敲低PPAR-γ可促进p-ERK、p-NF-κB活性,增加MIN6细胞分泌CCL2.结论 罗格列酮可抑制LPS诱导胰岛MIN6细胞趋化因子CCL2表达,其可能与PPAR-γ信号通路有关.
关键词： 罗格列酮 MIN6细胞 趋化因子配体2 过氧化物酶体增殖物激活受体γ -
趋化因子CCL2对人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的影响
目的:探讨CC类趋化因子配体2(C-C motif ligand2,CCL2)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中细胞间粘附分子-1 (intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响.方法:体外分离培养HUVECs细胞,将HUVECs铺至6孔板中,待细胞融合至80-90％时,将CCL2过表达载体[pcDNA3.1 (+)-CCL2]及CCL2小分子干扰RNA(si-RNA)分别转染到HUVECs中,于转染后12h、24h和48 h收集细胞进行RNA及蛋白提取.荧光定量PCR方法检测HUVECs中CCL2及ICAM-1基因mRNA表达.Western blotting检测HUVECs中CCL2及ICAM-1蛋白表达.结果:(1)与pcDNA3.1(+)组相比较,pcDNA3.1 (+)-CCL2组中CCL2基因mRNA和蛋白水平均显著升高;与si-Control组相比较,si-CCL2组中CCL2基因mRNA和蛋白表达均明显下降.(2)与对照组比较,pcDNA3.1 (+)-CCL2组明显增加HUVECs中ICAM-1的mRNA及蛋白表达,而si-CCL2组显著抑制HUVECs中ICAM-1的mRNA及蛋白表达.结论:CCL2能增加HUVECs中ICAM-1基因mRNA和蛋白表达,为深入认识动脉粥样硬化的发病机制提供了理论依据.
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间充质干细胞调控趋化因子配体2对系统性红斑狼疮作用的机制探讨
目的:探讨趋化因子配体2[chemokine (C-C motif) ligand 2,CCL2]在间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)移植治疗系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SEE)中的作用.方法:采用酶联免疫吸附试验检测SEE患者及正常对照者的血清、尿液及骨髓MSCs培养上清中的CCL2及白细胞介素(interleukin,IL)-17的表达水平,并采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中Th17-CD4qL-17+的百分率及其表面CCR2的表达.将18只雌性MRL/lpr SEE小鼠随机分为SEE小鼠组(n=6)(未治疗组)、脐带MSCs移植联合CCL2中和抗体治疗SEE小鼠组(n=6)及脐带MSCs移植联合同型对照IgG2B治疗SEE小鼠组(n=6),另选6只同周龄雌性C57BL/6小鼠作为健康阴性对照组.采用酶联免疫吸附试验检测各组血清CCL2及IL-17的水平,流式细胞术检测各组PBMCs中CD4+CCR2+IL-17+细胞百分率.结果:SEE患者血清[(839.0±160.5) pg/mL]、尿液[(881.8±162.7) pg/mL]及骨髓MSCs培养上清[(22 935±2 304) pg/mL]的CCL2含量均显著高于正常对照者[(433.0±31.0) pg/mL、(222.7±52.8) pg/mL、(8 394±5 125) pg/mL];SEE患者PBMCs中CD4+CCR2+IL-17+细胞百分率较正常对照者显著升高(P＜0.01).脐带MSCs移植联合CCL2中和抗体治疗SLE小鼠组血清CCL2浓度显著低于未治疗组,PBMCs中CD4qT细胞亚群IL-17、CCR2表达较未治疗组显著降低.结论:MSCs移植治疗SEE的效果可能通过抑制CCL2表达,进而下调患者Th17细胞水平来实现.
关键词： 系统性红斑狼疮 间充质干细胞 辅助性T淋巴细胞17 趋化因子配体2 -
CD11b+/CD66b-表型髓系细胞在结肠癌进展和肝转移中的作用
目的 探讨 CD11b+/CD66b-表型髓系细胞与人类结肠癌进展和肝转移的关系.方法 采用 real-time PCR、Western blotting及免疫组化方法检测正常结肠组织、结肠癌组织及结肠癌肝转移组织中CD11b、趋化因子配体2(CCL2)和趋化因子受体2(CCR2)的转录水平、蛋白翻译水平.免疫共沉淀方法检测CCL2和CCR2间的相互结合关系.结果 结肠癌组织、肝转移瘤组织的CD11b mRNA转录水平及蛋白的表达水平较癌旁正常组织高(P<0.05).肝转移瘤组织中CCL2的mRNA转录水平及蛋白的表达水平明显高于癌旁正常结肠组织及结肠癌组织(P<0.05),而CCR2mRNA转录水平及蛋白表达水平在三者中无统计学差异(P>0.05).趋化因子配体CCL2和趋化因子受体CCR2之间可相互结合.结论 CD11b表型髓系细胞在结肠癌组织及结肠癌肝转移组织中广泛浸润,并可能在CCL2-CCR2轴的介导下促进结肠癌进展和结肠癌肝转移.
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脊髓小胶质细胞在神经病理性疼痛发生发展过程中的作用机制研究进展
脊髓小胶质细胞是神经病理性疼痛的发生过程中发挥重要的关键细胞之一.脊髓小胶质细胞中单核细胞趋化蛋白-1、趋化因子配体-2、基质金属蛋白酶-9 和 丝裂原激活蛋白激酶类家族蛋白参与了脊髓小胶质细胞激活进而导致神经病理性疼痛产生的过程.
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趋化因子配体2中和抗体对骨癌痛大鼠痛行为及脊髓小胶质细胞活化的影响
目的 探讨鞘内注射趋化因子配体2(CCL2)中和抗体对胫骨癌痛大鼠机械痛行为及脊髓小胶质细胞活化的影响.方法 采用Walker 256乳腺癌细胞,构建大鼠胫骨癌痛模型.雌性SD大鼠(160～180 g)40只,随机分为5组(n=8):假手术组(Ⅰ组)、假手术+CCL2中和抗体组(Ⅱ组)、骨癌痛组(Ⅲ组)、骨癌痛+ control IgG组(Ⅳ组)和骨癌痛+CCL2中和抗体组(Ⅴ组).术后第10～12天,每天1次鞘内注射CCL2中和抗体或control IgG( 10 μg/15μ1).分别于术前、术后1d,3d,5d,7d,10 d,14 d,21 d测定各组大鼠机械痛敏阈值(PMWT).另取30只大鼠,分组同前(n=6),术后14d取材,免疫荧光染色法测定各组大鼠脊髓背角小胶质细胞标志物(Iba-1)的平均光密度值(MOD).结果 (1)痛行为学:术后10d,14 d,21 d,Ⅲ组大鼠PMWT分别为:(1.78 ±0.38)g,( 1.70±0.17)g,(1.35±0.07)g；Ⅳ组大鼠PMWT分别为:(2.99±0.67)g,(2.52±0.75)g,(1.13±0.07)g;Ⅴ组大鼠PMWT分别为(5.88±0.66)g,(7.81±0.75)g,(6.19±0.53)g.与Ⅲ组相比,Ⅴ组大鼠PMWT值明显升高(P＜0.01),Ⅳ组大鼠PMWT值无明显变化(P＞0.05).(2)免疫荧光染色:术后14d,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组大鼠脊髓背角Iba-1的MOD值分别为(151.3±10.8),(149.2±10.6),(74.5±5.0)；与Ⅲ组相比,Ⅴ组大鼠MOD值明显升高(P＜0.01)；Ⅳ组大鼠MOD值无明显变化(P＞0.05).结论 鞘内注射CCL2中和抗体能显著减轻胫骨癌痛大鼠的机械痛敏,并能抑制其脊髓小胶质细胞的活化.
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血清和膝关节滑液趋化因子配体2浓度与膝骨关节炎影像学严重程度的相关性
目的 探讨血清和膝关节滑液趋化因子配体2(CCL2)浓度与膝骨关节炎(OA)影像学严重程度的相关性.方法 选择OA患者109例(病例组)和健康体检者92例(对照组),采用酶联免疫吸附法检测两组血清CCL2浓度及病例组膝关节滑液CCL2浓度,采用国际公认的Kellgren-Lawrence评分系统对病例组患者膝OA影像学严重程度进行分级,观察血清和膝关节滑液CCL2浓度与膝OA严重程度的相关性.结果 病例组血清CCL2浓度较对照组显著升高(P=0.002);血清和膝关节滑液CCL2浓度与膝OA影像学分级呈正相关(rs=0.275,P＜0.001;rs=0.314,P＜0.001),此外血清CCL2浓度与膝关节滑液CCL2浓度亦呈正相关(r=0.363,P＜0.001).结论 OA患者血清和膝关节滑液CCL2浓度与膝OA影像学严重程度相关,表明血清和膝关节滑液CCL2浓度可以作为评价膝OA影像学进展的血清学指标.
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单核细胞趋化蛋白-1与自身免疫性疾病研究进展
单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)是早被发现的CC家族趋化因子,能调节单核/巨噬细胞的迁移渗透及募集单核细胞和T淋巴细胞等炎性相关细胞,参与多种急、慢性炎症的发生发展.近年来越来越多的研究发现,MCP-1在系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、1型糖尿病、多发性硬化症及炎症性肠病等自身免疫性疾病的发生和发展过程中起着重要作用.本文着重对MCP-1在自身免疫性疾病中的研究进展作一综述.
关键词： 单核细胞趋化蛋白-1 趋化因子配体2 自身免疫性疾病 -
不同程度肺气肿表型慢阻肺患者血清同型半胱氨酸、趋化因子配体2水平与认知功能障碍的关系
目的 观察不同程度肺气肿表型慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)患者血清同型半胱氨酸(HCY)、趋化因子配体2(CCL2)水平与认知功能障碍的关系.方法 纳入2016年1月至2017年3月依据肺气肿表型分型确定的慢阻肺患者共62例,其中肺气肿1～2级37例(1～2级亚组),3～4级25例(3～4级亚组),同期健康体检者30例作为对照(体检组).完善蒙特利尔认知评估(MoCA)量表调查及血清HCY、CCL2检测.统计分析不同程度肺气肿表型慢阻肺患者血清HCY、CCL2水平与认知功能障碍的关系.结果 肺气肿慢阻肺患者中,3～4级亚组与1～2级亚组比较,PaO2降低、PaCO2升高,血浆HCY、CCL2水平升高,差异有统计学意义(均P＜0.05).肺气肿慢阻肺组MoCA评分总分及各亚项评分(除1～2级亚组视空间执行能力评分外)均较体检组低;肺气肿慢阻肺患者中3～4级亚组MoCA评分均低于1～2级亚组,差异有统计学意义(均P＜0.05).HCY和CLL2水平与MoCA评分总分及其亚项评分均呈负相关(P＜0.01),HCY与CLL2呈正相关(P＜0.01).对肺气肿慢阻肺患者血清HCY、CLL2水平与认知障碍进行受试者工作特征(ROC)曲线分析,血清HCY、CLL2诊断认知障碍的ROC曲线下面积分别为0.79、0.97.结论 不同程度肺气肿表型患者血清HCY、CCL2水平存在不同程度升高,肺气肿程度、HCY、CCL2水平与认知功能障碍关系紧密.
