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人肝微粒体中氯吡格雷及其代谢产物药物浓度测定方法建立及应用
目的:建立测定人肝微粒体孵育体系中氯吡格雷及其活性代谢产物(AM)和非活性代谢产物(CCAM)药物浓度的检测方法,并将其应用于氯吡格雷的体外代谢研究.方法:AM含有巯基,需用衍生化试剂2-溴-3'-甲氧基苯乙酮(MPB)将肝微粒体孵育体系中的AM衍生化成MP-AM进行测定.分别采用蛋白沉淀法和液液萃取法处理人肝微粒体孵育体系样品,测定氯吡格雷原药及MP-AM和CCAM药物浓度.氯吡格雷原药浓度的测定在HPLC仪上进行,采用Accurasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(磷酸调pH 2.85)(22∶ 78),流速1 mL·min-1,检测波长235 nm;MP-AM和CCAM的浓度测定在UPLC-MS/MS仪上进行,采用Thermo C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,5μm),流动相为乙腈(含0.1％甲酸卜水(含0.1％甲酸)(9∶1),流速200 μμL·min-1,正离子模式多反应监测(MRM)扫描分析,离子通道分别为MP-AM m/z503.6→353.8,CCAM m/z 307.7→197.8,内标氯雷他定m/z 382.8→336.9.结果:人肝微粒体孵育体系中氯吡格雷,MP-AM和CCAM线性范围分别为0.5～ 200 μmol·L-1、1～200 ng·mL-1和10 ～2 000 ng ·mL-1,定量下限分别为0.5μmol·L-、1 ng·mL-1和10 ng·mL-1,回收率分别在95.4％～ 98.8％、59.4％～73.4％和54.8％ ～ 72.8％之间,氯吡格雷原药的批内、批间精密度RSD均小于9.4％,MP-AM的批内、批间精密度RSD均小于11.4％,CCAM的批内、批间变异均小于9.7％.内标氯雷他定的回收率分别为96.7％和66.7％.稳定性试验中,在各种贮存条件下氯吡格雷、MP-AM和CCAM均稳定性良好.CCAM生成的酶促反应动力学参数Km值为(15.86±1.83) μmol·L-1,Vmax值为(620.2-19.74) pmol·min-1·mg-1,Clint值为(39.15±2.06)μμL ·min-1·mg-1;AM生成开始随着底物浓度的增加而增加,在底物浓度为20 μmol·L-1时其生成量达到大,随后随着底物浓度的增加其生成量反而降低.结论:所建立的测定方法操作简便快速,重复性好,特异性强,灵敏度高,可用于肝微粒体孵育体系中氯吡格雷及其AM和CCAM药物浓度的测定.
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阳离子色谱柱-HPLC法测定人血浆中氯氮平及去甲氯氮平浓度
目的:建立同时测定人血浆中氯氮平及去甲氯氮平浓度的阳离子色谱柱-HPLC法.方法:用强阳离子交换色谱柱-HPLC测定人血浆中氯氮平及去甲氯氮平浓度,色谱柱为强阳离子交换色谱柱(4.6 mm×100 mm,5μm),流动相为乙腈-0.01 mol·L-1磷酸铵溶液(pH 5.1)(60:40),流速为1.2 mL· min-1,紫外检测波长为257 nm,以AF2672为内标,含氯氮平及去甲氯氮平的血样经C8固相小柱萃取后进样.结果:阳离子色谱柱-HPLC测得氯氮平、去甲氯氮平的色谱峰峰形对称、无内外源性物质干扰,检测结果稳定、可靠、重复性好;通过改变流动相pH易于调整各化合物保留时间,同时去除空白血浆干扰;固相萃取前处理简单、省时且萃取回收率较高.氯氮平及去甲氯氮平浓度在50.4 ～ 990 ng·mL-范围内线性关系良好;氯氮平及去甲氯氮平低(50.4 ng· mL-1)、中(396 ng· mL-1)、高(990 ng· mL-1)3个浓度的萃取回收率均大于91％,日内和日间RSD均小于4％(n=5).结论:阳离子色谱柱-HPLC法测定人血浆中氯氮平及去甲氯氮平浓度,色谱峰峰形对称,保留时间适宜且无杂质干扰,适用于临床氯氮平及去甲氯氮平血药浓度监测和药动学研究.
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单硝酸异山梨酯胶囊含量与溶出度的测定
单硝酸异山梨酯(5-ISMN)是抗心肌缺血药物硝酸异山梨酯(ISMN)体内主要活性代谢产物,是目前硝酸酯类药物中较有前途的品种之一[1].其胶囊含量与含量均匀度测定有HPLC法[2].作者采用小杯法溶出[3],HPLC外标法检测,建立了单硝酸异山梨酯胶囊的溶出度测定方法,分离效果好,操作简便、准确.
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维生素D减少移植物抗宿主病
维生素D做为一种类固醇类激素，在体内以其活性代谢产物1,25-二羟基维生素D3[l,25(OH)2D3]发挥生物学效应。它除在体内对钙磷的代谢有调节作用外，尚具有促细胞分化、调节免疫作用，与造血干细胞移植后免疫调节及重建、移植物抗宿主病发生及预后密切相关。
