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间充质干细胞成脂分化过程中SREBP-1对SIRT1的调控
目的:研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSC)成脂分化过程中转录因子SREBP-1对SIRT1的调控作用.方法:通过油红O染色鉴定BMMSC成脂分化;RT-PCR检测AP2、LPL、SREBF-1和SIRT1的mRNA转录水平;Western-blot检测SREBP-1表达水平;染色质免疫沉淀技术验证SREBP-1与SIRT1启动子之间的结合情况.结果:成脂诱导培养液中的BMMSC 14 d后被诱导成为成熟的脂肪细胞;RT-PCR显示AP2、LPL和SREBF-1、SIRT1在BMMSC成脂分化过程中表达上调;SREBP-1的蛋白水平也明显高表达;SREBP-1抗体免疫沉淀的基因组DNA成功扩增出SIRT1基因条带.结论:在BMMSC成脂分化过程中,SREBP-1能与SIRT1启动子区域特异性结合,可能参与SIRT1表达的调控.
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同型半胱氨酸对肝癌细胞基因mRNA表达的影响
目的观察同型半胱氨酸(Hcy)对人肝癌细胞株-7721细胞固醇调控元件结合蛋白-1(SREBP-1)基因mRNA表达的影响.方法用反转录多聚酶联反应法(RT-PCR)不同浓度(0.2,1和5 mmol/L)、不同时间(2,4,8,24 h),Hcy对7721细胞SREBP-1基因mRNA表达的影响作用.结果Hcy可使7721细胞SREBP-1基因mR-NA表达上调,在Hcy浓度为5 mmol/L,作用18 h SREBP-1的mRNA表达相对较高.结论Hcy使7721细胞SREBP-1基因mRNA表达上调.
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保肝消脂颗粒对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织SREBP-1、SREBP-2的影响
目的:通过保肝消脂颗粒对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝组SREBP -1、SREBP-2影响的研究,探讨保肝消脂颗粒治疗NAFLD的机理.方法:高脂饲料制备SD大鼠脂肪肝模型,将模型大鼠随机分为模型组,辛伐他汀组和保肝消脂颗粒高、中、低剂量组,并设空白组.治疗8周后,观察大鼠的一般情况,记录肝指数,采用酶联免疫法测定肝匀浆中SREBP -1、SREBP-2水平.结果:与正常对照组相比,造模组肝指数、肝组织中的SREBP-1、SREBP-2水平显著升高(P＜0.05),经保肝消脂颗粒治疗后,肝指数、肝匀浆组织中SREBP-1、SREBP-2水平明显下降,其中保肝消脂颗粒中、高剂量组与模型组差异具有显著性.结论:保肝消脂颗粒可有效地降低肝组织匀浆SREBP-1、SREBP-2水平,该作用可能是其治疗非酒精性脂肪肝的作用机理之一.
关键词： 保肝消脂颗粒：非酒精性脂肪肝 大鼠 SREBP-1 SREBP-2 -
依泽替米贝对泡沫细胞胆固醇转运的影响
目的:建立一种新的诱导巨噬细胞泡沫化的模型,并用这个模型探讨依泽替米贝对泡沫细胞胆固醇转运的影响.方法:用不同浓度(0,5,10,15,25,35,45和55μg/mL)的Chol:MβCD孵育巨噬细胞株RAW264.7细胞72 h;并选用45μg/mLChol:MβCD孵育RAW264.7细胞0,12,24,48,60,72 h.进一步在加入Chol:MβCD的同时加入ezetimibe和阳性对照药物lovastatin孵育.用HPLC检测细胞内游离胆固醇和总胆固醇含量,油红O染色观察细胞荷脂情况,用Western印迹法检测SREBP-1和caveolin-1蛋白的表达.结果:细胞内游离胆固醇、总胆固醇含量随Chol:MβCD浓度的增加,孵育时间的延长,呈浓度和时间依赖性地升高,分别在45μg/mL和72 h时达到峰值.Chol:MβCD 45μg/mL处理RAW264.7细胞72 h和用经典方法50μg/mL ox-LDL处理48 h,比较二种方法细胞内游离胆固醇、总胆固醇含量以及油红O染色显示的细胞内荷脂的情况均无明显差别.在加入45μg/mL的Chol:MβCD处理RAW264.7细胞的同时加入不同浓度依泽替米贝(3,10,30μmol/L)以及阳性对照药lovastatin,结果显示依泽替米贝和lovastatin均能显著降低细胞内胆固醇水平,且依泽替米贝的这一作用有剂量依赖性.Western印迹结果显示,Chol:MβCD诱导的模型组SREBP-1和caveolin-1的表达增加,而依泽替米贝和lovastatin能够逆转这种效应,且依泽替米贝的这一作用呈剂量依赖性.结论:Chol:MβCD能诱导RAW264.7细胞转化成为泡沫细胞.依泽替米贝能抑制Chol:MβCD诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞,其机制可能与通过下调SREBP-1表达进而下调caveolin-1的表达,抑制胆固醇的摄取有关.
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SREBP-1/小凹蛋白1介导烟酸姜黄素酯对ApoE-/-小鼠的抗动脉粥样硬化作用
目的 探寻烟酸姜黄素酯对动脉粥样硬化病变的作用及机制.方法 50只7周龄ApoE-/-小鼠,随机分为五组,即对照组、高脂组、辛伐他汀组[5 mg/(kg·d)]、烟酸姜黄素酯低剂量组[33 mg/(kg·d)]和烟酸姜黄素酯高剂量组(99 mg/(kg·d)],其中对照组给予普通饲料,其他组给予高脂饲料喂养.连续干预6周之后处死动物,检测血清中血脂水平;油红O染色法和HE染色法观察小鼠主动脉斑块及肝脏脂质蓄积;ELISA法检测血清中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;Western blot法检测小鼠肝脏中小凹蛋白1和SREBP-1的表达.结果 与对照组相比,高脂组血清中总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)降低,主动脉粥样硬化斑块增多.与高脂组相比,烟酸姜黄素酯组小鼠血清中的TC和LDLC明显降低,TNF-α和IL-6水平下降,而主动脉粥样硬化斑块减轻,肝脏脂质减少;烟酸姜黄素酯组肝脏小凹蛋白1蛋白表达高于高脂组,而SPEBP-1蛋白表达低于高脂组.结论 烟酸姜黄素酯预防性给药能抑制高脂喂养所致的ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块的形成;机制可能与减少SREBP-1、增加小凹蛋白1蛋白水平,调节肝脏脂质代谢及炎症反应有关.
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姜黄素对血管平滑肌细胞源性荷脂细胞胆固醇代谢及SREBP-1表达的影响
目的 观察姜黄素对血管平滑肌细胞源性荷脂细胞胆固醇代谢的影响,并初步探讨SREBP-1蛋白表达在其中的作用.方法 以血管平滑肌细胞源性荷脂细胞为模型,不同浓度姜黄素(12.5、25.0、50.0 μmol/L)作用于细胞24 h及25.0 μmol/L姜黄素不同时间(0、6、12、24、48 h)作用于细胞,高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇.游离胆固醇和胆固醇酯的含量.在SREBP-1蛋白抑制剂ALLN干预下,25.0 μmol/L姜黄素处理平滑肌细胞源性荷脂细胞24 h,Western印迹法检测SREBP-1蛋白的表达.结果 不同浓度姜黄素(12.5、25.0、50.0 μmol/L)作用于血管平滑肌细胞源性荷脂细胞24 h及25.0 μmol/L姜黄素不同时间(0、6、12、24、48 h)作用于血管平滑肌细胞源性荷脂细胞,细胞内总胆固醇,游离胆固醇和胆固醇酯含量呈现一定的剂量和时间依赖性下降趋势; 在SREBP-1蛋白抑制剂ALLN干预下,25.0 μmol/L姜黄素处理平滑肌细胞源性荷脂细胞24 h,SREBP-1表达下调,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量无明显变化.结论 姜黄素能引起血管平滑肌细胞源性荷脂细胞总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量下降,且这种作用跟SREBP-1蛋白的表达上调有一定关系.
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TNF-α促进HepG2肝细胞脂质积聚及其机制的初步研究
目的 探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是否能够促进肝细胞脂质积聚,并对其机制进行初步探讨.方法 将HepG2肝细胞分为空白对照组、单纯TNF-α组(TNF-α 2 ng/mL或20 ng/mL)、软脂酸组(软脂酸0.08 mmol/L或0.2 mmol/L)及联合组(TNF-α2 ng/mL联合软脂酸0.08 mmol/L、TNF-α 2 ng/mL联合软脂酸0.2 mmol/L、TNF-α 20 ng/mL联合软脂酸0.08 mmol/L、TNF-α 20 ng/mL联合软脂酸0.2 mmol/L),处理24h,应用化学酶促-比色法定量检测细胞内TG含量.进一步选取TNF-α 20 ng/mL和软脂酸0.08 mmol/L,通过油红O染色观察HepG2细胞内脂质积聚情况；实时荧光定量PCR和Western blot检测HepG2细胞SREBP-1、FAS、ACCα的表达水平.结果 ①单纯TNF-α组TG含量[TNF-α 2 ng/mL组(0.344±0.093) μg/μg、TNF-α20 ng/mL组(0.329±0.068) μg/μg]分别较空白对照组[(0.192 ±0.048) μg/μg]显著升高(P＜0.05)；联合组[TNF-α 2 ng/mL联合软脂酸0.08 mmol/L组(0.451±0.096) μg/μg、TNF-α 2 ng/mL联合软脂酸0.2 mmol/L组(0.821 ±0.257) μg/μg、TNF-α 20 ng/mL联合软脂酸0.08 mmol/L组(1.032±0.286) μg/μg、TNF-α 20 ng/mL联合软脂酸0.2 mmol/L组(2.134±1.049)μg/μg]分别较软脂酸组[软脂酸0.08 mmol/L 组(0.247±0.069) μg/μg、软脂酸0.2 mmol/L组(0.341 ±0.031) μg/μg]显著升高(P＜0.05)；②油红0染色进一步显示,TNF-α促进肝细胞内脂质积聚.③实时荧光定量PCR和Western blot检测结果显示单纯TNF-α组与空白对照组相比,HepG2细胞SREBP-1、FAS、ACCα的表达均增加(P＜0.05)；联合组与软脂酸组相比,肝细胞内SREBP-1、FAS、ACCα的表达水平明显上调(P＜0.05).结论 TNF-α促进HepG2肝细胞内脂质积聚,增加SREBP-1、FAS、ACC α的表达.
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芪茵颗粒对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织SREBP-1、SREBP-2的影响
目的 探讨芪茵颗粒对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠肝组织中固醇调节元件蛋白1(SREBP-1)、固醇调节元件蛋白2(SREBP-2)表达的影响及作用机制.方法 雄性SD大鼠72只,随机分成空白对照组、模型组、芪茵颗粒低、中、高剂量组和阳性药组硫普罗宁组,每组12只.除空白对照组正常进食、自由饮水外,其余5组大鼠予高脂乳剂进行灌胃,每日1次,共10 w,造模成功后分别用芪茵颗粒低、中、高剂量及硫普罗宁灌胃治疗,共10w.观察大鼠的一般情况,记录各组大鼠体质量和肝指数,光镜观察肝脏病理组织学变化,酶联免疫法测定肝匀浆中SREBP-1、SREBP-2的含量.结果 (1)芪茵颗粒低、中、高剂量组治疗前、后大鼠体质量增长的速度明显低于模型组大鼠治疗前、后体质量的增长(P＜0.05).与模型组相比,芪茵颗粒中、高剂量组治疗后的体质量明显减少(P＜0.05).与空白对照组相比,模型组肝指数明显增高(P＜0.05).治疗后芪茵颗粒高、中、低剂量组肝指数与模型组相比均降低(P＜0.05);(2)模型组大鼠肝脏NAS积分与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).与模型组相比,芪茵颗粒高、中、低剂量组及硫普罗宁组均能不同程度的降低肝脏NAS积分;(3)与空白对照组比较,模型组、芪茵颗粒高、中、低剂量组及硫普罗宁组SREBP-1、SREBP-2含量均显著升高(P＜0.05);与模型组比较,芪茵颗粒高、中、低剂量组及硫普罗宁组SREBP-1、SREBP-2含量均明显降低(P＜0.05);与硫普罗宁组比较,芪茵颗粒高、中剂量组SREBP-1、SREBP-2含量明显降低(P＜0.05).结论 芪茵颗粒可以控制NAFLD大鼠体质量增长,显著改善NAFLD大鼠肝指数和肝组织脂肪变性,有效降低肝组织匀浆中SREBP-1、SREBP-2的水平,从而发挥NAFLD的治疗作用.
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SREBP-1及其抑制剂调节肿瘤代谢的研究进展
脂类作为三大营养物质之一,参与能量的供应和储存、细胞的构建和作为活性分子参与细胞生命活动.脂类代谢异常是肿瘤细胞的重要特征之一,主要表现为脂肪酸从头合成及氧化代谢活跃,这些改变与肿瘤信号通路增强,相关代谢酶改变等密切相关.目前,脂代谢通路中相关酶及转录因子成为肿瘤治疗的潜在药物靶点.SREBP-1是细胞内调控脂类代谢的关键转录因子,主要调控胆固醇和脂肪酸合成中关键酶基因的表达,调节脂质新生.SREBP-1及其调控的脂肪酸合成途径通常在正常组织和细胞中的表达和活性较低,在肿瘤细胞中,SREBP-1被激活,其下游基因的表达也升高,在加快胞内脂肪酸和胆固醇合成的同时,还通过细胞内各信号通路影响肿瘤细胞脂代谢、糖代谢以及氨基酸代谢,为维持肿瘤细胞的增殖和转移提供额外的能源和物质.运用遗传和药理手段抑制肿瘤细胞中SREBP-1的表达和活化,可显著抑制体内和体外多种肿瘤细胞的增殖和迁移.因此,SREBP-1将是一个有潜力的针对肿瘤细胞脂代谢的肿瘤治疗靶标.本文综述了SREBP-1在肿瘤中的异常表达对肿瘤信号通路和物质代谢的影响以及SREBP-1抑制剂在肿瘤中的研究进展.
关键词： SREBP-1 SREBP-1抑制剂 脂代谢 信号通路 肿瘤
