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细粒棘球绦虫转酮醇酶生物信息学分析
目的 利用生物信息学技术对EgTK基因编码蛋白的结构和功能进行预测和分析. 方法 利用ExPASy系统的ProtParam、ProtScale、SignalP、SOMPA程序与SubLoc v1.0、DNAStar、IEDB、SYPEITHI、Phyre2等生物信息学软件分析EgTK的理化性质、抗原表位、跨膜区、二、三级结构等. 结果 EgTK基因由7个外显子,6个内含子构成,CDS长度为1 878 bp,编码625个氨基酸,分子式为C3015H4791N829O900S22,分子质量为67.76 ku;为跨膜蛋白,位于细胞质,二级结构主要以α螺旋、无规则卷曲为主.EgTK有16个潜在的B细胞线性表位,11个CTL细胞表位,13个Th细胞表位;EgTK三级结构与人类转酮醇酶相似性为97％;经多重比对,除去两端多余序列,共有473个氨基酸残基参与比对,发现195个变异位点、123简约性信息位点、72单态突变位点. 结论 生物信息学技术分析EgTK蛋白存在多个B、T细胞表位,具有良好的免疫原性,可为该蛋白的基因克隆、表达等提供理论依据.
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TKTL1在恶性肿瘤中的研究进展
在人类基因组中至今已经发现了1种转酮醇酶(TKT)基因和2种TKT类似基因(TKTL1和TKTL2).自从2005年Coy提出TKTL1基因和蛋白在恶性肿瘤中高表达后,人们便对TKTL1与肿瘤的关系进行了一系列基础和临床水平的研究.尽管TKTL1在肿瘤发生、发展中的生化基础和作用方式仍未被充分阐述,但TKTL1的高表达确实对恶性肿瘤具有特异性的正向促进作用.
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转酮醇酶活性下降参与硫胺素缺乏导致的海马齿状回颗粒细胞下层神经发生损伤的研究论文简介
我们前期的研究发现,硫胺素缺乏将显著损害与学习功能有关的海马齿状回颗粒细胞下层神经发生(以下简称海马神经发生)功能[1],其病理损害机制尚不清楚.
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补充烟酰胺与硫胺素对肥胖大鼠体重和能量代谢的影响
目的 观察硫胺素和烟酰胺对高脂饲料诱导的肥胖大鼠能量代谢酶活性的影响.方法 采用预防肥胖模型法,2×2析因设计分为4组:高脂对照组(F0),高脂+硫胺素(F1),高脂+烟酰胺(F2),高脂+硫胺素+烟酰胺(F3),每组大鼠12只,高脂饲料喂养;同时每天给予硫胺素100mg/kg bw、烟酰胺250mg/kg bw灌胃,F0组自来水灌胃;设正常对照组(C) 12只,普通饲料喂养,自来水灌胃,15w后处死大鼠,检测干预前后红细胞能量代谢酶活性. 结果 经15w喂养后,F0组大鼠体重比C组平均增加了15.7％;而F2及F3组与F0相比,体重分别降低了35.0％和30.0％(P＜0.05);比C组大鼠平均体重分别下降了22.8％和17.0％(P＜0.05);而F组大鼠体重未见明显降低(P＞0.05).红细胞能量代谢酶结果显示:与F0组大鼠相比,C组红细胞转酮醇酶活力系数(ETKAC)降低了86.55％,Na+-K+-ATPase活性升高了40.54％;F1、F2及F3组,ETKAC分别降低了87.89％、95.07％和86.25％,转酮醇酶(TK)活性显著升高(P＜0.05);Na+-K+-ATPase活性分别升高了49.55％、122.17％和57.84％(P＜0.05).结论 烟酰胺补充可抑制大鼠体重增长,而硫胺素作用不明显;但二者均可使TK、Na+-K+-ATPase的活性增强,影响机体能量代谢.
关键词： 硫胺素 烟酰胺 转酮醇酶 Na+-K+-ATP酶 肥胖大鼠 -
韦尼克脑病脑区选择性损害与转酮醇酶活性下降相关的实验研究
目的:研究硫胺素缺乏时转酮醇酶(TK)及其他硫胺素相关酶活性的改变,探讨韦尼克脑病脑区选择性损害的病理机制.方法:将雄性C57BL/6小鼠分为正常饲料对照组及硫胺素剥夺(TD)饲料组,硫胺素剥夺饲料组分为9 d组和14 d组,每组12只动物.实验结束后将动物处死取脑,检测TK、丙酮酸脱氢酶(PDH)、α-酮戊二酸脱氢酶(KGDH),及磷酸戊糖旁路关键酶6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)活性,测定磷酸戊糖旁路产物辅酶Ⅱ(NADPH及NADP+)的含量.结果:硫胺素缺乏显著降低小鼠脑TK活性(P<0.05),但对PDH、KGDH活性未产生显著影响,且早期海马TK活性显著性降低,皮层TK活性无明显下降,海马G6PD活性有上升趋势但无统计学意义,脑NADPH合成显著下降.结论:转酮醇酶活性下降及其相关的磷酸戊糖代谢旁路功能障碍参与了韦尼克脑病中线脑区选择性损害的病理机制.
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转酮醇酶在肝癌中的表达及临床意义
目的:研究转酮醇酶基因家族在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中的表达及其与临床病理特征之间的相关性.方法:检测42 例HCC组织及对应癌旁组织中转酮醇酶活性;采用RT-PCR法检测转酮醇酶基因家族各成员[转酮醇酶(transketolase, TKT)基因、转酮醇酶样基因1(transketolase-like1, TKTL1)和转酮醇酶样基因2(transketolase-like2, TKTL 2)] mRNA在HCC及癌旁组织中的表达,并研究其与临床病理特征之间的相关性.结果: HCC组织中的转酮醇酶活性明显高于癌旁组织(P＜0.05);TKTL1 mRNA的阳性表达率明显高于TKT和TKTL 2 mRNA的阳性表达率(P＜0.05),HCC中TKTL1 mRNA的表达率及表达量均明显高于癌旁组织(P＜0.05),且TKTL1 mRNA的表达同肿瘤分化程度,是否有静脉癌栓,肝内有无卫星灶以及5年生存情况有关(P＜0.05).结论:转酮醇酶在HCC的发生发展中起重要作用,而TKTL 1 mRNA的高表达是HCC转酮醇酶活性增高的主要原因.HCC中TKTL1 mRNA的高表达预示着肝癌的分化差,易于转移以及预后不佳.
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靶向转酮醇酶样基因1 siRNA表达载体的构建及鉴定
目的 构建针对转酮醇酶样基因1(TKTL 1)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体并检测其沉默效应.方法 采用人U6 SnRNA启动子,分别把被9 bp序列间隔的19 bp长短的TKTL1靶序列的反向重复序列,置于pEGFP-C1-U6质粒载体中,构建成TKTL1短发央环RNA,产生重组质粒pEGFP-C1-U6/TKTL1,分别用PstⅠ和SalⅠ酶切鉴定及测序分析,并将重组质粒转染人结肠癌细胞株LoVo,通过RT-PCR检测TKTL1基因表达水平的变化.结果 酶切鉴定与DNA测序分析证明,TKTL1基因的siRNA表达载体构建正确,RT-PCR结果表明转染重组质粒的LoVo细胞TKTL1基因的表达水平明显降低.结论 成功构建了针对TKTL1基因的siRNA表达载体,转染LoVo细胞后可显著抑制TKTL1基因表达.
关键词： siRNA 转酮醇酶 转酮醇酶样基因1 人结肠癌细胞株LoVo -
细粒棘球绦虫转酮醇酶克隆表达及免疫性分析
目的 通过原核表达获得细粒棘球绦虫转酮醇酶(TK)表达产物,分析其作为棘球蚴病诊断抗原分子的价值.方法 PCR扩增TK基因,克隆至原核载体pMD19-EgTK,随后亚克隆至表达载体pET-28a,构建目的基因TK原核表达质粒pET-28a(+)-EgTK,转入大肠埃希菌BL21,分离纯化蛋白,经SDS-PAGE、Western blotting鉴定后,收集细粒棘球蚴病(CE组)、多房棘球蚴病(AE组)患者及健康人(健康组)血清,以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测重组蛋白作为诊断抗原的价值.结果 成功构建pET-28a(+)-EgTK质粒,经SDS-PAGE和Western blotting分析,EgTK蛋白在70 kDa处出现条带,与理论值一致.ELISA显示,CE组、AE组和健康组血清反应吸光度A450值间差异有统计学意义(F=44.47,P<0.01), CE组(1.46±0.41)、AE组A450值(1.28±0.29)高于健康组(0.66±0.23)(P<0.05),但CE组和AE组间A450值差异无统计学意义(P>0.05).结论 重组TK分子可较好地区分棘球蚴病患者和非棘球蚴病患者,但无法区分细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者.
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干扰转酮醇酶的短发卡RNA表达载体的构建与筛选
目的 筛选出干扰小鼠转酮醇酶(TK)的短发卡RNA(shRNA)表达载体.方法 针对TK基因序列设计4条TK干扰序列:hMGFP-shRNA1、hMGFP-shRNA2、hMGFP-shRNA3、hMGFP-shRNA4,Pst Ⅰ酶切鉴定其序列.然后利用质粒转染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6,用逆转录-聚合酶链式反应和酶活性方法检测转染TK shRNA后Hepa1-6细胞内TK mRNA和蛋白表达变化.结果 经酶切凝胶电泳证实shRNA载体构建正确,质粒筛选实验表明hMGFP-shRNA1质粒对TK基因的抑制作用强.结论 成功构建表达靶向TK的shRNA重组质粒载体.
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转酮醇酶1在人结肠癌细胞株LoVo增殖中的作用
目的 探讨转酮醇酶1(TKTL1)在体外培养的人类结肠癌细胞株(LoVo)生长增殖中的作用.方法 构建针对TKTL1 mRNA 的小干扰RNA(siRNA)质粒,将该质粒转染LoVo细胞;采用实时定量RT-PCR检测转染前后LoVo细胞转酮醇酶基因家族中转酮醇酶(TKT)、TKTL1、转酮醇酶2(TKTL2) mRNA表达水平的变化,通过流式细胞术和MTT法检测转染前后LoVo细胞周期和细胞增殖的改变.结果 转染组(携带有pEGFP-C1-U6/TKTL1)、质粒对照组(携带有pEGFP-C1-U6/UC)和未转染组(未转染细胞)中TKT和TKTL2 mRNA的表达水平差异无显著性意义(P>0.05).转染组细胞中TKTL1的表达水平与质粒对照组和未转染组相比,明显下调,且转染组LoVo细胞总转酮醇酶活性明显下降,细胞增殖明显被抑制,LoVo细胞被阻滞在G0/G1期.结论 TKTL1在人类结肠癌细胞(LoVo细胞系)的生长增殖中起重要作用,TKTL1可能成为肿瘤治疗的新靶点.
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tktl1在肝细胞肝癌中的表达及临床意义
目的:研究转酮醇酶样基因1(tktl1)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其与临床病理的关系.方法:RT-PCR法检测转酮醇酶基因家族各成员(tkt、tktl1、tktl2)mRNA在42例HCC及癌旁组织中的表达并研究其与临床病理参数间的关系.结果:HCC组织中tktl1 阳性表达率明显高于tkt和tktl2的阳性表达率 (P＜0.05).tktl1在HCC中的阳性表达率明显高于癌旁组织(P＜0.05);而 tkt和tktl2阳性表达率在肝癌及癌旁组织间无明显差异(P＞0.05). HCC中tktl1的高表达同肿瘤分化程度,静脉癌栓,CLIP评分有关 (P＜0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、肝内及淋巴转移、AFP水平无关(P＞0.05).结论:tktl1与HCC的发生发展有关,影响肝癌的分化、转移及患者预后,有望成为HCC治疗的新靶点.
