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脱钙处理对骨及其软组织免疫细胞化学染色的影响
目的探讨低温微波硝酸脱钙方法对骨及软组织抗原活性的影响.方法根据实验条件分为4组:低温微波10℃组(Ⅰ组);冰箱4℃(Ⅱ组);室温20℃(Ⅲ组);及温箱37℃(Ⅳ组).分别使用5%硝酸、甲酸-甲醛混合液、20%甲酸液、Jenkins液、10%乙烯二胺四乙酸钠(EDTA)作为脱钙液.应用免疫组织化学LSAB染色和图像分析技术检测ANP,5-HT,S-100,NF,GFAP和Vimentin的染色结果.结果以硝酸作为脱钙剂时,Ⅰ组(1.89±0.97)阳性细胞的光密度值与Ⅱ组(1.81±1.02)相近,均显著高于Ⅲ(1.03±0.85)、Ⅳ(0.76±0.85)组;脱钙液的温度越高,阳性细胞的光密度值越低,脱钙时间越短.低温微波硝酸与各种脱钙液的染色结果之间无明显差异,但脱钙时间显著缩短.结论低温微波硝酸脱钙能够在较短时间内获得满意的染色效果.
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超声处理在含骨或沙砾体病理标本脱钙中的应用
病理制片是确诊含有骨化组织及沙砾体组织疾病的主要技术手段之一.常规方法脱钙需4～10 h,超声处理可使脱钙时间大大缩短,只需25～60 min.我们以对脑膜瘤组织进行脱钙为例,对应用超声处理进行脱钙方法概述如下.
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骨和牙切片的甲酸氯化铝脱钙液及脱钙方法
骨和牙体组织非常坚硬,将其制成几微米薄切片难度较大.常用的方法是先脱钙,使组织变软后再切片,所以脱钙是非常关键的技术.
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介绍一种快速脱钙法
在病理诊断制片时,骨组织标本需先进行繁琐的常规脱钙.为提高工作效率,我们摸索出一种快速脱钙方法,既不破坏骨组织结构、不影响染色效果,又简化了步骤、缩短了时间.介绍如下.
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骨及钙化组织切片的复方脱钙液的配制及脱钙方法
骨及钙化组织非常坚硬,将其制成几微米薄切片难度较大.常用的方法是先脱钙,使组织变软后再切片,所以脱钙是非常关键的技术.目前使用的脱钙剂多为无机强酸类制剂,虽脱钙效果较好,但常造成组织形态,特别是细胞结构的破坏,影响骨组织形态观察和研究.为此,我们使用复方脱钙液脱钙,不仅能够保持组织形态良好,亦能用于特殊染色及切片,现介绍如下:
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微波辐射下不同种脱钙液对病理切片骨组织结构的影响
骨组织必须经过脱钙处理才能制作切片.传统的脱钙方法脱钙效果好,但易引起组织结构的严重破坏,选择适当的脱钙液与骨组织的制片质量有密切关系.本文作者选择4种不同脱钙液进行比较研究,现报道如下.
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介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用
骨、含有骨质的肿瘤及钙化组织和骨髓穿刺组织很坚硬,将其制成几微米切片相当困难,常用的方法是先经脱钙处理,使其变软后再切片,所以脱钙是这类组织制作病理切片的关键技术.脱钙液和脱钙方法很多,传统方法脱钙一般用硝酸,其效果不稳定,骨组织脱钙不足,切片破碎甚至切不成片且极易脱片;骨组织脱钙过度,破坏组织的形态结构和细胞成分的性质,造成细胞核不着色或着色很浅,从而影响对病变组织的病理诊断.已有学者对此进行了改进[1~4], 但目前尚无公认的理想方法.为此我们在工作中反复摸索,结合Plank-Rycho脱钙液总结出一套改良的脱钙液并获得了满意效果,现将此方法介绍如下.
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EDTA脱钙方法的实验观察
骨骼组织是一种坚硬的结缔组织,有机成分类骨质和无机成分骨盐2种成分紧密结合形成骨基质,使其变得十分坚硬,不能直接制片.我们实验工作中要获得一张优质的骨切片,均需脱钙处理,使钙盐溶解,组织变软后才能制作切片,然后进行HE染色、特殊染色和免疫组化等观察.在诸多脱钙方法中,笔者在实践中认为化学螯合物(EDTA)脱钙法是一种较为理想、可行的方法,特别适合科学研究.本实验在以前工作基础上[1,2],选用骨质疏松模型大鼠的股骨作为研究对象,以HE和TNF-α免疫组化染色作为考察指标,以浓度、温度和时间作为考察因素,对EDTA脱钙方法进行了L4(23)正交实验,现报道如下.
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骨组织脱钙方法探讨
目的 比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力和脱钙后 HE染色效果,寻找一种佳的骨组织脱钙方法.方法 通过查阅文献资料,把文献报道的3种相对较理想的脱钙液用于临床病理骨组织脱钙中,对比3种脱钙液对骨和骨髓组织常规病理切片质量和 HE染色效果.结果 3种脱钙液脱钙时间的比较,甲酸-甲醛脱钙液>改良Jenkins脱钙液>硝酸-甲醛脱钙液.3种脱钙液脱钙效果的比较,硝酸-甲醛脱钙液>改良Jen-kins脱钙液>甲酸-甲醛脱钙液.3种脱钙液对组织损伤的比较,硝酸-甲醛脱钙液>甲酸-甲醛脱钙液>改良Jenkins脱钙液.结论 改良Jenkins脱钙液对组织损伤较小,脱钙效果充分,适当缩短脱钙时间,切片染色质量上乘,可以作为一种相对理想的骨组织脱钙剂推广应用.
关键词： 骨组织 脱钙方法 改良Jenkins脱钙液 硝酸 甲酸 -
不同脱钙方法对骨组织切片细胞内mRNA原位杂交表达效果的影响
目的探讨不同脱钙方法对骨组织切片细胞内mRNA原位杂交表达效果的影响,为研究骨细胞内胶原蛋白等基因的表达效果与骨细胞发育以及骨质疏松的关系提供部分理论依据.方法胶原蛋白-Ⅱ-DNA制备mRNA探针,原位杂交骨组织生长板细胞,观察胶原蛋白-Ⅱ原位杂交表达效果.结果几种不同脱钙方法中,10%EDTA+ATM溶液对骨组织切片细胞内RNA酶的抑制效果好,胶原蛋白-Ⅱ原位杂交表达效果强.结论应用10%EDTA+ATM溶液脱钙能有效防止骨组织细胞内RNA的降解也是提高原位杂交表达效果的方法之一.
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比较四种脱钙法对人牙免疫组化染色抗原性的影响
目的:比较四种脱钙方法对人牙牙体组织免疫组化染色抗原活性的影响.方法:40颗人牙随机分为四组,分别在微波、超声、微波-超声联合及常温下用10％乙二胺四乙酸二钠溶液(EDTA-2Na)脱钙.应用SABC免疫组化染色技术检测Ⅰ型胶原蛋白、纤维粘连蛋白在各组牙体组织中的表达情况.结果:在微波-超声联合组脱钙所需时间短,且免疫组化染色效果好□P＜0.05口微波组脱钙时间较超声组略短,但二者免疫组化染色效果无显著差异(P＞0.05).常温组所需脱钙时间长且免疫组化染色效果差.结论:微波-超声联合法脱钙速度较快,免疫组化染色效果较好,是一种较为理想的脱钙方法.
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一种骨组织快速脱钙方法
骨组织是一种坚硬的结缔组织,骨基质中有机成分凝胶和无机成分骨盐两种成分紧密结合,使骨组织十分坚硬.为制作切片带来许多困难,而传统的骨组织脱钙法因为时间长、步骤繁琐而不能适应常规工作的需要.笔者在实践中对150例骨组织脱钙进行了实验与改进,选择出较为理想的一种快速脱钙方法,介绍如下.1 材料与方法1.1 材料本科室近5年来送检的骨组织标本.试剂配制:甲液:蒸馏水70ml,磷酸氢二钠6g,磷酸二氢钠1g,浓盐酸(36%～38%)8ml,甲酸99%7ml混合待用.乙液:戊二醛25%15ml.
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4种脱钙法的效果及其对人牙Ⅰ型胶原免疫组化染色的影响
目的:比较微波、超声、微波超声联合、常温下对人牙的脱钙效果及其对Ⅰ型胶原蛋白免疫组化染色的影响.方法:40个牙随机分为4组,分别在微波、超声、微波超声联合、常温下用100 g/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)液脱钙.应用SABC免疫组化染色技术检测Ⅰ型胶原蛋白在各组牙体组织中的表达情况.结果:微波、超声、微波超声联合组均较常温组脱钙时间缩短;微波超声联合组脱钙所需时间少,且Ⅰ型胶原蛋白免疫组化染色效果好(P＜0.05);微波组脱钙时间较超声组略短,但二者免疫组化染色效果无显著差异(P＞0.05).常温组免疫组化染色结果差.结论:微波超声联合法脱钙速度较快,石蜡制片染色效果较好,是一种较为理想的脱钙方法.
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介绍一种改良快速病理组织脱钙法
对于临床送检的骨组织及钙化组织做病理切片,必须将骨组织脱去钙盐,才能制成切片.常规脱钙法一般需36-72小时,从组织脱钙到切片诊断需要较长时间.如果在较短时间里脱去钙盐且又能避免脱钙液对骨组织结构的影响,同时要制出组织结构清晰、完整的切片,这一直是我们病理同行探讨的问题,下面就我科自1997年以来总结的一种改良病理组织脱钙方法做一介绍.
