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内皮素家系的新成员--内皮素1-31
内皮素1-31(endothelins1-31,ETs1-31)是糜酶水解内皮素原产生的一种成熟内皮素,有ET-11 1-31、ET-21-31和ET-31-31三种异构体,目前已检测到ETs1-31分布于人、猴和仓鼠的粒细胞、肝脏、肺、气管、肾和肾上腺等组织.ETs1-31具有促细胞增殖、收缩平滑肌、升高平滑肌细胞游离Ca2+、引起炎性细胞趋化和致心律失常等生物学效应,也可经内皮素转换酶水解为ETs1-21而间接产生效应.ETs1-31很可能与支气管哮喘、先兆子痫、动脉粥样硬化和肾小球肾炎等疾病密切相关.
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内皮素受体拮抗剂的药理学与临床研究进展
1988年发现了内皮素(Endothelin, ET),ET有3种形式的异型体,分别称为ET-1、ET-2和ET-3.ET经内皮素转换酶,ECEs)作用而激活.激活的ET与其受体结合而发挥作用,ET受体分为ETA和ETB受体,ETB受体又分为ETB1和ETB2受体.ET-1是至今发现的强的缩血管物质,其缩血管作用是通过ETA和ETB2受体介导的,ETB1受体介导血管舒张作用.内皮素受体拮抗剂有BQ123为代表的肽类分子,在体内代谢快,口服生物利用度低,限制了它们的临床应用.因此,非肽类ET受体拮抗剂取得了重要进展,包括磺酰胺类、羟丁内酯类、芳基茚羧酸类与其它结构类.这一类药物有可能成为心血管系统(包括慢性心衰、心率失常、心室重构、高血压、脑溢血及蛛网膜下腔出血)重要药物,对肾脏、肺、肝脏疾病及外伤、烧伤等也可能产生良好的作用.ETA/B非选择性受体拮抗剂是否比选择性ETA受体拮抗剂更优越,尚有争论.选择性ETA/B2受体拮抗剂可能更为理想.国内对该类药物的药理与临床应用研究也取得了重要进展.
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糖尿病血管病变中内皮素转换酶及相关因子
内皮素转换酶(endothelin converting enzyme,ECE)是膜结合Ⅱ型金属蛋白酶,存在于各种细胞和组织中,是内皮素(endo-thelin,ET)生物合成的关键酶,对体内ET生物活性的调控起着极其重要的作用.ET是长效缩血管活性多肽,主要由血管内皮细胞合成,通过自分泌、旁分泌等方式在正常生理活动及某些疾病,尤其是与血管病变有关的疾病的发生、发展中发挥重要作用.
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壳聚糖纳米粒包裹反义内皮素转换酶核酸表达质粒与哮喘气道高反应性
背景：有研究报道体外实验环境下，反义内皮素核酸纳米载体经12-烷基化壳聚糖纳米粒包裹之后可以表达目标核酸，产生RNA干扰效应，达到有效抑制变应原诱导炎症因子内皮素过度生成的效果。目的：观察12-烷基化壳聚糖纳米粒包裹反义内皮素转换酶核酸表达质粒对哮喘模型小鼠气道高反应性的影响。方法：将40只Balb/c小鼠随机均分为4组，壳聚糖纳米组、生理盐水组及质粒组腹腔注射卵清蛋白致敏(0，14 d)、雾化吸入卵清蛋白激发(24，25，26 d)，诱导哮喘模型；对照组给予生理盐水致敏、激发。首次激发前24 h，对照组、壳聚糖纳米组、生理盐水组、质粒组分别经气道灌注生理盐水、包裹反义内皮素转换酶核酸的12-烷基化壳聚糖纳米粒、生理盐水及反义内皮素转换酶核酸。末次激发后48 h，检测小鼠气道反应性；28 d后，进行支气管肺泡灌洗液细胞学、肺组织病理学、脾细胞培养上清液细胞因子检测。结果与结论：与对照组比较，壳聚糖纳米组、生理盐水组、质粒组细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比、嗜酸性粒细胞绝对计数、白细胞介素4水平、内皮素水平及气道反应性均升高(P<0.05)，肺部炎症程度较重；壳聚糖纳米组上述指标均低于生理盐水组、质粒组(P<0.05)，炎症程度轻于生理盐水组、质粒组。表明12-烷基化壳聚糖纳米粒包裹反义内皮素转换酶核酸表达质粒可降低哮喘内皮素合成量，抑制气道高反应性。
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早期扩张型心肌病心室重构内皮素转换酶的活性及其mRNA表达水平变化
目的:探讨内皮素转换酶(ECE)在早期扩张型心肌病(DCM)心室重构中的变化,进一步研究DCM心室重构的发病机制. 方法:两肾一夹术制备早期DCM大鼠模型后,通过RT-PCR-半定量法观察ECE mRNA表达水平的变化,并测定ECE活性以了解其蛋白质水平的变化. 结果:早期DCM大鼠模型左室ECE mRNA表达水平为:1.25±0.37,ECE活性水平为:(58.3±9.1)pmol/L,二者均较正常对照组明显升高(P＜0.05). 结论:早期DCM大鼠模型左室心肌ECE活性及mRNA表达水平与正常对照组相比显著上调,提示ECE可能参与了心室重构的形成.
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非小细胞肺癌HGF和ECE的表达及其与淋巴结转移和预后的关系
目的:研究HGF与ECE蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表达的临床意义.方法:用免疫组织化学方法检测77例NSCLC组织中HGF与ECE的表达,分析其与吸烟史、肿瘤的大小、癌的组织学类型、组织分化程度、淋巴结转移和预后的关系.结果:77例NSCLC组织中HGF与ECE的阳性率分别为44%和45%.HGF与ECE的表达与淋巴结转移呈正相关(P分别为0.003和0.001,r分别为0.339和0.467),与临床分期、手术后生存期呈负相关(P＜0.05).NSCLC组织中HGF和ECE的表达呈正相关(P=0.000,r=0.501).HGF与ECE的表达与患者吸烟、肿瘤大小、癌组织学类型和组织分化程度无关(P＞0.05).结论:HGF与ECE蛋白的表达与NSCLC的淋巴结转移和预后密切相关,它的高表达提示非小细胞肺癌患者预后不良.
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内皮素及其受体蛋白家族在糖尿病大鼠视网膜中的表达
目的 探讨内皮素-1(ET-1)、ET-2、ET-3、内皮素受体A(ETRA)、ETRB和内皮素转换酶(ECE)在8周糖尿病SD大鼠视网膜中的表达.方法 采用限制性片段差异显示PCR(RFDD-PCR)技术建立正常和8周糖尿病大鼠视网膜基因差异表达谱,并以半定量RT-PCR和蛋白免疫印迹方法分别对两组间表达存在差异的6个基因(ET-1、ET-2、ET-3、ETRA、ETRB、ECE)的表达进行验证.结果 RFDD-PCR结果显示,糖尿病组ET-1、ET-2、ET-3、ETRA、ETRB和ECE表达上调.半定量RT-PCR结果和蛋白免疫印迹结果显示,6种基因和蛋白在糖尿病组的表达(相对光密度比值)高于正常组,表达差异具有统计学意义(P均＜0.05,P均＜0.01).结论 ET-1、ET-2、ET-3、ETRA、ETRB和ECE在糖尿病视网膜中呈高表达,提示这6种基因可能参与了糖尿病视网膜的发病过程.
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BigET-1类似物的内皮素转换酶活性的影响
目的探讨不同BigET-1类似物对内皮素转换酶(ECE)活性的影响、ECE对底物的作用机制,以寻找ECE 的抑制物.方法克隆人ECE的cDNA,将其亚克隆至表达载体,然后把该表达载体导入CHO-K1细胞内使其表达.将该ECE分别加入不同浓度的多种BigET-1类似物中,无BigET-1类似物的作为对照.ECE的活性则通过放免法直接测定ET-1的生成量而反映的.结果在多种BigET-1类似物中[Phe21]BigET-1(18-34)和[Ala31]BigET-1(18-34)以不同的形式抑制了ECE的活性,前者为竞争性抑制,其抑制常数Ki为(20.6±3.8)μmol/L;后者为非竞争性抑制,其抑制常数Ki为(35.6±8.1)μmol/L.结论 ECE能够识别其底物BigET-1的活性部位和C末端的2个区域,此2个区域也以不同的形式被该酶所识别.
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内皮素转换酶基因在急性脑梗死患者外周血中的表达及临床其意义
目的 观察急性脑梗死(ACI)患者血内皮素转换酶(ECE)mRNA的表达及其临床意义.方法 检测40例发病72h内的ACI患者及28名正常对照者血ECE mRNA表达值(半定量RT-PCR法)及内皮素(ET)-1含量,并对两者的关系及其与入院时欧洲卒中评分(ESS)、既往史、年龄、血糖、血脂的关系进行分析.结果 (1)ACI组和正常对照组血细胞ECE mRNA表达值分别为0.31±0.09、0.25±0.10,差异有统计学意义(f=2.46,P＜0.05);(2)ACI组血浆ET-1水平[(183.27±56.63)pg/ml]显著高于正常对照组[(156.47±34.24)pg/ml](t=2.23,P＜0.05);(3)正常对照组ECE mRNA表达值与血浆ET-1含量呈负相关(r=-0.452,P＜0.05),而ACI组两者无相关性(r=0.143,P＞0.05);(4)分别将ACI组伴与不伴高血压、糖尿病、脑卒中史患者的血ECE mRNA表达值、血浆ET-1含量进行比较,差异无统计学意义;(5)ACI组血ECEmRNA表达值、血浆ET-1含量与年龄、ESS、空腹血糖及血脂无相关性.结论 ACI患者血ECE mRNA表达上调,可能参与了ACI的发病机制;ET-1与ECE之间可能存在生理性下调和病理性上调;影响ECE mRNA表达的因素复杂多样,其与脑卒中常见危险因素的关系有待进一步研究.
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正常SD大鼠心血管系统内皮素转换酶表达水平及意义
目的:探讨正常SD大鼠心脏及血管(动脉、静脉)内皮素转换酶(Endothelin-converting Enzyme ECE)mRNA的分布.方法:半定量RT-PCR法检测组织中的ECE mRNA,同时以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldelyde-3-phosphate-dehydrogenase,GAPDH)作内参照.结果:正常SD大鼠心脏各部位及血管(动脉、静脉)ECE mRNA的相对含量(ECE/GAPDH)分别为:左房1.17±0.21,右房1.144±0.144,左室0.966±0.091,右室0.956±0.095,室间隔1.08±0.138,动脉0.742±0.174,静脉1.538±0.237,静脉含量高,动脉含量低,而心脏各部位心房比心室含量高.结论:正常SD大鼠心脏各部位及血管均有ECE mRNA的表达,与左室比较,静脉ECE mRNA的表达(P<0.01),左房右房亦较高,动脉含量低(P<0.05),而左室、右室、室间隔间无量著差异,由高到低的趋势为:静脉>左房≈右房>室间隔≈左室≈右室>动脉.
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内皮素转换酶--内皮素与动脉粥样硬化关系的研究进展
内皮素(endothelin, ET)是目前所知的强的长效缩血管活性多肽.主要由血管内皮细胞合成,其通过自分泌、旁分泌或内分泌等作用,在正常生理活动及某些疾病,尤其是血管病变有关疾病的发生、发展中起重要作用.内皮素转化酶(endothelin-converting enzyme, ECE)是ET生物合成的关键酶,在体内ET生物活性调节上起着极为重要的作用,组织ECE活性增加是心血管疾病的危险因素.动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是一种累及全身动脉系统疾病,与一些常见的心脑血管疾病关系密切,如原发性高血压、冠状动脉粥样硬化、急性心肌梗死、脑卒中和周围动脉阻塞综合征等.对其病变过程在分子水平上的了解,将有助于发现新的预防和治疗手段,以阻断和减缓AS的发展.本文就内皮素和内皮素转换酶的分子构成、作用与调节机制,以及在AS病理生理状态下变化与作用的新研究进展等作一综述如下.
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正常人及SD大鼠心脏和血管内皮素转换酶分布研究
目的了解正常人和大鼠心血管系统内皮素转换酶(ECE)及其mRNA的分布和表达.方法以3-磷酸谷胱甘肽脱氢酶(GAPDH)作为内参照,采用半定量RT-PCR法检测ECE mRNA表达,同时进行ECE活力测定.结果正常人心脏各部位及动脉ECE mRNA表达由高到低的顺序为:右房≌左房＞左室＞右室≌室间隔＞动脉,ECE的活性由高到低的顺序为:左房≌右房＞右室≌左室≌室间隔＞动脉.大鼠的分布规律与人基本一致.结论正常人和大鼠心脏各部分及动脉均存在ECE,ECE表达及活性以心房高,动脉低,心房高于心室.
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埃他卡林对人肺动脉内皮细胞内皮素系统的作用
目的 研究新型ATP敏感性钾通道(K_(ATP))开放剂埃他卡林(iptakalim,IPT)对人肺动脉内皮细胞内皮素(ET)系统的作用.方法 原代培养人肺动脉内皮细胞(HPAECs),分别加入不同浓度埃他卡林,共同孵育24 h后;应用放射免疫法测定各组细胞上清内皮素-1(ET-1)浓度的变化,同时用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法 检测各组细胞ET-1及内皮素转换酶(ECE)mRNA表达的变化. 结果 在IPT浓度为10~(-6) mol·L~(-1)及以上时,能够剂量依赖性地抑制HPAECs合成分泌ET-1,同时也降低ET-1 mRNA的表达量;在IPT浓度为10~(-7) mol·L~(-1)及以上时,能够剂量依赖性地降低ECE mRNA的表达量.结论 IPT通过抑制人肺动脉内皮细胞ET-1和 ECE mRNA的表达量,继而抑制内皮细胞合成分泌ET-1,可能成为较有前途的治疗肺动脉高压的有效药物.
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哮喘豚鼠内皮素-1及其基因表达和雷公藤内酯醇的影响
目的研究哮喘豚鼠肺组织中内皮素系统基因表达和雷公藤内酯醇(TP)的影响.方法放免法测定肺组织ET-1,逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测ET-1、ETA、ETB和ECE的mRNA表达量.结果①哮喘组各指标均有不同程度的升高.首次激发哮喘后,ET-1在4 h升高明显,而ET-1mRNA、ETAmRNA和ECEmRNA均在2 h升高明显,较对照组增加(P<0.01),ETBmRNA升高不明显.哮喘2 wk组除ECEmRNA外,各指标均增加(P<0.01,P<0.05).②较哮喘组,TP干预组在首次激发哮喘后,各指标即刻均有下降,但差异不显著,2～8 h后下降明显(P<0.01,P<0.05).干预2 wk组除ECEmRNA外各指标均低于哮喘2 wk组(P<0.01,P<0.05).结论哮喘时肺组织ECE、ET-1及其受体基因表达有不同程度的升高,TP抑制ET-1系统基因的表达.
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小青龙汤含药血清对ASMC ET-1分泌水平和ECE基因表达的影响
目的:进一步观察小青龙汤含药血清对ASMC ET-1分泌水平和ECE基因表达的影响.方法:实验分6组,正常组(10%正常对照组血清)、模型组(组胺加10%正常对照组血清)、小青龙汤高剂量组(组胺加10%小青龙汤高剂量组血清)、小青龙汤中剂量(组胺加10%小青龙汤中剂量组血清)、小青龙汤低剂量组(组胺加10%小青龙汤低剂量组血清)、地塞米松组(组胺加10%地塞米松组血清),每组8孔.采用ELISA法测定小青龙汤含药血清对ASMC ET-1分泌水平;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定ASMC内皮素转换酶(ECE)的基因表达.结果:与模型组比较,小青龙汤低剂量组含药血清对ASMCET-1分泌水平有显著性差异(P＜0.05);小青龙汤高、中剂量组及地塞米松组均有极显著性差异(P＜0.01).与模型组比较,小青龙汤低剂量含药血清对ASMC内皮素转换酶(ECE)基因表达有显著性差异(P＜0.05);小青龙汤高剂量组及地塞米松组均有极显著性差异(P＜0.01).结论:小青龙汤抑制哮喘大鼠平滑肌分泌ET-1是小青龙汤影响哮喘大鼠气道重建的途径之一.
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埃他卡林对低氧性肺动脉高压大鼠血浆内皮素-1及其基因表达的影响
目的 研究新型三磷酸酰苷敏感性钾(KATP)通道开放药埃他卡林(Ipt)对慢性低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠血浆内皮素-1(ET-1)浓度及其mRNA表达的影响.方法 将39只SD大鼠随机分为正常对照组、HPH组和Ipt处理组(对缺氧饲养的大鼠给予Ipt 1.5 mg·kg-1·d-1灌胃),后两组每天置于常压低氧舱中8 h,每周6 d.4周后放免法测定大鼠血浆ET-1浓度,逆转录多聚酶联反应(RT-PCR)法检测肺组织ET-1、内皮素转换酶(ECE)mRNA表达.结果 HPH组大鼠血浆ET-1浓度,肺组织ET-1 mRNA 、ECE mRNA均较正常对照组显著升高(均P＜0.01);与HPH组比较,Ipt处理组血浆ET-1浓度,肺组织ET-1 mRNA、ECE mRNA均显著下降(均P＜0.01).结论 Ipt可通过抑制ET-1,ECE mRNA表达,降低血浆ET-1浓度,干预HPH形成.
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内皮素与脑血管痉挛的机制及其治疗研究的新进展
蛛网膜下腔出血(SAH)导致的迟发性脑血管痉挛(CVS),是患者致死和致残的主要原因.内皮素(ET)是目前已知的作用强的血管收缩因子,在CVS发生发展过程中起重要作用.文章在介绍ET的生物合成及其受体的基础上,着重阐述ET和脑血管痉挛的基础、临床研究,针对ET治疗脑血管痉挛的策略如降低血ET水平、拮抗调控ET受体、内皮素转换酶抑制剂、基因治疗等方面的新进展.
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葡萄糖对血管内皮细胞的内皮素转换酶-1b表达的影响
目的探讨高浓度葡萄糖损伤血管内皮细胞及其对内皮素转换酶-1b表达的影响.方法将人脐静脉内皮细胞株ECV304分别培养在含0 mmol/L (对照组)、5.5 mmol/L (处理组1)、11.1 mmol/L (处理组2)、22 mmol/L (处理组3)、33 mmol/L (处理组4)葡糖的培养基中.经葡萄糖培养24 h后,噻唑蓝法测定细胞增殖活性,硝酸还原酶法测定培养上清液中一氧化氮浓度及比色法检测培养上清液中丙二醛的浓度,逆转录聚合酶链反应法检测细胞中内皮素转换酶-1b mRNA.结果发现随着葡萄糖浓度的增加,内皮胞增殖呈浓度依赖性抑制;一氧化氮浓度呈浓度依赖性增加;丙二醛浓度呈浓度依赖性增加;内皮素转换酶-1b mRNA的表达呈浓度依赖性增加.结论高浓度葡萄糖可损伤内皮细胞并诱导血管内皮细胞的内皮素转换酶-1b mRNA表达,此变化可能与糖尿病患者血糖致血管病变有关.
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豚鼠哮喘模型和哮喘患者气管上皮细胞内皮素-1和内皮素转化酶mRNA表达
目的通过逆转录-DNA聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测豚鼠哮喘模型气管上皮内皮素-1(ET-1)mRNA表达,检测哮喘患者气管上皮内皮素-1(ET-1)和内皮素转换酶(ECE) mRNA表达.方法 (1)动物实验部分:Hartley株豚鼠用卵蛋白腹腔注射致敏,雾化吸入激发,提取气管上皮细胞RNA,逆转录将RNA逆转为cDNA,PCR扩增DNA.(2)临床实验部分:设对照组和哮喘组.一步法提取总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增β-actin片段、ET-1片段和ECE片段.PCR产物的鉴定和半定量.计算ET-1/β-actin值和ECE/β-actin值.结果 (1)动物模型检测:在电泳缓冲液内,紫外灯下可见ET-1为333bp左右条带,与标记DNA条带相对应.(2)临床实验:哮喘组ET-1mRNA表达量明显高于对照组(P＜0.05).哮喘组ECEmRNA表达量与对照组比较差异无显著性(P＞0.05).结论 RT-PCR技术检测出卵蛋白致敏激发的豚鼠气管上皮细胞ET-1mRNA表达.哮喘患者支气管粘膜ET-1mRNA表达明显增高,而ECEmRNA表达量与对照组比较差异无显著性.
