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鸡胚发育过程敲减神经型钙黏蛋白表达对视顶盖神经元迁移及神经丝蛋白的影响
目的 阐明鸡胚发育过程神经型钙黏蛋白(N-cadherin)在中枢神经系统中的作用及其对神经丝蛋白(NF)表达的影响.方法 鸡胚正常培养到第3天(E3),采用鸡胚带壳开窗培养方法,取出3～4ml蛋清,开窗培养至E5,将N-cadherin干扰载体pGPU6-GFP-neo-N-cadherin-shRNA通过活体电转基因技术导入视顶盖,电转后继续培养到E12,每组收集3个胚胎,取材,固定,包埋,切片后进行荧光免疫组织化学分析相关蛋白的表达.结果 鸡胚发育过程,敲减N-cadherin表达影响神经元迁移,被敲减的细胞主要停留在室管膜区,在N-cadherin受到抑制表达的区域,NF的表达也受到抑制,其表达明显减弱.结论 N-cadherin的抑制表达可导致神经元的迁移发生紊乱,影响NF的表达.
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小鼠神经母细胞瘤细胞中神经型钙黏蛋白超表达对突起形成及连环蛋白表达的影响
目的 探讨神经型钙黏蛋白(N-cadherin)调控连环蛋白(catenin)对小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a)形态的影响.方法 构建鼠源的N-cadherin融合蛋白超表达载体,利用脂质体转染的方法将空载体pCAG-MCS-EGFP和超表达载体pCAG-N-Cad-EGFP分别转染至N2a细胞,作为对照组和实验组;细胞划痕和黏附实验检测N-cadherin超表达对N2a细胞迁移和黏附的影响,免疫荧光检测N-cadherin超表达对N2a细胞形态的影响,并结合Western blotting检测连环蛋白家族的表达情况.结果 与对照组相比,N-cadherin超表达促进细胞突起的形成,使得N2a细胞突起增多和伸长;N-cadherin超表达增强了黏附性而抑制了细胞的迁移能力;N-cadherin超表达使得细胞内连环蛋白家族中α-catenin、β-catenin和p120蛋白表达均显著上升(P＜0.05),而γ-catenin表达下降但差异不显著(P＞0.05);另外,N-cadherin超表达的细胞有明显的聚集现象.结论 N-cadherin超表达促进N2a细胞突起形成,增强细胞的黏附性从而抑制细胞的迁移能力,调控连环蛋白家族成员的表达并促使细胞聚集.
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茶多酚对卵巢癌细胞黏附能力影响及其机制探讨
目的 探讨茶多酚对人卵巢癌SKOV3和3AO细胞黏附能力及对上皮型钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(neural cadherin,N-cadherin)表达的影响.方法 体外培养人卵巢癌SKOV3和3AO细胞,采用MTT法检测0、5、10、20、40、80和160 μg/mL不同浓度茶多酚处理24 h后,SKOV3和3AO细胞体外增殖情况,选取后续实验茶多酚的给药浓度.分别选取5、10及20μg/mL茶多酚处理SKOV3细胞24 h,10、20及40 μg/mL茶多酚处理3AO细胞24 h,各自对照组为不合茶多酚的培养液培养24 h,采用细胞分离实验观察细胞细胞间黏附能力的变化;采用细胞黏附实验观察细胞基质间黏附能力的变化;利用Real-time PCR和蛋白质印迹法检测E-cadherin和N-cadherin在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果 MTT实验结果显示,SKOV3(x2 =18.96,P=0.004)和3AO(x2 =16.98,P=0.009)卵巢癌细胞组内增殖抑制率随浓度增高而增强.细胞分离实验结果显示,随着茶多酚给药浓度的增加,SKOV3和3AO细胞在10和20 min的分离率逐渐降低,差异均有统计学意义,P值均＜0.05.细胞黏附率的比较,SKOV3细胞对照组、5、10和20 μg/mL组的黏附率分别为100.00％、93.89％、82.50％和67.32％,各组间差异有统计学意义,x2 =9.583,P=0.022;3AO细胞对照组、10、20和40 μg/mL组黏附率分别为100.00％、92.65％、86.90％和76.71％,差异有统计学意义,x2=10.532,P=0.015. Real-time PCR结果显示,SKOV3细胞各实验组的E-cadherin mRNA表达水平增加,x2=10.532,P=0.015,N-cadherin mRNA表达水平减少,x2=9.583,P=0.022;3AO细胞中各组N-cadherinmRNA表达水平明显减少,x2=10.532,P=0.015,但E-cadherin mRNA表达水平无明显变化,x2=4.499,P=0.212.蛋白质印迹法结果显示,SKOV3细胞中各实验组的E-cadherin蛋白表达水平增加,x2=10.116,P=0.018,N-cadherin蛋白表达水平减少,x2=9.804,P=0.02; 3AO细胞中实验组与对照比较N-cadherin蛋白表达水平明显减少,x2=8.868,P=0.031,但E-cadherin蛋白表达水平差异无统计学意义,x2=1.17,P=0.76.结论 茶多酚能够提高卵巢癌SKOV3和3AO细胞-细胞间黏附能力,降低细胞-基质间黏附能力,其机制可能与茶多酚上调E-cadherin及下调N-cadherin表达有关.
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N-cadherin、E-cadherin和P63蛋白在原发性肝细胞癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)以及P63蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其与患者临床病理学特征之间的相关性.方法 采用免疫组化染色法分别检测60例正常肝组织、60例HCC组织及其癌旁组织标本中N-cadherin、E-cadherin以及P63蛋白的表达,并分析HCC组织中三者表达与患者临床病理学特征的关系.结果 N-cadherin在正常肝组织、癌旁组织、肝癌组织中的阳性表达率逐渐升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).而E-cadherin在正常肝组织、癌旁组织、肝癌组织的阳性表达率则逐渐降低,差异均有统计学意义(P＜0.05),正常组织的P63阳性表达率显著高于癌旁组织和HCC组织,差异有统计学意义(P＜0.05),而癌旁组织与HCC组织间比较差异无统计学意义(P＞0.05).N-cadherin的高表达与HCC患者的高病理学分级、门静脉受侵犯、高临床分期等结局有显著相关性,差异有统计学意义(P＜0.05).E-cadherin的低表达与HCC患者的高病理学分级、门静脉受侵犯、高临床分期等结局有显著相关性,差异有统计学意义(P＜0.05).P63的低表达与HCC患者的高病理学分级、肿瘤直径、高临床分期等结局有显著相关性,差异有统计学意义(P＜0.05).P63的表达与E-cadherin的表达呈正相关(r=0.467,P＜0.01),而与N-cadherin的表达呈负相关(r=-0.472,P＜0.01).结论 HCC组织中N-cadherin的高表达和P63蛋白、E-cadherin的低表达可能与肿瘤的发生、发展及转移密切相关.
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神经型钙黏蛋白在肝门部胆管癌中的表达及意义
目的：研究神经型钙黏蛋白（N-cadherin）在肝门部胆管癌组织中的表达及临床意义。方法免疫组化检测26例肝门部胆管癌与癌旁及5例正常胆管组织中N-cadherin表达差异。Western blot对比N-cadherin在肝门部胆管癌组织中与癌旁中差异。结果免疫组化示26例肝门部胆管癌癌组织中有14例N-cadherin表达阳性，癌旁组织中6例阳性（P<0.05）。正常胆管阳性表达0例。N-cadherin在低分化癌组阳性表达率高于中、高分化癌组。Western blot示N-cadherin在肝门部胆管癌组织中的表达高于癌旁组织(0.88±0.12 vs 0.43±0.09,P<0.05)。结论 N-cadherin可能参与肝门部胆管癌的发生发展。
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神经型钙黏蛋白对小鼠脂肪间充质干细胞的成神经作用
目的:探讨神经型钙黏蛋白(N-cadherin)在小鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)成神经分化中的作用.方法;用差速培养法获取小鼠ADMSCs,传至第5代,经成神经诱导液诱导ADMSCs 7 d后,免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和微管相关蛋白2(MAP2)的表达,半定量PCR检测细胞中N-cadherinmRNA的表达;采用N-cadherin对细胞进行基因修饰,免疫荧光检测神经丝蛋白(NF)和GFAP的表达.结果:ADMSCs经成神经诱导7d后表达GFAP、NSE和MAP2,半定量PCR结果显示,与对照组相比成神经诱导后的细胞表达N-cadherin显著增高.转染N-cadherin的N-cadherin细胞培养24h后发出细长的突起,与相邻细胞之间形成网状连接.免疫荧光结果显示,转染后的细胞NF和GFAP表达阳性.结论:ADMSCs在体外多种作用下,具有向神经细胞分化的潜能.N-cadherin转染后能改变ADMSCs的形态,并且在ADMSCs向神经分化中发挥一定的作用.
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结直肠癌组织中上皮型钙黏蛋白、波形蛋白、神经型钙黏蛋白及CD133的表达及意义
目的 探讨结直肠癌组织中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、神经型钙黏蛋白(N-cad-herin)及CD133的阳性表达情况及其临床意义.方法 收集2016年1月至10月经徐州市中心医院手术或病理确诊的结直肠癌患者50例,取结直肠癌组织及癌旁组织做石蜡组织切片,采用蛋白质印迹法及免疫组化法检测其E-cadherin、Vimentin、N-cadherin及CD133的阳性表达情况,并分析结直肠癌组织中E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、CD133的阳性表达率及其与患者临床病理特征的关系.结果 结直肠癌组织E-cadherin、Vimentin、N-cadherin及CD133的阳性表达率分别为66％、48％、70％及58％,与癌旁组织的100％、6％、8％及14％比较,差异有统计学意义(P均＜0.01);E-cadherin表达与肿瘤淋巴结转移、肝转移及UICC分期有关(P＜0.05,P＜0.01);Vimentin表达与肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移、肝转移及UICC分期有关(P均＜0.05);N-cadherin表达与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结转移、肝转移及UICC分期有关(P＜0.05,P＜0.01);CD133表达与分化程度、淋巴结转移、肝转移及UICC分期有关(P＜0.05,P＜0.01).Spearman秩相关检验结果显示,结直肠癌组织中CD133表达与E-cadherin和Vimentin表达分别呈负相关与正相关(r=-0.604,P＜0.01;r=0.327,P＜0.05);E-cadherin表达与N-cadherin和Vimentin表达均呈负相关(r=-0.498,P＜0.05;r=-0.307,P＜0.05).结论 E-cadherin、Vimentin、N-cadherin及CD133可能参与了结直肠癌的发病及进展过程.
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神经型钙黏蛋白在骨髓微环境中的作用
神经型钙黏蛋白(N-cadherin)作为一种同亲型结合、钙依赖的细胞黏着糖蛋白,主要通过黏附作用介导细胞之间、细胞-胞外基质相互作用.在正常造血微环境中,N cadherin参与维持造血干细胞(HSC)自我更新及分化,在骨形成过程中通过成骨细胞调节骨的生成.另外,其在异常微环境中发挥作用,参与白血病、多发性骨髓瘤(MM)等血液肿瘤的发生发展.笔者就N-cadherin的结构、功能及其与上皮恶性肿瘤、正常HSC、骨形成和血液肿瘤中的作用进展作一综述.
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神经型钙黏蛋白分子在多发性骨髓瘤患者中的表达
目的 探讨神经型钙黏蛋白(N-cadherin)分子在多发性骨髓瘤(MM)患者中的表达及其临床意义.方法 收集54例初治MM患者及20名健康人骨髓单个核细胞,应用实时荧光定量PCR法检测N-cadherin mRNA表达,Western blot法测定其蛋白表达.结果 MM患者N-cadherin mRNA表达水平为6.056±3.033,健康对照组为1.788±0.778,二组相比差异有统计学意义(P＜0.0001).按照ISS分期,Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期MM患者N-cadherin mRNA表达水平分别为3.681±3.185、5.757±3.292、7.460±3.647,其中Ⅱ期、Ⅲ期与健康对照组相比差异均具有统计学意义(均P＜0.05);Ⅰ期与健康对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).有髓外浸润及无髓外浸润患者N-cadherin mRNA表达量分别为9.159±3.178、5.083±3.288,差异有统计学意义(P＜ 0.001).有骨质破坏和无骨质破坏患者N-cadherin mRNA表达量分别为6.544±3.729、4.240±2.896,差异有统计学意义(P=0.047).初治MM患者N-cadherin mRNA表达水平为6.056±3.033,治疗后有效患者N-cadherin mRNA表达水平下降(3.768±2.216)(P=0.015),治疗无效患者N-cadherin mRNA水平与治疗前相比差异无统计学意义(P＞0.05).初治MM患者N-cadherin蛋白表达量明显高于缓解期患者及健康对照组,而在治疗后复发的患者中,N-cadherin蛋白表达量明显高于初治患者.结论 N-cadherin分子在MM患者中高表达,其可能参与MM的发生及发展.
