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一氧化氮激活应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶及p38MAP激酶诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡
目的 研究脑缺血区周边组织一氧化氮合酶(NOS)的表达与应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶(SAPK/JNK)及p38MAP激酶(p38MAPK)激活的关系;探讨一氧化氮(NO)诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡的可能机制.方法 采用TUNEL染色法观察脑缺血再灌注不同时段模型鼠缺血区周边组织凋亡的阳性神经元数量;免疫组织化学、蛋白免疫印迹方法检测活化型Caspase-3、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和SAPK/JnK,p38MAPK及其磷酸化组分的表达.结果 再灌注后1h、2h缺血区周边组织nNOS表达明显增强;自1h起iNOS开始表达,12 h达到高峰.1h p-SAPK/JNK表达较强,以后逐渐减弱;p38MAPK各时段表达均明显增强,以6h为著,p-p38MAPK表达高峰亦在6h.6h活化型Caspase-3开始表达,12 h达到高峰;12 h开始出现TUNEL阳性神经元,24 h达到高峰.结论 缺血区周边组织NOS表达的增强可能通过激活SAPK/JNK及p38MAPK诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡.
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p38 MAPK对PDGF诱导的细胞迁移的调控作用
目的 研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在血小板源性生长因子(PDGF)诱导的细胞迁移中的作用.方法 PDGF刺激小鼠NIH 3T3细胞后,利用免疫印迹法检测p38磷酸化程度的改变情况.利用Transwell细胞迁移系统来观察PDGF对NIH 3T3细胞迁移的诱导作用,以及p38基因敲除对PDGF诱导的细胞迁移的影响.结果 PDGF能显著诱导NIH 3T3细胞迁移(P＜0.001),且在此过程中p38能被磷酸化激活,p38基因敲除能阻断PDGF诱导的细胞迁移(P＜0.001).结论 p38 MAPK参与了PDGF诱导的细胞迁移的调控.
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MAP激酶及其在心肌肥厚中作用的研究
心肌肥厚(cardiac myocyte hypertrophy)是以心肌细胞肥大为特征的代偿性反应,也是多种心血管疾病如心肌梗死、高血压病、瓣膜病、病毒性心肌炎等发生、发展过程中常见的病理改变之一.
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高血糖导致脑缺血损伤机制
大约有1/3的卒中患者伴有糖尿病或非糖尿病性高血糖症.高血糖症会显著增加脑损伤,导致病死率升高,并由脑缺血再灌注损伤后导致患者长期残疾.然而,这个重要的临床相关现象的机制尚不完全清楚.本文概述了脑缺血后葡萄糖的作用、高血糖症对自由基产生的影响、线粒体超微结构和功能的变化、星形胶质细胞的激活以及MAPK的磷酸化.
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刚地弓形虫速殖子侵入宿主细胞涉及的丝裂原蛋白激酶信号途径的研究
丝裂原蛋白激酶(MAPKs)是一类存在于所有真核细胞的丝/苏氨酸蛋白激酶,在真核细胞的信号转导过程中起着至关重要的作用.MAPKs磷酸化激活多种转录因子,影响基因表达,调节细胞增殖、分化、凋亡等过程,并在弓形虫速殖子侵入宿主细胞的信号转导中有着重要的意义.
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丝裂原蛋白激酶抑制剂U0126对刚地弓形虫侵入宿主细胞的影响
目的观察丝裂原蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)抑制剂对刚地弓形虫侵入宿主细胞的影响.方法以丝裂原蛋白激酶抑制剂U0126分别以不同浓度加入分孔培养的细胞中,于不同时间分别用吉氏染色和流式细胞仪(FCM)检测其宿主细胞感染速殖子的差异.结果吉氏染色检测在以U0126 1μM,10μM和100μM作用3小时下其感染率分别比对照组下降了20.22%,(P＜0.01),52.91%(P＜0.01)和75.27%(P＜0.01);在作用6小时及9小时其感染率分别比对照组下降了32.88%(P＜0.01),57.24%(P＜0.01),79.21%(P＜0.01)和41.26%(P＜0.01),54.73%(P＜0.01),80.80%(P＜0.01).FCM检测结果与之相似.结论U0126通过作用于MAPK信号传导途径而明显抑制弓形虫速殖子侵入宿主细胞.
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丝裂原激活蛋白激酶抑制剂对弓形虫速殖子侵入宿主细胞信号转导途径的阻断效应
目的观察丝裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)抑制剂对弓形虫速殖子侵入细胞的影响.方法IFA荧光标记检测在不同剂量抑制剂作用下及在不同时间其宿主细胞感染速殖子的差异;SDS-PAGE和Westem b10t分析MAPK的表达及其相对活性.结果在PD980591μM和10μM作用下其感染率仅分别为对照组的18.00%(u=9.03,P＜0.01)和14.80%(u=7.93,P＜0.001);在PD98059 50μM作用下宿主细胞感染率在24h和48h分别为对照组的55.45%(u=3.58,P＜0.01)和49.15%(u=4.08,P＜0.01);与对照比较,其MAPK的相对活性明显下降,10μM和50μM组分别降低了43.03%(u=2.72,P＜0.01)和78.79%(u=5.74,P＜0.001).结论PD98059通过作用于MAPK信号转导途径而抑制速殖子侵入宿主细胞的过程.
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丝裂原蛋白激酶两种抑制剂对弓形虫侵入宿主细胞影响的差异
目的 观察两种丝裂原蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)抑制剂PD98059及U0126对刚地弓形虫侵入宿主细胞的影响,探讨其对弓形虫速殖子侵入宿主细胞信号转导途径的不同阻断效应.方法 丝裂原蛋白激酶抑制剂PD98059或U0126分别在不同时间及不同剂量作用于速殖子-宿主细胞培养系统,用流式细胞仪(FCM)检测宿主细胞感染速殖子的差异.结果 流式细胞仪检测加入U0126 1μmol/L、10μmol/L和100μmol/L的细胞培养孔的细胞感染弓形虫速殖子的量分别比对照组平均降低了26.10%(P<0.01),66.42%(P<0.01)和70.39%(P<0.01).而加入PD980591μmol/L、10μmol/L和100μmol/L 的分别比对照组平均降低了25.45%(P<0.01),53.01%(P<0.01)和64.70%(P<0.01).实验中发现100μmol/L U0126作用培养细胞9h的时候,可导致HL-60细胞出现部分聚集成团、漂浮的中毒现象.结论 U0126和PD98059均可明显抑制弓形虫速殖子侵入宿主细胞,但其差异无显著性,其机制有待进一步探索.
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活性氧与细胞增殖
活性氧作为一重要的信号分子，参与细胞的信号转导，激活MAP激酶和转录因子NFκB，促进细胞的增殖。肿瘤细胞内ROS水平明显增高，干预ROS水平，为肿瘤的治疗提供了新的思路。
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丝裂素活化蛋白激酶与心肌细胞效应
丝裂素活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPKs)是一族具有广泛调节细胞反应的蛋白质激酶,具有两个为明显的特征:(1)表现在活化形式上,都是其活化环内的一段保守氨基酸序列:Thr-X-Tyr上的苏氨酸、酪氨酸双位点被磷酸化而使激酶活化,不同MAPK成员其氨基酸X不同.(2)表面在底物的结构基础上,都是磷酸化底物蛋白分子上邻近脯氨酸的丝氨酸/苏氨酸残基,即脯氨酸介导的Ser/Thr蛋白激酶.目前,在哺乳类细胞,已确定该家族主要包括三亚族即:ERK、JNK和p38激酶,每个亚族存在多个不同的异构体(isoform),如:ERK包括ERK1、ERK2、ERK3、ERK5和ERK7;JNK包括JNK1、JNK2、JNK3;p38激酶包括p38α、p38β、p38-2、p38γ、p38δ等.不同类型细胞MAP激酶异构体存在一定程度的差异或表现出一定的特异性.近年来研究证实,不同亚族的MAP激酶与其上下游信号分子组成的信号转导通路在介导、调节心肌细胞诸如增殖、分化、生存、死亡等多种细胞效应中起着非常重要的作用.
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β1整合素过表达抑制角膜上皮细胞凋亡的实验研究
目的:探讨β1整合素功能性过表达对角膜上皮细胞凋亡的影响及机制,为角膜细胞移植提供理论依据.方法:构建β1整合素一绿色荧光蛋白(GFP)融合基因并转染兔角膜上皮细胞.观察融合基因在角膜上皮细胞的表达及对各细胞外基质蛋白的黏附能力.检测β1整合素功能性转染对角膜上皮细胞凋亡及丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAP激酶)磷酸化的影响.结果:β1整合素-GFP融合基因成功转染至兔角膜上皮细胞并过表达;β1整合素过表达能够明显增加角膜上皮细胞对各细胞外基质蛋白的黏附力并抑制角膜上皮细胞凋亡及促使MAP激酶磷酸化.结论:β1整合素过表达能有效抑制角膜上皮细胞凋亡,MAP激酶磷酸化可能在这一过程中起重要作用.
