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偏硅酸钠抑制家兔外周血白细胞活性氧的生成
高血脂时外周血白细胞引爆和激活,产生过多活性氧(reactive oxygen species,ROS),抑制过量的ROS产生对于控制动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生发展具有重要意义[1].以往研究发现偏硅酸钠( Na2 SiO3)有抗炎效应[2].本实验观察Na2 Si03对家兔外周血白细胞ROS的抑制作用,为NaSi03抗AS机制提供进一步资料.1材料与方法1.1动物:清洁级新西兰家兔(河北医科大学动物中心,合格证号:1004218),雄性,体质量1500 ～2000 g.1.2制备ox-LDL:从健康家兔耳中动脉取血,沉淀法提取低密度脂蛋白,置硫酸铜( CuSO4)溶液中37℃氧化24h得氧化低密度脂蛋白(ox-LDL).
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真核表达载体GV394-Nurr1的构建及鉴定
目的：构建含人源性Nurr1基因真核表达载体GV394?Nurr1，检测其瞬时表达对细胞内活性氧类物质（ ROS）水平的影响。方法 PCR扩增人Nurr1基因，克隆至 T载体，测序正确后与真核载体 GV394一起，经BamHI和XhoI双酶切，T4 DNA连接酶连接，构建GV394?Nurr1；采用脂质体将GV394?Nurr1瞬时转染神经母细胞瘤SH?SY5Y细胞，RT?PCR检测Nurr1基因mRNA水平，通过DCFH?DA染色检测Nurr1对细胞内ROS水平的影响。结果 PCR及测序证实人Nurr1基因正确克隆至真核表达载体GV394； RT?PCR显示Nurr1基因mRNA水平在瞬时转染的细胞中明显增高；DCFH?DA染色显示瞬时转染Nurr1的神经母细胞瘤细胞的细胞内的ROS水平峰值较对照组明显左移。结论成功构建人源性Nurr1真核载体，可在SH?SY5Y细胞中表达并减少细胞内ROS水平，为进一步在体外研究Nurr1的功能及其与多巴胺能神经元的保护作用的关系提供了基础。
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健脾消癥方诱导肝癌细胞HepG2凋亡的作用研究
目的 :探讨健脾消癥方对肝癌细胞HepG2凋亡的影响及机制.方法 :MTT法观察健脾消癥方对肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721增殖的影响,Hochest 33342染色、透射电镜观察健脾消癥方对HepG2细胞超微结构的改变作用,DCFH-DA探针法观察健脾消癥方对HepG2活性氧水平的影响,Western blot检测健脾消癥方对HepG2的凋亡相关半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Caspase-9表达的影响.结果 :健脾消癥方作用HepG248h后,细胞形态及超微结构出现典型的凋亡特点,细胞内活性氧浓度升高,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达上调.结论 :健脾消癥方对HepG2有较好的诱导凋亡的作用,其作用机制可能与其增加细胞活性氧(ROS)水平及下调Caspase-3、Caspase-9蛋白有关.
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脂联素对高糖诱导系膜细胞活性氧和内皮一氧化氮合成酶产生的影响
氧化应激在糖尿病肾病(DN)发病中起重要作用[1].脂联素是脂肪细胞分泌的一种特异性蛋白质,具有抗炎、改善胰岛素抵抗、抗动脉粥样硬化、降血糖、降血脂及抗氧化作用.研究发现脂联素与DN关系密切,其血浆浓度随.肾功能不全进展而增加,原因可能是为减轻内皮和血管损伤的正反馈调节[2,3].因此,我们推测脂联素可能通过抑制氧化应激而对DN发挥保护作用,并通过本研究进一步明确脂联素抗糖尿病微血管病变的机制.
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电刺激对小鼠成纤维细胞L929机械力损伤的保护作用
目的 探讨电刺激(electrical stimulation,ES)对机械力诱导的小鼠成纤维细胞L 929氧化损伤的保护作用.方法 将小鼠成纤维细胞L 929分为正常对照组、电刺激组、加力模型组和加力后电刺激组.采用CCK-8法检测细胞活性,间接化学荧光法检测细胞活性氧(reactive oxygen species , ROS)含量变化,JC-1染色法检测细胞内线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential , MMP)变化,分光光度法测定Caspase-3酶活性变化.结果 加力组细胞活性明显下降,细胞内ROS增加,线粒体膜电位下降,Caspase-3酶活性增强,差异均有统计学意义(P＜0.05).与加力组相比,加力后电刺激组细胞活性增强,线粒体膜电位水平上升,细胞内ROS含量减少,Caspase-3酶活性减弱,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 电刺激可通过维持细胞活性、减少细胞凋亡、减少细胞内ROS含量及Caspase-3酶活性,而对机械力诱导的细胞氧化损伤起到一定的保护作用.
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艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383吞噬功能和ROS的影响
目的:通过艾烟冷凝物对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的吞噬功能以及细胞活性氧的影响以探讨其对修复机体损伤和防卫免疫等方面是否具有一定调节的作用.方法:体外培养NR8383细胞,加入不同浓度的艾烟冷凝物,染毒24h后,应用流式细胞仪和DCFH-DA试剂盒来分别检测NR8383的细胞吞噬率及ROS.结果:在一定浓度范围内,艾烟冷凝物可以增强NR8383细胞的吞噬功能,各实验组(除浓度为0.004mg/ml的实验组外)与空白对照组的差异均具有统计学意义(P＜0.005).同时,在一定浓度范围内,它还可以降低NR8383细胞内的活性氧,分别对NR8383细胞用艾烟冷凝物染毒24h,该细胞的活性氧随着艾烟冷凝物的浓度升高而呈降低趋势,各实验组与空白对照组均具有统计学差异(P＜0.001).结论:在一定浓度范围内,艾烟冷凝物可以增强大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的吞噬功能,亦可降低该细胞的活性氧,这可能成为艾烟能够修复机体损伤和提高自身免疫力的重要机制之一.
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细胞活性氧(ROS)与肿瘤发生及干预的关系
前言活性氧(reactive oxygen species,ROS)是指由分子氧直接或间接转化而来、具有比分子氧更活泼的化学反应性的一类含氧物.生物体内存在着一套完善的氧化-抗氧化体系,正常情况下可将ROS维持在一个稳定的范围内,并在抗炎、抗菌等方面发挥积极作用.当平衡打破ROS持续升高,将促使细胞发生转化、导致恶性肿瘤的发生.但近年来随着对ROS生物学功能研究的深入,ROS杀伤肿瘤细胞的作用也逐渐被认识,并形成了新兴的自由基生物医学研究领域.本文将综述ROS在这方面的研究成果,阐述其对肿瘤的双重生物学效应.
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α-倒捻子素对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用
目的:研究α-倒捻子素对过氧化氢(H2O2)诱导的人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19氧化损伤的保护作用.方法:分别用不同浓度的α-倒捻子素和H2O2处理ARPE-19,CCK8法检测α-倒捻子素和H2O2对ARPE-19细胞毒性作用.不同浓度的α-倒捻子素预处理ARPE-19,再用200μmol/L H2O2处理24h,观察细胞活性变化.流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平变化,免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB蛋白表达变化.结果:CCK8法检测结果显示:当α-倒捻子素浓度在0～12μmol/L时,ARPE-19活性无明显变化;当浓度达到16μmol/L时,细胞活性开始下降(P＜0.05).H2O2诱导后,当α-倒捻子素浓度在0 ～ 16μmol/L之内时,α-倒捻子素预处理均可提高ARPE-19细胞活性.ROS结果表示:H2O2诱导后,ROS表达量增高(P＜0.05);8和12μmol/Lα-倒捻子素预处理,均可有效清除H2O2诱导产生的ROS(P＜0.05).Western blot结果显示:H2O2诱导后NF-κB蛋白表达增高(P＜0.05),12μmol/Lα-倒捻子素预处理可以继续上调H2O2诱导后ARPE-19的NF-κB蛋白表达(P＜0.05).结论:H2O2诱导ARPE-19细胞氧化损伤,造成细胞活性下降,ROS表达量增加,经过α-倒捻子素预处理后,可有效提高细胞活性,清除ROS,活化NF-κB.
