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磁性附着体中铁素体不锈钢引起小鼠成纤维细胞L929的死亡模式
背景:作为自制磁性附着体外包裹材料的26-1超纯铁索体不锈钢在以往的实验中已初步证实其具有良好的生物学特性,但选用凋亡机制对其生物相容性进行深入研究和评价的报道较少.目的:应用L929细胞从分子生物学水平探讨26-1超纯铁素体不锈钢引起细胞的死亡模式,评价26-1超纯铁索体不锈钢是否符合临床应用的生物相容性要求.设计、时间及地点:分子生物学水平,对比观察实验,于2004-06/2005-06在中国医科大学中心实验室完成.材料:26-1超纯铁索体不锈钢(超低碳,名义成分为Fe-26%Cr-1%Mo),Tilite(含钛医用合金,名义成分为70%Ni-16%Cro(4%～6%)Ti-其他合金元素)、Co-Cr合金(名义成分为Co-30%Cr-5%Mo).利用蜡型铸造制备实验用材料,并将材料分别切割成直径12 mm的圆盘样品.方法:①将3种材料与L929细胞联合培养.阴性对照组为RPMI1640正常培养细胞,孵育18 h和24 h后应用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白结合碘化丙啶染色双参数技术对细胞死亡类型进行定量检测.②25%,50%,100%浓度的3种材料浸提液体外培养小鼠成纤维细胞L929 24 h后,采用流式细胞术碘化丙啶染色法检测L929细胞的凋亡率及细胞周期分布情况.主要观察指标:①不同材料引起L929细胞凋亡和坏死的比例.②L929细胞凋亡率及细胞周期分布情况.结果:各材料组均降低了L929细胞的生存率,其中细胞坏死水平在各材料组与阴性对照组之间差异无显著性意义,说明引起的致细胞病变效应主要是由细胞凋亡引起的,各材料组之间产生的效应差异无显著性意义.并且L929细胞凋亡具有明显的浓度依赖性及时间依赖性.3种实验用金属材料引起的L929细胞凋亡率在各浓度组间差异无显著性意义.结论:26-1超纯铁索体不锈钢引起细胞的死亡方式丰要是凋亡,符合临床应用材料的生物相容性要求.
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碳纤维增强碳与碳化硅双基体陶瓷基复合材料作为口腔种植体材料的细胞毒性
目的 通过体外细胞培养法评价碳纤维增强碳与碳化硅双基体陶瓷基复合材料(C/C-SiC)对细胞生长和凋亡的影响.方法 用实验材料不同浓度浸提液培养小鼠成纤维细胞L929,采用MTT法检测细胞的相对增殖度;采用急性溶血试验检测材料对血细胞的溶血作用,计算溶血率;采用流式细胞仪、Annexin V-FITC/PI双染法检测阴性对照组、100%C/C-SiC组、纯钛组、阳性对照组的细胞散点图,计算正常细胞、早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞的比例.结果 C/C-SiC复合材料的细胞毒性为1级,溶血率为0.156%,无明显溶血反应,与阴性对照组和纯钛组的差异无统计学意义(P＞0.05).C/C-SiC组4个象限细胞比例与纯钛组和阴性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),阳性对照组的早期凋亡、正常细胞比例与其他任一组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 C/C-SiC复合材料有生物安全性基础,无细胞毒性,无溶血反应.
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汉滩病毒76-118株核蛋白部分基因片段的克隆、表达和抗原活性测定
为了研究汉坦病毒的DNA疫苗,用PCR方法克隆汉滩病毒76-118株S片段部分基因,构建真核细胞表达质粒pEGFP-HTNV-S0.7,并在成纤维细胞L929中进行瞬时表达.成功地得到预期大小约0.7kb的重组基因,并在成纤维细胞中进行了瞬时表达.免疫印迹分析产生的相对分子质量约26000的蛋白质具有抗汉坦病毒的抗原活性.直接免疫荧光分析显示了特异性的绿色荧光.
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3种牙科金属材料对L929细胞的毒性及对凋亡相关基因与蛋白表达的影响
目的:研究3种牙科金属材料(金合金、纯钛、镍铬合金)浸提液对小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性及凋亡相关基因与蛋白表达的影响,探讨3种牙科金属材料引起细胞凋亡的可能通路.方法:以金合金(A组)、纯钛(B组)、镍铬合金(C组)的浸提液(每组8个样本)培养小鼠成纤维细胞L929,以含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基作为阴性对照(D组),以铜合金作为阳性对照(E组).采用MTT法在细胞水平评价3种牙科金属材料的细胞毒性,采用RT-PCR在分子水平上检测3种牙科金属材料浸提液对L929细胞凋亡相关基因caspase-3、-8、-9 mRNA及蛋白表达的影响.采用SPSS11.5软件包对数据进行统计学分析.结果:各实验组细胞毒性均为0级.镍铬合金组caspase-3mRNA与caspase-9mRNA的表达与其他实验组、阴性对照及阳性对照组间差异显著,镍铬合金组caspase-3蛋白与caspase-9蛋白的表达与其他实验组及阴性对照组间差异显著,各组caspase-8mRNA及蛋白的表达无显著差异.结论:金合金与纯钛浸提液对小鼠L929细胞凋亡相关基因及蛋白的表达无显著诱导作用；镍铬合金诱导小鼠L929细胞凋亡相关基因caspase-3mRNA、caspase-9mRNA及蛋白表达增加,可能通过线粒体通路诱导细胞凋亡.
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小鼠肝癌细胞H22培养上清液对鼠细胞L929 MTP53、EGFR蛋白表达的影响
目的 探讨小鼠肝癌细胞H22培养上清液对鼠L929细胞MTP53、EGFR蛋白表达的影响.方法 采用肝癌细胞H22的培养上清液诱导正常成纤维细胞L929,诱导细胞为L929-H22.采用免疫细胞化学方法检测MTP53、EGFR蛋白的表达.结果 MTP53、EGFR蛋白的表达L929-H22细胞较L929细胞显著增强(P<0.001).结论 小鼠肝癌细胞培养上清液诱导细胞MTP53、EGFR的表达与正常细胞不同,MTP53、EGFR的表达增强可能在细胞恶性转化过程中发挥作用.
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肝癌细胞H22培养上清液对鼠细胞L929细胞周期、CyclinD1、P27蛋白表达的影响
目的:探讨小鼠肝癌细胞H22培养上清液对鼠L929细胞细胞周期、CyclinD1、P27蛋白表达的影响.方法:采用肝癌细胞H22的培养上清液诱导正常成纤维细胞L929,诱导细胞为L929-H22.采用流式细胞术检测L929细胞与L929-H22细胞细胞周期分布,免疫细胞化学方法检测2种细胞中CyclinD1、P27蛋白的表达.结果:与L929相比,L929-H22G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例明显增加(P＜0.05),增殖指数PI明显升高(P＜0.05);CyclinD1的表达增强(P＜0.05),P27的表达减弱(P＜0.05).结论:小鼠肝癌细胞培养上清液诱导的细胞CyclinDl、P27的表达及细胞周期分布与正常细胞不同,CyclinDl表达增强和P27表达减弱可能在细胞恶性转化过程中发挥作用.
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电刺激对小鼠成纤维细胞L929机械力损伤的保护作用
目的 探讨电刺激(electrical stimulation,ES)对机械力诱导的小鼠成纤维细胞L 929氧化损伤的保护作用.方法 将小鼠成纤维细胞L 929分为正常对照组、电刺激组、加力模型组和加力后电刺激组.采用CCK-8法检测细胞活性,间接化学荧光法检测细胞活性氧(reactive oxygen species , ROS)含量变化,JC-1染色法检测细胞内线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential , MMP)变化,分光光度法测定Caspase-3酶活性变化.结果 加力组细胞活性明显下降,细胞内ROS增加,线粒体膜电位下降,Caspase-3酶活性增强,差异均有统计学意义(P＜0.05).与加力组相比,加力后电刺激组细胞活性增强,线粒体膜电位水平上升,细胞内ROS含量减少,Caspase-3酶活性减弱,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 电刺激可通过维持细胞活性、减少细胞凋亡、减少细胞内ROS含量及Caspase-3酶活性,而对机械力诱导的细胞氧化损伤起到一定的保护作用.
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4种牙科金属材料对成纤维细胞L929凋亡相关基因及蛋白表达的影响
目的 研究4种不同牙科金属材料(金合金、银钯合金、钴铬合金、镍铬合金)浸提液对小鼠成纤维细胞L929凋亡相关基因及蛋白表达的影响.方法 以金合金(A组)、银钯合金(B组)、钴铬合金(C组)、镍铬合金(D组)的浸提液体外培养小鼠成纤维细胞L929,并以含10％胎牛血清的RPMI1640培养基作为阴性对照(E组).采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了4种牙科金属材料浸提液对L929细胞凋亡相关基因caspase-3、8、9 mRNA和蛋白表达的影响.结果 4种牙科金属材料浸提液培养小鼠L929细胞48 h后,除A组与E组间差异无统计学意义外,各组间caspase-3 mRNA及caspase-9 mRNA表达差异有统计学意义(P＜0.05).各组间caspase-8 mRNA差异无统计学意义.除A组与C组、B组与D组间差异无统计学意义外,caspase-3及caspase-9蛋白表达差异有统计学意义,各组间caspase-8蛋白差异无统计学意义.结论 4种牙科金属材料,除金合金外,均诱导小鼠成纤维细胞L929凋亡相关基因表达增加,金属离子可能通过线粒体通路诱导细胞凋亡.
