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急性给予ApoE4升高大鼠皮层神经元内静息[Ca~(2+)]i
目的 研究载脂蛋白E(ApoE)对大鼠皮层神经元内游离钙离子水平[Ca~(2+)]i的影响.方法 用激光共聚焦显微镜(LSCM)和Fluo-3/AM荧光探针标记检测皮层神经元钙信号瞬间动态变化;用N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体阻断剂MK-801观察ApoE4对其影响.结果 ApoE4可以呈时间及浓度依赖性升高神经元内静息[Ca~(2+)]i(P<0.01或P<0.05),MK-801可以部分阻断ApoE4所致的静息[Ca~(2+)]i升高(P<0.05或P<0.01);而ApoE3无影响.结论 急性给予ApoE4能升高神经元内静息[Ca~(2+)]i,NMDA受体的激活可能参与了ApoE4所致的胞内钙信号改变与其神经毒作用.
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利用激光共聚焦图像系统检测实验性变态反应性脑脊髓炎动物淋巴细胞内游离钙浓度
目的进一步探讨多发性硬化(MS)和实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的发病机制.方法取EAE动物的脾细胞,制备淋巴细胞悬液,以荧光探针Fluo-3/AM负载后,通过激光扫描共聚焦显微镜(Insight plus IQ,Meridian,USA)检测细胞荧光强度,其荧光强度与细胞内钙离子浓度成正比.结果 EAE组淋巴细胞内钙离子浓度明显高于正常对照组.结论细胞内钙在EAE动物淋巴细胞的过度活化方面发挥重要作用.
关键词： 共聚焦显微镜检查 实验性变态反应性脑脊髓炎 钙 Fluo-3/AM -
西红花苷对牛主动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的影响
目的研究西红花苷对血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响.方法以Fluo-3/AM作为Ca2+荧光探针,采用激光扫描共聚焦显微镜观察牛主动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的变化.结果无论细胞外有无钙离子,西红花苷(1×10-8,1×10-7,1×10-6mol·L-1)均能明显抑制1×10-2mol·L-1H2O2引起的细胞内钙离子浓度的升高,其抑制率含钙条件下分别为34.1%,57.1%和74.3%(P＜0.01),无钙条件下分别为26.2%,32.1%和50.0%(P＜0.01);在胞外无钙的条件下,西红花苷(1×10-8,1×10-7,1×10-6mol·L-1)能抑制70 mmol·L-1CHCl3导致雷洛丁敏感钙池的释放,其抑制率分别为27.8%,27.8%和50.0%(P＜0.01).结论西红花苷能抑制胞外钙离子的内流及内质网上钙离子的释放.
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脑梗死病人急性期血小板密度、细胞内游离钙及其功能的变化
目的观察脑梗死病人急性期血小板密度、细胞内游离钙浓度及血小板聚集和释放的变化.方法以梯度离心法制备血小板密度亚群,激光共聚焦显微镜法测定Fluo-3/AM负载后血小板细胞内游离钙荧光强度的变化,以透光度法和介质中ATP的量评价血小板的凝集和释放反映.对照组和实验组血小板分别来自于正常志愿者和脑梗死病人急性期的静脉血.结果①Percoll梯度离心的结果表明,脑梗死病人急性期血液中高密度亚群(比重＞1.062)血小板的数量与对照组 [(24.6±8.6)%,n＝5]比较显著增多[(52.1±11.4)%,n＝6,P＜0.001],上述结果与共聚焦显微镜直接观察的结果一致.②与对照组相比3 μΜ ADP介导的聚集反应增强[(69.4±19.8)%,P＜0.01],介质中ATP的含量为1.26±0.44(P＜0.0 1) .③对照组和实验组细胞内钙的静息水平无明显差异,加10 μΜ ADP后,实验组细胞内钙的荧光强度增加明显(862±319,P＜0.01).结论与对照组比较,脑梗死病人急性期,高密度亚群血小板的数量显著增加.血小板聚集和释放功能明显增强,这一结果可能与细胞游离钙增加有关.
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大黄素对豚鼠单个心室肌细胞胞浆游离钙浓度的影响
目的研究大黄素(Emodin)对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响.方法酶解法分离单个豚鼠心肌细胞,用与钙离子特异性结合的Fluo-3/Am标记细胞内游离钙离子,应用激光扫描共聚焦显微镜实时监测钙荧光强度(Fluorescent Intensity,FI)的变化,以平均荧光强度代表[Ca2+]i.结果在静息状态下,大黄素1～100μmol/L对[Ca2+]i均无影响;大黄素1μmol/L对KCl 60mmol/L诱导的外钙内流引起的胞浆钙升高有促进作用,平均荧光强度由1876.7±551.3增加至2904.8±739.1(n=8,P<0.05);10μmol/L对其无影响;100μmol/L则表现为抑制作用,平均荧光强度降至1214.1±334.8(n=8,P<0.05).结论大黄素低浓度(1μmol/L)对KCl诱导的细胞内钙增高有促进作用;高浓度(100μmol/L)则表现为抑制作用.因此,大黄素对心肌细胞内钙具有双向调节作用.
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小檗碱对急性分离成年大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响
目的 研究小檗碱对急性分离大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法 采用酶解法分离单个大鼠心肌细胞,用钙敏感的荧光指示剂Fluo-3/AM染色,以荧光强度(FI)来代表[Ca2+]i,应用激光扫描共聚焦显微镜实时监测FI的变化.结果在静息状态下,小檗碱(3～100μmol/L)对[Ca2+]i无影响.3～100μmol/L小檗碱对KCl 60mmol/L介导的钙内流也无影响.但小檗碱(30和100μmol/L)对caffeine 10mmol/L引起的钙动员有明显促进作用(P<0.01).结论小檗碱对于KCl通过电压依赖性钙通道(VDC)介导的[Ca2+]i升高无影响;但小檗碱(30和100μmol/L)可能通过影响RyRs而促进肌浆网(SR)内钙外流,也可能对SR钙摄取,钙的跨膜转运及Na+-Ca2+交换有抑制作用.
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西红花苷对培养的牛内皮细胞内钙的调节作用
目的观察西红花苷对不同刺激因子5-羟色胺(5-HT)、组胺(His)、过氧化氢(H2O2)所致内皮细胞内钙升高的影响.方法采用Fluo-3/AM荧光染色剂负载细胞,在激光共聚焦扫描显微镜上测定培养的单个牛内皮细胞内游离钙的浓度.结果在含钙的Hank′ s液中,5-羟色胺、组胺、过氧化氢能明显升高静息状态的细胞内钙,增幅分别为280%、320%、285%.西红花苷1、10μmol/L对5-羟色胺、组胺、过氧化氢引起的钙增高有显著的抑制作用,并呈一定的剂量依赖性.0.1μmol/L西红花苷对细胞内钙升高无显著影响.结论西红花苷抗动脉粥样硬化、高血压及炎症作用可能与其内皮细胞保护作用有关.
关键词： 西红花苷 Fluo-3/AM 激光共聚焦扫描显微镜 内皮细胞 细胞内钙 -
广西眼镜蛇毒蛋白Natrin对H2O2所致大鼠心肌细胞钙超载的影响
目的 观察广西眼镜蛇毒蛋白Natrin对H2O2诱导的原代培养大鼠乳鼠心肌细胞内钙超载的拮抗作用.方法 采取SD大鼠乳鼠心肌细胞原代培养,将心肌细胞分正常对照组:不加任何处理;钙超载模型组:检测时加入终浓度为0.3 mmol·L-1的H2O2;药物处理组:预先分别给以不同剂量的Natrin孵育24 h,检测时加入终浓度为0.3 mmol·L-1的H2O2.以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,动态检测细胞内[Ca2+]i 变化.结果动态监测15 min发现,与正常对照组比较,模型组细胞内平均荧光峰值增加49.37%,高于正常对照组(P<0.01).而高、中、低药物浓度组平均峰荧光值比正常对照组分别增加27.52%、12.71%、5.15%.与模型组比较,药物组细胞内平均峰荧光强度值均降低(P<0.01).结论 广西眼镜蛇毒蛋白Natrin对心肌细胞钙离子通道有较好的阻断作用,能减轻H2O2诱导的心肌细胞内[Ca2+]i超载,且药物组随着药物浓度的逐渐升高,细胞内钙荧光强度逐渐下降,并呈现剂量依赖性.
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2,3,7,8-TCDD对培养乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度影响的研究
目的测定培养SD大鼠乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度[Ca2+]i,观察2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,以下略为TCDD)对心肌细胞[Ca2+]i的影响.方法将实验动物分为0.05、0.5、5、10 μg/kg 4个染毒组,采用Fluo-3/AM同时加入Pluronic F-127作为细胞内游离钙离子的荧光探针,负载培养的心肌细胞,应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)技术检测空白组及染毒组乳鼠心肌细胞[Ca2+]i.结果静息时,心肌细胞[Ca2+]i为(77.68±12.00)nmol/L.染毒组心肌细胞的[Ca2+]i显示不同程度的升高,且呈剂量依赖性.结论应用Fluo-3/AM和Pluronic F-127结合CLSM技术可以精确的反映细胞内游离钙离子浓度,TCDD可能通过某种机制增加心肌细胞[Ca2+]i,从而对乳鼠心脏功能产生一定损伤.
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双色流式细胞术在检测特定亚群淋巴细胞Ca2+变化中的应用
目的: 建立检测特定亚群淋巴细胞内钙离子的方法. 方法: 以PHA刺激96h的PBMC作为研究对象,在以quantum-red标记的抗膜表面抗原CD8进行膜表面染色的同时,进行Fluo-3/AM负载及细胞内Ca2+的检测,摸索以双色流式细胞术检测特定亚群淋巴细胞内Ca2+变化的佳条件. 并检测经钙离子载体A23187和趋化性细胞因子刺激后,PHA活化的PBMC中CD8+细胞内的Ca2+变化. 结果: ①选择1 μmol/L作为Fluo-3/AM负载的佳浓度;②与Fluo-3/AM负载相适应的改良染色条件不影响膜表面荧光染色的阳性率和平均荧光强度;③趋化性细胞因子刺激后,CD8+细胞内Ca2+浓度有一定水平上调,但远不如A23187的作用明显. 结论: 建立了以双色流式细胞术鉴定特定亚群淋巴细胞内钙离子变化的方法,可广泛用于不同淋巴细胞亚群钙离子的快速精确测量.
