首页 > 文献资料
-
流式细胞术联合共聚焦显微镜对G2和M期作用位点的鉴别意义
本研究探讨抗癌药物在细胞周期G2期和M期作用位点的鉴别方法.用G2期和M期细胞阻滞剂的甲安吖啶(m-AMSA)和长春花碱(VBL),分别诱导MOLT-4细胞产生细胞G2期和M期阻滞,用流式细胞术分析DNA直方图含量变化.共聚焦显微镜观察阻滞后细胞形态,并寻找上述两种药物诱导阻滞成功后的差异.结果表明:流式细胞术有检测显示,诱导阻滞成功的MOLT-4细胞均表现为G2/M峰增高,但仅凭流式细胞术单独检测无法判别两者差异.共聚焦显微镜观察显示甲安吖啶诱导G2期阻滞的细胞呈现G2期形态特征,VBL诱导M期阻滞的细胞呈现M期形态特征,共聚焦显微镜时细胞形态学的观察有助于区分两者的差异.因此,在流式细胞术验证诱导成功的基础上进一步经共聚焦显微镜观察有助于鉴别G2和M期的阻滞剂.结论:流式细胞术与共聚焦显微镜技术结合是判别抗癌药物的G2期和M期细胞阻滞剂类型的有效方法之一.
-
利用激光共聚焦图像系统检测实验性变态反应性脑脊髓炎动物淋巴细胞内游离钙浓度
目的进一步探讨多发性硬化(MS)和实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的发病机制.方法取EAE动物的脾细胞,制备淋巴细胞悬液,以荧光探针Fluo-3/AM负载后,通过激光扫描共聚焦显微镜(Insight plus IQ,Meridian,USA)检测细胞荧光强度,其荧光强度与细胞内钙离子浓度成正比.结果 EAE组淋巴细胞内钙离子浓度明显高于正常对照组.结论细胞内钙在EAE动物淋巴细胞的过度活化方面发挥重要作用.
关键词： 共聚焦显微镜检查 实验性变态反应性脑脊髓炎 钙 Fluo-3/AM -
脑梗死病人急性期血小板密度、细胞内游离钙及其功能的变化
目的观察脑梗死病人急性期血小板密度、细胞内游离钙浓度及血小板聚集和释放的变化.方法以梯度离心法制备血小板密度亚群,激光共聚焦显微镜法测定Fluo-3/AM负载后血小板细胞内游离钙荧光强度的变化,以透光度法和介质中ATP的量评价血小板的凝集和释放反映.对照组和实验组血小板分别来自于正常志愿者和脑梗死病人急性期的静脉血.结果①Percoll梯度离心的结果表明,脑梗死病人急性期血液中高密度亚群(比重＞1.062)血小板的数量与对照组 [(24.6±8.6)%,n＝5]比较显著增多[(52.1±11.4)%,n＝6,P＜0.001],上述结果与共聚焦显微镜直接观察的结果一致.②与对照组相比3 μΜ ADP介导的聚集反应增强[(69.4±19.8)%,P＜0.01],介质中ATP的含量为1.26±0.44(P＜0.0 1) .③对照组和实验组细胞内钙的静息水平无明显差异,加10 μΜ ADP后,实验组细胞内钙的荧光强度增加明显(862±319,P＜0.01).结论与对照组比较,脑梗死病人急性期,高密度亚群血小板的数量显著增加.血小板聚集和释放功能明显增强,这一结果可能与细胞游离钙增加有关.
-
钙在CVB3诱导大鼠心肌细胞凋亡中的作用
目的探讨细胞内游离钙[Ca2+] i在柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导培养心肌细胞凋亡中的作用.方法 DNA裂点检测法(3′-末端标记)及透射电镜检测细胞凋亡.Fluo3-AM负载心肌细胞,共聚焦显微镜观察[Ca2+] i荧光强度变化.结果感染24 h心肌细胞内CVB3滴度达峰值.感染10 h未见凋亡的心肌细胞,17、24和36 h凋亡细胞分别为5%、60%和90%,感染17 h心肌[Ca2+] i浓度达峰值.电镜结果提示CVB3感染组存在典型的凋亡心肌细胞.结论 CVB3可诱导培养心肌细胞的凋亡过程.细胞内Ca2+参与凋亡细胞的信息传导过程,并在凋亡早期发挥重要作用.
-
干眼患者泪液膜稳定性检查与共聚焦显微镜泪液膜检查相关性临床分析
目的 观察共聚焦活体泪液膜组织形态学检查与干眼泪液膜稳定性检查相关性.方法对确诊的干眼患者,除进行眼表相关检查,包括裂隙灯、角膜荧光素染色、泪膜破裂时间(BUT)和基础泪液分泌实验(SIt)外,均使用NIDEK公司生产的共聚焦显微镜(ConfoScan 4)进行泪液膜组织形态学检查.结果参照KartG.等分级标准:根据共聚焦显微镜泪液膜的扫描图像将干眼患者分为轻度、中度、重度3组.轻度干眼人群,泪膜破裂时间(BUT)总平均值OD5±2-3秒,OS 5±2-3秒基础泪液分泌实验(SIt)总平均值OD 6±2-4 mm;OS 9±2-5 mm角膜荧光染色以+为主;中度干眼人群,泪膜破裂时间(BUT)总平均值OD 4±2-6秒,OS 4±2-8秒;基础泪液分泌实验(SIt)总平均值OD 5±3-4 mm;OS 5±3-4 mm,角膜荧光染色以++为主;重度干眼人群,泪膜破裂时间(BUT)总平均值OD 2±1-3秒,OS 2±1-4秒;基础泪液分泌实验(SIt)总平均值OD 2±1-4 mm;OS 2±1-4 mm,角膜荧光染色以+++为主.共聚焦活体泪液膜组织形态学检查与干眼泪液膜稳定性检查呈正相关.结论干眼患者泪膜稳定性检查与共聚焦活体泪液膜组织检查呈一致性.共聚焦活体泪液膜组织检查可以做为干眼一种辅助检查.
-
MAP30苦瓜抗HIV蛋白对细胞内HBeAg表达抑制作用的定量分析
目的:研究Mr为30 000的苦瓜抗HIV蛋白(MAP30) 对2.2.15细胞内HBV 基因表达的抑制作用.方法:将HBV DNA转染的人肝癌细胞株2.2.15,在M AP30存在的情况下培养后,进行间接免疫荧光染色,用共聚焦技术定量分析细胞内HBeAg 的表达.结果:与对照组相比较,MAP30培养的细胞内HBeAg荧光量明显减少.结论:MAP30对2.2.15细胞内HBeAg的表达有明显的抑制作用.
-
脂多糖对离体大鼠胰腺腺泡细胞钙稳态的影响
目的:研究脂多糖(LPS)对胰腺腺泡细胞钙稳态的影响,及胞浆内钙超载时钙离子的来源,以探讨LPS致胰腺腺泡细胞损伤的机制.方法:胶原酶法分离胰腺腺泡细胞,F1 uo-3/AM负载后,在无钙或含生理钙离子浓度的培养液中加入不同浓度LPS,采用激光共聚焦显微镜观察单个胰腺腺泡细胞[Ca2+]I.另外采用MTT法检测LPS作用的不同时间点胰腺腺泡细胞的活性.结果:LPS可致胰腺腺泡细胞损伤、细胞内[Ca2+]I显著升高,且呈浓度依赖性(P＜0.05);在含1mmol/L依他酸的培养液中,LPS致腺泡细胞损伤程度明显减轻(P＜0.05)、仅引起胰腺腺泡细胞[Ca2+]I缓慢、微弱的升高,而再次恢复培养液中Ca2+至生理浓度,引发快速、幅度更高而持久的[Ca2+]I变化.腺泡细胞内[Ca2+]I的变化明显先于腺泡细胞的损伤.结论:LPS导致胰腺腺泡细胞内钙超载,主要源于胞外Ca2+内流.钙超载作为早期的病理事件参与腺泡细胞损伤的发生,钙稳态失衡是LPS致胰腺细胞损伤的主要因素之一.
-
氟哌啶醇季铵盐衍生物抑制氯化钾所致大鼠主动脉平滑肌细胞内钙浓度增加
目的：动态观察氟哌啶醇季铵盐衍生物(F3)对血管平滑肌细胞内钙浓度的影响.方法：利用激光共霖焦显微镜动态观察F3(0.01-10μmol/L)对由KC(30 mmol/L)诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙荧光强度增加的作用.结果：KCl可诱发细胞内钙荧光强度迅速增强，F3可以拮抗由KCl诱导的细胞内钙荧光强度增强作用，并呈量效依赖性和时间依赖性，终强度(KCl：67±24；F30.0lμmol/L：57±13；0.1μmol/L：40±13；1 μmol/L：29±9；10μmol/L：20±6).在加入F3后，钙荧光强度的变化快时程是在给F3后O-30 s.结论：F3拮抗血管收缩主要是由于阻断了Ca2+通道.
-
真菌Cercospora beticola的12种毒素贝第高林对癌基因ras转导的肾上腺细胞生长的作用
AIM: To explore different effects of 12 beticolins, Cercospora beticola toxins, on ras-transformed adrenocortical cell growth inhibition and their functional mechanism.METHODS: Beticolin-induced inhibition was measured with survival cell number determined by an automated photocolorimetric method. The penetration of beticolin was examined by confocal microscopy. Ras protein determined by Lowry method were separated by 14 % SDS-PAGE and electroblotted to Immobilon-P transfer membrane and detected with pan-Ras (Ab-3) monoclonal antibody. The Ca2+ chelation by beticolin was investigated using a calcium ionophore. RESULTS: Cell growth inhibition was found dose- and time-dependently at submicromolar level for beticolin-1, -2, and -13 (IC50 ≤250 nmol/L) and for beticolin-0, 6, and-11 (400 nmol/L ＜ IC50 ≤ 500 nmol/L ). The inhibition by beticolin-1 was immediate, independent of cell culture step and not reversible for 3-day treatment. Beticolin-3 and -4 were slightly active (1 μmol/L ＜ IC50 ≤ 2μmol/L) and beticolin-7, -9, -12, and -5 were inactive at micromolar level. The beticolin-induced cell growth inhibition was correlated with the hydrophobicity of these compounds. Beticolin-1 fluorescence in RTAC cells was detected by confocal microscopy whereas beticolin-3 and -12 were not even after a 24 h incubation period.Beticolin-1-induced cell growth inhibition was partially reverted by calcium ionophore suggesting a role of intracellular Ca2 + chelation by beticolin-1 on cell growth inhibition. Furthermore, beticolin-1 blocked up Ras p21 translocation to membrane and induced accumulation of Ras in the cytosol as an inactive form by different ways.
-
维拉帕米、噻庚啶和山莨菪碱拮抗TNFα诱导单个内皮细胞胞内游离Ca2+浓度的增高
目的：研究肿瘤坏死因子(TNFα)对单个内皮细胞胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的影响及维拉帕米(Ver)、噻庚啶(Cyp)和山莨菪碱(Ani)对TNFα诱导[Ca2+]i变化的影响，以探讨TNFα介导休克和Cyp、Ani的抗休克的机制. 方法：人脐静脉内皮细胞株(ECV304)接种于35 mm含有2 mL DMEM培养基的组织培养盘中培养.Fluo-3/AM负载细胞，激光扫描共聚焦显微技术测定单个内皮细胞[Ca2+]i.结果：TNFα使单个内皮细胞[Ca2+]i呈剂量依赖性升高，在60 s内达到峰值，然后下降并保持在基础水平之上.共聚焦扫描图像显示细胞核区[Ca2+]；升高比胞浆区明显，下降比胞浆区慢.维拉帕米1和2，噻庚啶30和60或山莨菪碱20和40 μmol/L均能显著抑制由TNFα 1.2 nmol/L诱导的单个内皮细胞[Ca2+]i升高. 结论：TNFα显著诱导内皮细胞[Ca2+]i升高，可能是TNFα介导休克的重要机制；维拉帕米、噻庚啶和山莨菪碱对TNFα诱导的[Ca2+]i升高有拮抗作用，可能是噻庚啶和山莨菪碱抗休克作用的机制之一.
-
苦参碱、青蒿素和粉防己碱对豚鼠心室肌细胞胞浆钙的影响
目的：比较苦参碱、青蒿素和粉防己碱对分离的豚鼠心室肌细胞胞浆钙的影响。方法：用酶解法急性分离的豚鼠心室肌细胞先用Fluo 3-AM负载，然后用激光扫描共聚焦法检测单个豚鼠心室肌细胞胞浆钙的荧光强度。结果：(1)KCl60 mmol· L-1可升高心室肌细胞胞浆钙荧光强度，其荧光强度从299±19升高到1389±325(P＜0.01).(2)苦参碱和青蒿素在浓度为100μmol·L-1可使KCl60mmol·L-1引起的外钙内流增多，其荧光强度分别从301±14和299±16升高到1495±320和1646±308( P＜0.05).(3)粉防己碱l、10及100μmol·L-1和维拉帕米10 μ mol·L-1可抑制KCl引起的外钙内流。(4)在正常细胞外液中，苦参碱1、10和100 μmol·L-1可使细胞内荧光强度增强，其荧光强度分别从303±27，300±32，296±19上升到441±96，504±112，643±126(P＜0.05)。(5)在无钙细胞外液中，粉防己碱1和10 μmol·L-1可明显抑制咖啡因20mmol·L-1引起的胞浆钙升高(P＜0.05)。结论：苦参碱、青蒿素和粉防己碱对豚鼠心室肌细胞胞浆钙的影响不同。青蒿素和苦参碱可加强电压依赖性钙内流，而粉防己碱与维拉帕米作用相似，抑制这种钙内流。苦参碱本身可以促进外钙内流。
