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不同保存时间肾上腺髓质和皮质ATP含量的变化
探讨不同时间冷缺血保存的牛肾上腺髓质和皮质的三磷酸腺苷(ATP)含量变化,寻找合适的保存时间和条件.获取肾上腺后立即放入冷的Locke's液中运回实验室,保存于4℃冰箱,每隔不同时段取材制成匀浆,取上清液-20℃保存待测.利用生物发光法测定牛肾上腺髓质和皮质的ATP含量.结果表明:牛肾上腺髓质ATP:0h为7.537±1.087μmol/g;6h为7.382±1.790μmol/g,降低2.06%;24 h为6.119±0.822μmol/g,降低18.81%;96 h为2.736±0.440umol/g,降低63.70%.牛肾上腺皮质ATP:0h为1.194±0.206μmol/g;6 h为1.087±0.229μmol/g,降低8.97%;24 h为0.842±0.167μmol/g,降低29.49%;96 h为0.663±0.128umol/g,降低44.45%.在固定温度,固定保存液的情况下,组织缺血后,ATP含量短时间内降低不明显,随时间的延长逐渐下降,为分离细胞选择时间提供了功能指标.
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利用荧光素酶标记的肿瘤细胞建立活体成像动物模型
目的 建立稳定表达荧光素酶的人乳腺癌细胞株并构建适用于小动物活体成像系统观察的裸鼠皮下移植瘤模型.方法 采用脂质体将携带荧光素酶基因的质粒转染到人乳腺癌细胞株MCF-7中,G418筛选出稳定表达荧光素酶的单克隆细胞株.扩增后接种于裸鼠,建立裸鼠皮下移植瘤模型,通过活体动物成像系统监测肿瘤的生长过程.结果 获得了高水平稳定表达荧光素酶的乳腺癌单克隆细胞株,该单克隆细胞株与母细胞系MCF-7具有相似的生长特性.将稳定表达荧光素酶的克隆接种于裸鼠皮下可成瘤,小动物活体成像系统能准确监测肿瘤细胞在体内的生长过程.结论 成功建立了稳定表达荧光素酶的乳腺癌单克隆细胞株.采用活体动物成像系统构建的裸鼠皮下移植瘤模型是拓展肿瘤体内生长、转移及治疗相关研究的理想模型.
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活体动物体内成像技术及其在生物医学中的应用进展
活体动物体内成像是近年来新兴的检测活体动物体内基因表达及细胞活动的光学成像技术,具有操作简便,直观性强的特点.这项技术包括生物发光成像和荧光成像,采用报告基因产生的生物发光、荧光蛋白质或染料产生的荧光作为体内生物光源,与新型冷CCD成像相结合,实时探测活体动物体内生理或病理条件下的细胞和分子事件.本文简要综述了活体动物体内成像技术的原理、应用领域及发展前景.
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光学分子影像学技术在肿瘤中的应用进展
分子影像学技术是一种在活体状态下从微观上显示组织、细胞及亚细胞水平的影像技术,具有实时、无创、精准及灵敏等特点,可在细胞和分子水平进行肿瘤早期筛查和诊断.随着生物发光与荧光成像技术的进步,光学分子影像学技术快速发展.本文就光学分子影像学技术在肿瘤中的应用进展进行综述.
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小动物生物发光活体成像的条件优化与技术扩展研究
目的 为发掘生物发光活体成像技术的灵敏性和应用潜力,进行在体检测条件的优化和技术扩展.方法 将稳定高表达荧光素酶的乳腺癌细胞(4T-1-Luc+)和肝癌细胞(Huh-7-Luc+)接种于BALB/c 小鼠体内,通过活体成像仪进行生物发光检测灵敏度和毛发的影响分析,利用生物发光结合X线扩展活体成像技术.结果 毛发对小鼠皮下接种的肿瘤细胞的生物发光成像有干扰作用,在局部剃除毛发小鼠内体可以检测到50个细胞的光信号值.通过建立X结合发光的检测模型,实现了既能检测发光信号值强度大小,又能比较清晰地观测到部分脏器和发光体(病变组织)的部位.结论 实现了生物发光活体成像技术的检测条件优化,建立了X线结合发光新的检测模式,为扩展小动物活体成像的应用范围奠定了基础.
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生物发光分析法检测P53基因上的突变点
目的建立简单、快速和廉价的基因突变测定方法.方法采用基于生物发光技术的焦测序法测定基因突变,并通过毛细管和气压方式循环递加微量脱氧核糖核酸(dNTP)完成焦测序反应.结果建立了一种供焦测序反应的新型装置;研究了焦测序反应的影响因素和实验条件;实测了P53外显子8上Cys275Ser突变点的3种可能形态(野生型、突变型和杂合型),并提出了快速判断基因突变类型的方法.结论建立的方法简单, 仪器装置成本低、操作简便,可用于检测多种类型的基因突变.
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应用动物活体生物发光技术观察紫杉醇混合胶束的抑瘤效果
活体动物成像技术是近年来发展成熟并得到认可的一种新型影像检测技术,其突出优越性是可以对活体病灶的形态大小进行在体无损伤直观准确检测~([1]).
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小动物活体成像技术在结肠癌肝转移研究中的应用
目的：利用表达荧光素酶基因的稳定细胞株及小动物活体成像平台，观察小鼠SL4结肠癌肝转移及血管新生情况。方法利用表达荧光素酶SL4-luc结肠癌细胞株，通过小动物活体成像系统检测结肠癌肝转移的情况，通过血管新生的近红外线探针观察肝转移灶中血管新生情况。结果利用小动物活体成像系统，生物发光技术确定了结肠癌细胞肝转移，近红外线探针活性确定了肝转移的灶中血管新生。结论在结肠癌肝转移过程中，应用小动物活体成像技术，确定了结肠癌的肝转移及血管新生。
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荧光素酶标记人胃癌细胞裸鼠原位移植模型的建立
目的 建立荧光素酶标记人胃癌原位异种移植模型.方法 将萤火虫荧光素酶作为标记基因导人人胃癌MGC803细胞,建立稳定表达荧光素酶的细胞,将其接种裸鼠胃壁浆膜下,建立胃癌裸鼠原位肿瘤模型.用活体荧光成像系统检测肿瘤的发生发展,并进行小动物超声影像和病理学分析.结果 裸鼠原位成瘤率为100%,活体荧光成像观察发现在接种第7天,就可以观察到肿瘤发光.21 d后肿瘤进入对数生长期,28 d后肿瘤出现明显坏死,平均荧光光子数晕现下降趋势.超声成像发现小鼠胃部有直径为8.39 mm,面积为28.92 mm2瘤块.结论 荧光素酶标记可以实时监测原位异种移植人胃癌生长状况.
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人胰腺癌裸鼠异种移植瘤模型的生物发光成像和超声成像比较
目的 利用荧光素酶基因标记的人胰腺癌细胞株Capan-2建立胰腺癌裸鼠移植模型,评价生物发光和小动物超声成像在移植瘤模型建立中的作用.方法 将表达荧光素酶基因的真核表达载体转入人胰腺癌细胞Capan-2,将1×10<'6>人胰腺癌细胞悬液分别接种于裸鼠胰腺和右后肢皮下,使其成瘤.生物发光成像和小动物超声成像系统观察肿瘤的生长情况.结果 肿瘤细胞原位移植成功率为75%,皮下移植成功率为100%.生物发光成像系统在肿瘤细胞原位接种第7天,可以观察到肿瘤发光;小动物超声成像系统在肿瘤细胞皮下接种第7天,可以测量肿瘤的大小,但在肿瘤细胞原位接种的第7天不能测量肿瘤的大小.另外肿瘤细胞在裸鼠皮下生长的速度比原位生长速度快3倍左右.结论 生物发光成像系统更适用于肿瘤早期监测,为深入研究胰腺癌的发生发展、侵袭转移机制提供理想工具.
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ATP生物发光法在快速检测饮用水菌落总数中的应用
目的 探索利用三磷酸腺苷(ATP)生物发光法快速检测生活饮用水菌落总数的可行性.方法 利用生物发光法快速检测细菌中ATP量,根据细菌中ATP量与菌落总数成正比的关系,推算生活饮用水中菌落总数,并与国标平皿计数法进行对比,分析2种检测方法的相关性和一致性.结果 ATP生物发光法与国标平皿计数法结果在一定范围内呈正相关(r2 =0.804,P＜0.05).ATP生物发光法快速检测生活饮用水定性结果的总体准确率达94.9％.结论 ATP生物发光法具有灵敏、便捷以及相对准确等优点,可用于生活饮用水卫生监督中菌落总数的快速筛检.
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荧光素酶光学成像技术研究进展
活体动物体内光学成像技术的主要功能是追踪并检测标记细胞、微生物及分子在体内的活动和表达情况.该技术可以非侵入性地连续检测活体动物体内的生物学活动,其灵敏度高,使用方便、迅速,已被广泛应用于众多研究领域.就荧光素酶(Luc)光学成像技术的原理及应用进展作一综述.
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生物发光及化学发光研究及应用进展
分别从基础理论和应用技术的角度回顾近年来生物发光和化学发光领域的研究进展.其中有关生物发光基础研究的进展主要包括:新的生物发光物种及生物学意义的发现,发光蛋白和底物的结构及发光机理的揭示等.
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细胞角蛋白19-mRNA定量检测
目的 基于水母发光蛋白生物发光免疫分析技术,建立一种细胞角蛋白19-mRNA(CK19-mRNA)定量检测技术.方法用生物发光分析技术检测淋巴细胞的CK19-mRNA.利用RT-PCR对CK19-mRNA进行放大,PCR引物的5'端用生物素标记,然后用交联了地高辛寡核苷酸探针与目标生物素化的DNA模板杂交.杂交复合物与包被在微孔板上的链亲合素结合,加入标记了水母发光蛋白的地高辛抗体与地高辛特异结合,再加入钙离子激发水母发光蛋白发光,发光强度正比于CK19-mRNA的量.结果 该技术的线性范围可达5个数量级,标准曲线的直线回归系数r=0.98～0.99.探测灵敏度可达22 amol/L的CK19-mRNA产物.重复性检测中,批间变异系数＜70%,批内变异系数＜6%.结果 生物发光分析技术是一种灵敏可靠、非放射性的微量CK19-mRNA定量方法.
关键词： 细胞角蛋白19-mRNA 逆转录聚合酶链反应 生物发光 -
PCR产物生物发光分析技术研究
目的 基于水母发光蛋白生物发光分析技术建立一种PCR产物定量检测技术.方法 利用RT-PCR对CK19-mRNA进行放大,PCR引物的5'端用生物素标记,然后用交联了地高辛寡核苷酸探针与目标生物素化的DNA模板杂交.杂交复合物与包被在微孔板上的链亲合素结合,加入标记了水母发光蛋白的地高辛抗体与地高辛特异结合,再加入钙离子激发水母发光蛋白发光,发光强度正比于CK19-mRNA的量.结果 探测灵敏度可达22 amol/L的RT-PCR产物.结论 该定量检测技术是一种灵敏的、可靠的、非放射性的微量CK19-mRNA定量方法.
关键词： CK19-mRNA:逆转录聚合酶链反应 生物发光 -
化学发光和生物发光法在医学检验中的应用
目的：研究化学发光和生物发光在医学检验中的应用效果。方法随机抽取检验者2012年5月进入我院进行调查，随机分为实验组和对照组，实验组人数20人，对照组20人：实验组采用化学发光对检测者进行检测，对照组采取生物发光对检测者进行检测。两组的用药量与种类严格的一致。分别记录这两组实验对乙肝患者检测出的病毒数量并探其性。结果实验组检测免疫抗体的速度和效率明显高于对照组的速度和效率，经过记录显示后的统计学结果，P＜0．05，表明测试结果具有统计学意义。结论通过化学发光法检测实验结果更准确快速，所以化学发光优于生物发光法。
关键词： 化学发光 生物发光 化学发光免疫分析仪器 -
动物活体成像生物发光间充质干细胞系的构建
目的 建立稳定表达荧光素酶的小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)系.方法 用携带荧光素酶基因的慢病毒GV260感染F3代MSCs系OP9细胞,通过嘌呤霉素筛选建立稳定表达荧光素酶的OP9 luc+细胞;检测荧光素酶报告基因的活性,观察其表达效果;将OP9 luc+细胞经尾静脉注射至C57BL小鼠体内,观察其成像能力.结果 筛选到稳定表达荧光素酶的小鼠MSCs系OP9 luc+;活性测定证明其表达效率高;在动物体内可以清晰成像.结论 构建了稳定高表达荧光素酶基因的小鼠MSCs系OP9 luc+.
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活体内光学成像技术在乳腺癌研究中的应用
活体内光学成像是近年来发展起来的一种新兴技术,本文就该技术的成像原理、成像过程和特点以及在乳腺癌研究领域的应用作一综述.
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光学分子影像的进展与挑战
分子影像是医学影像技术与现代分子生物学结合而产生的一门综合交叉学科,能在分子水平上反映生物体的生理病理变化,对疾病的早期诊断、早期治疗和药物研发具有十分重要的意义[1-4].基于光学成像技术、信息处理技术、分子生物学等学科而产生的光学分子影像,已经成为分子影像领域的研究热点之一[5-8],国内清华大学、华中科技大学、天津大学、华南师范大学等单位也进行了深入研究[9-12].作为一种典型的光学分子影像模态,与其他在体成像技术相比,生物发光断层成像具有灵敏度高、特异性好、结果直观、测量快速、费用低廉等诸多优势,已经发展成为一种理想的活体小动物成像方法,可用于肿瘤发生发展机制研究和新型药物的研发,具有广阔的发展前景[13-17].
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Klenow(exo-)的表达、活性测定及其在焦磷酸测序中的应用
野生的Klenow聚合酶具有3′-5′外切酶活性,会对引物进行切割而造成焦磷酸测序产生错误的延伸信号.为了制备缺失3′外切酶活性的Klenow聚合酶用于焦磷酸测序反应,该研究全合成了外切酶活性缺失突变的Klenow酶基因编码序列,将其插入到表达载体pET28a(+)中构建重组质粒,并转化到大肠杆菌中,表达外切酶活性缺失的Klenow酶(Klenow(exo-)).通过优化诱导温度、诱导时间与诱导剂浓度,得到了Klenow(exo-)的佳表达条件为30℃时诱导表达5h且IPTG浓度为0.1 mmol/L.利用Ni+柱亲和层析法纯化得到了相对分子质量约为67 000的重组Klenow(exo-)酶,并建立了基于生物发光的酶活测定方法,终将其用于焦磷酸测序反应.结果表明,制备的重组酶具有良好的聚合酶活性但缺失了3′外切酶活性,可成功测定DNA待测模板序列,为焦磷酸测序技术提供了一个有效的关键酶.
