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白桦酸对人胰腺癌细胞增殖、迁移、细胞周期和凋亡的影响
目的:研究白桦酸(BA)对人胰腺癌细胞(BxPC-3)增殖、迁移、细胞周期和凋亡的影响.方法:磺酞罗丹明B(SRB)方法测定BA对BxPC-3细胞的增殖抑制率,通过显微镜观察BxPC-3形态变化,用划痕法检测BxPC-3的迁移能力,流式细胞术检测BA对BxPC-3细胞周期的影响,Hoechst33342-PI双染色法观察细胞凋亡,Western Blot印迹检测Bcl-2,Bax的表达.结果:BA在体外明显抑制BxPC-3细胞的增殖,IC50为16.54 mg·L-1,BA在5 mg·L-1时即能抑制细胞的迁移;流式细胞术分析表明,BA可将BxPC-3细胞阻滞于G.期;Hoechst33342-PI双染显示,当BA质量浓度提高到20 mg·L-1以上,可见明显的凋亡细胞和死亡细胞;Western blot的结果说明,随着BA浓度的递增,Bax表达逐渐增加,Bel-2表达逐渐减少,Bel-2/Bax下降,并呈剂量依赖性.结论:BA具有明显抑制BxPC-3细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡的作用,有可能成为一个有效的治疗人胰腺癌药物.
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SW1990和Capan-2红色荧光标记胰腺癌移植肿瘤模型的建立和比较
目的 建立稳定表达红色荧光蛋白基因的人胰腺癌细胞系,为体内监测肿瘤的早期生长及抗肿瘤药物的药效评价建立一种新的肿瘤动物模型.方法以Lipofectamine 2000介导chicken β-actin-RFP-NEO转染人胰腺癌细胞SW1990和Capan-2,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达红色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养.BALB/cA-nu裸鼠皮下接种1×106个发光细胞使其成瘤,活体荧光成像系统观察肿瘤的生长情况.结果 获得了稳定表达RFP的两种不同的人胰腺癌细胞株,将其接种到裸鼠体内可成瘤,利用活体成像系统观察了肿瘤的生长动态过程,并且SW1990肿瘤细胞的生长速度较Capan-2细胞快.结论 用红色荧光蛋白标记的人胰腺癌细胞建立的裸鼠肿瘤模型为胰腺癌的研究和相关药物筛选提供了可进行荧光影像活体、动态分析的动物模型.
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人胰腺癌裸鼠异种移植瘤模型的生物发光成像和超声成像比较
目的 利用荧光素酶基因标记的人胰腺癌细胞株Capan-2建立胰腺癌裸鼠移植模型,评价生物发光和小动物超声成像在移植瘤模型建立中的作用.方法 将表达荧光素酶基因的真核表达载体转入人胰腺癌细胞Capan-2,将1×10<'6>人胰腺癌细胞悬液分别接种于裸鼠胰腺和右后肢皮下,使其成瘤.生物发光成像和小动物超声成像系统观察肿瘤的生长情况.结果 肿瘤细胞原位移植成功率为75%,皮下移植成功率为100%.生物发光成像系统在肿瘤细胞原位接种第7天,可以观察到肿瘤发光;小动物超声成像系统在肿瘤细胞皮下接种第7天,可以测量肿瘤的大小,但在肿瘤细胞原位接种的第7天不能测量肿瘤的大小.另外肿瘤细胞在裸鼠皮下生长的速度比原位生长速度快3倍左右.结论 生物发光成像系统更适用于肿瘤早期监测,为深入研究胰腺癌的发生发展、侵袭转移机制提供理想工具.
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重组人白细胞介素24蛋白对胰腺癌细胞生长的影响
目的 构建人白细胞介素24(IL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中诱导表达,观察纯化后的IL-24融合蛋白导致人胰腺癌细胞(Pane-1)生长抑制的作用.方法 用限制性内切酶从质粒pET30b-II-24中酶切获取人IL-24 cDNA片段.并将该片段与pET42a原核表达载体基因重组,在大肠杆菌中实现重组基因的表达,提取并纯化rhIL-24蛋白.用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和Western blot对表达产物进行鉴定.以不同浓度的重组蛋白IL-24与胰腺癌细胞Panc-1、正常肝胚细胞CCC-HEI,-1共培养48 h,同时设立相应浓度梯度的HIS-GST融合蛋白组对照组.采用四甲基偶氮唑蓝(MTY)法检测各组细胞的生长抑制情况.结果 酶切结果 证实,成功构建了pET42a-IL24原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达.rhIL-24蛋白以浓度依赖性的关系抑制Panc-1细胞的生长,抑制率明显高于HIS-GST蛋白.结论 rhIL-24蛋白对胰腺癌细胞Panc-1生长有抑制作用.
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双氢青蒿素抑制人胰腺癌细胞SW-1990的实验研究
目的:研究双氢青蒿素对人胰腺癌细胞株SW-1990增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测不同浓度双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人胰腺癌细胞株SW-1990增殖的影响；流式细胞术Annexin V-FITC和PI双标染色法检测不同浓度DHA对其凋亡的影响；并且用激光共聚焦显微镜观察在Hoechst 33342/PI荧光双染色下胰腺癌细胞SW-1990形态学变化；RT-PCR检测DHA对胰腺癌细胞SW-1990中端粒酶催化亚单位hTERT mRNA表达的影响.结果:DHA在体外可以明显的抑制SW-1990的增殖,并且具有浓度-时间依赖性；DHA在体外能明显诱导SW-1990细胞的凋亡；DHA可以抑制胰腺癌细胞SW-1990中hTERT mRNA的表达,并且与浓度呈正相关.结论:DHA在体外抑制胰人腺癌细胞SW-1990的增殖、诱导其凋亡,其作用机制可能是抑制了肿瘤细胞中端粒酶催化亚单位hTERT mRNA的表达.
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利拉鲁肽对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能机制
目的：观察胰升糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂利拉鲁肽对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨可能的作用机制。方法体外培养的人胰腺癌细胞系 MIA PaCa-2应用10~1000 nmol/ L利拉鲁肽干预24 h 或100 nmol/ L 利拉鲁肽干预0~72 h。 CCK-8试剂盒检测细胞增殖,RT-PCR 和 Western印迹检测相关基因的 mRNA 和蛋白表达水平。结果 MIA PaCa-2细胞系表达 GLP-1受体。利拉鲁肽可剂量和时间依赖性抑制胰腺癌细胞增殖,上调促凋亡蛋白 Bax 的表达,抑制抗凋亡蛋白 Bcl2的表达。同时,利拉鲁肽还可剂量和时间依赖性抑制胰腺癌细胞的胰岛素受体( INSR)和胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)的表达,并且抑制下游信号分子 Erk1/2和 Akt 蛋白的磷酸化水平。结论利拉鲁肽可抑制人胰腺癌细胞增殖和促进其凋亡,其抑癌效应可能是通过下调 INSR 和 IGF-1R 的表达,继而抑制 MEK/ Erk1/2和 PI3k/ Akt 信号通路所介导的。
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YAP1基因敲除对胰腺癌L3.6细胞增殖及迁移能力的影响
目的:研究胰腺癌细胞中YAP1对胰腺癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法:利用CRISPR-Cas9技术,在人胰腺癌L3.6细胞中敲除YAP1基因,并用Western blot验证;通过MTT比色法及EdU流式检测敲除YAP1前后的癌细胞增殖能力;用细胞划痕及Transwell实验研究迁移能力.结果:成功获得YAP1敲除的L3.6稳定细胞株(YAP1-KO).相对于野生型的L3.6细胞,YAP1-KO细胞的增殖与生长能力明显下降,细胞迁移能力也明显减弱.结论:YAP1基因敲除显著降低胰腺癌L3.6细胞的增殖和迁移能力,可能为靶向治疗胰腺癌提供新的潜在靶标.
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四嗪二甲酰胺抑制胰腺癌细胞AsPC-1增殖及其机制研究
目的 观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外对AsPC-1细胞增殖、凋亡及细胞周期阻滞的影响.方法 以不同浓度ZGDHu-1(0、0.025、0.125、0.25、0.5、1.25、2.5、12.5 μmol·L-1)体外作用于AsPC-1细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;瑞氏染色、Hoechst 33258荧光染色观察细胞形态;Annex-in-V/PI双标记分析细胞凋亡率;流式细胞术分析细胞周期变化;Western blot分析凋亡相关蛋白的表达变化.结果 ZGDHu-1对AsPC-1细胞有明显的增殖抑制作用,呈现时间和浓度依赖性;ZGDHu-1能促进细胞凋亡,染色后出现典型的凋亡特征性改变,Annexin V+/PI-表达明显高于对照组(P＜0.05);当ZGDHu-1浓度达到0.25 μmol·L-1时,开始阻滞AsPC-1细胞周期于G2/M期,当浓度达1.25 μmol·L-1时,大部分细胞停留于G2/M期;ZGDHu-1作用AsPC-1细胞48 h后,能明显激活caspase-3酶原;促凋亡蛋白Bax的表达水平较对照组升高.结论 ZGDHu-1在体外能够抑制AsPC-1的增殖,其主要通过激活caspase-3诱导细胞凋亡,同时ZGDHu-1能阻滞AsPC-1细胞周期于G2/M期.
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埃罗替尼联合培美曲塞序贯化疗对提高胰腺癌细胞敏感性的机制研究
目的 探讨埃罗替尼联合培美曲塞序贯化疗对提高人胰腺癌PANC-1和BXPC-3细胞敏感性的细胞学机制.方法 qPCR-HRM法检测细胞EGFR和K-ras基因突变;实验分为对照组、培美曲塞及埃罗替尼单药组、同时作用组、培美曲塞序贯埃罗替尼组、埃罗替尼序贯培美曲塞组.Western blotting检测各组细胞EGFR、HER3、AKT、c-MET蛋白及磷酸化表达.结果 ① PANC-1细胞K-ras基因2外显子为突变型.②培美曲塞序贯埃罗替尼组p-EGFR、p-HER3、p-AKT与其他各组相比被显著抑制(P<0.05).③ c-MET的蛋白及磷酸化表达在各处理组之间均无明显变化.结论 培美曲塞可上调p-EGFR、p-HER3、p-AKT磷酸化水平,使后续埃罗替尼敏感性增强是序贯协同增效作用的机制之一,为两者联合治疗晚期胰腺癌提供理论依据.
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肿瘤坏死因子-α基因联合氟尿嘧啶治疗胰腺癌的研究
目的 探讨肿瘤坏死因子(TNF)-α基因与氟尿嘧啶(5-FU)联合治疗胰腺癌的作用.方法 应用MoMLV逆转录病毒载体,将TNF-α基因转导致人胰腺癌细胞株PC-3,经氨基糖甙类新霉素衍生物Geneticin(G418)筛选获得了抗性克隆.用逆转录聚合酶链方法检测胰腺癌细胞株转染TNF-α的基因表达情况,同时用放线菌素D处理后的小鼠成纤维肉瘤细胞L929检测转基因细胞表达TNF-α的活性,并观察TNF-α基因和5-FU联合治疗胰腺癌的协同作用.结果 TNF-α基因在人胰腺癌中整合并表达有活性的TNF-α.转染TNF-α基因的细胞生长受抑制.TNF-α基因与5-FU联合应用提高了对胰腺癌的抑制作用.结论 TNF-α基因与5-FU联合应用对胰腺癌增殖的抑制有协同作用,并可减少5-FU的药量,对胰腺癌的综合治疗有潜在的临床应用价值.
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吉西他滨与培美曲塞对人胰腺癌细胞BXPC-3及PANC-1生长的体外作用
目的 探讨吉西他滨与培美曲塞不同用药次序联合应用对人胰腺癌细胞BXPC-3及PANC-1生长的影响及可能的细胞学机制.方法 MTT法测细胞增殖;流式细胞术测细胞周期.结果 吉西他滨(10~(-7)-10mg/ml)和培美曲塞(10~(-7)-10mg/ml)均明显抑制2株细胞生长,作用呈现浓度依赖性和时间依赖性.二者联合对2株细胞生长的影响与给药次序有关:先用培美曲塞24 h后序贯用吉西他滨对2株细胞的抑制作用明显强于同时给药(P<0.05)和先用吉西他滨24 h后序贯用培美曲塞(P<0.05).吉西他滨联合培美曲寒对BXPC-3细胞周期结果显示:与对照组相比,吉西他滨与培美曲塞分别将细胞周期阻断在G1期和S期(P(0.05);同时给药G2期比例减少(P<0.05);先用吉西他滨后用培美曲塞将细胞周期阻断在G1期(P<0.05);先用培美曲塞后用吉西他滨将细胞周期阻断在S期(P<0.05).结论 吉西他滨与培美曲塞均能抑制人胰腺癌细胞BXPC-3及PANC-1生长,二者联合具协同作用,先用培美曲塞24 h后用吉西他滨对2株细胞的抑制作用强,其协同作用与他们对细胞周期的影响无关.
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人生长激素对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨人生长激素对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型,将40只裸鼠随机分为4组:对照组、重组人生长激素(rhGH)组、曲古抑菌素A(TSA)组和rhGH+TSA组,各组腹腔注射给药,2周后,观察各组药物对肿瘤生长的影响.MTF法检测肿瘤细胞的增殖,免疫组织化学检测肿瘤细胞增殖,缺口末端标记(TUNEL)法检测移植瘤组织的细胞凋亡.结果 与对照组相比,TSA组和rhGH+TSA组S期细胞、肿瘤质量及细胞增殖指数明显降低(P<0.05),凋亡指数、G0/G1期及G2M期细胞明显升高(P<0.05),但TSA组与rhGH+TSA组以及rhGH 组与对照组各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 人生长激素在体内对人胰腺癌细胞既无明显的增殖作用,也无明显的凋亡作用.
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Notch1对人胰腺癌细胞迁移及侵袭能力影响的体外实验研究
目的 探讨人胰腺癌细胞转染Notch1后细胞迁移及侵袭能力变化与骨架蛋白的相关性.方法 将携带Notch1的慢病毒载体转染人胰腺癌SW-1900细胞株,经流式细胞筛选后培养、传代.将细胞分为空白组(未经处理)、空载组(空载体转染)和病毒组(慢病毒转染),3组细胞分别利用细胞划痕和Transwell小室检测细胞迁移、细胞侵袭能力;采用Western Blot检测不同组细胞株中Notch1、Fascin、F-actin蛋白表达水平变化.结果 成功建立稳定转染Notch1的胰腺癌SW-1900细胞株.空白组、空载组、病毒组划痕试验及Transwell小室显示:24 h后病毒组和空白组划痕间距无差异,2组细胞粘附到基质胶基底膜的数目均很少,大体相同;而48,72 h后病毒组较空白组划痕间距变窄,细胞侵袭透膜数较多,差异有统计学意义,上调Notch1后能明显促进SW-1900细胞的迁移和侵袭能力(P＜0.05).随着时间延长,细胞穿膜率增高和划痕间距明显减小;Western Blot检测结果显示,空白组和空载组中Notch1、骨架蛋白Fascin、F-actin的蛋白表达相近,差异无统计学意义(P＞0.05),但病毒组与其他2组相比,Notch1、Fascin、F-actin的蛋白表达明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人胰腺癌细胞中Notch1蛋白高表达可以增强细胞迁移、侵袭能力和细胞中Fascin和F-actin蛋白含量.胰腺癌细胞侵袭和转移能力的增强其机制之一可能是通过加强细胞中微丝微管运动性来实现的.
