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小分子单克隆抗体的制备与敲除技术研究进展
随着单克隆抗体技术应用的愈加广泛,其生产技术也日臻完善.小分子单克隆抗体技术也日益成为人们研究的热点课题.中药小分子单克隆抗体技术的应用也日益广泛,这门技术给中药有效成分的敲除提供有力的技术支持.该文就小分子单克隆抗体制备与敲除技术进行了综述.就其制备过程中的几个步骤,如:半抗原的制备,半抗原与载体偶联,人工抗原的鉴定及偶联比率的测定,动物免疫与单克隆杂交瘤细胞株的建立,单克隆抗体的大规模制备;小分子单克隆抗体的敲除技术的免疫亲和色谱柱的方法进行了详尽的阐述.笔者相信这门技术会使得中药的研究上更高一个层次,并且提高中药研究的国际化水平.
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脉冲式破伤风类毒素聚乳酸微球动物免疫效果研究
目的研究破伤风类毒素聚乳酸微球在动物体内的免疫效果及影响因素.方法观察破伤风类毒素聚乳酸微球免疫动物后1年中,动物血清抗体反应及免疫记忆反应的规律.结果微球中抗原释放为脉冲式,释放时间与聚乳酸分子量、微球载药量及粒径有关,微球引起的抗体反应显著高于破伤风类毒素溶液一次免疫,与溶液3次免疫效果相似.结论创制了一种新型脉冲式释药系统,一次注射完成全程免疫,有巨大的应用价值.
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实验动物肝组织制片和胶原纤维染色方法的改进
在组织制片中,实验动物免疫损伤性肝纤维模型组织切片难度较大,因此我们改变了组织固定、脱水、透明、浸蜡和切片与H、E染色,提高了制片质量.特别是根据实验病理组织形态变化的要求,进行二种特殊对比染色,所选用和改进的显示胶原纤维的Siriusred(天狼星红)[1]和Massor三色染色法[2],已得到了较好的染色效果.
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大鼠炎症性肠病模型的建立与评价
炎症性肠病(IBD)是一类原因不明的慢性胃肠道疾病,免疫功能异常在IBD的发病过程中发挥重要作用已成共识,为进一步研究免疫异常致病的具体机制,建立理想的动物免疫致病模型对阐明该病的病因、病变发展规律以及有效的防治有重要意义,本实验拟用二硝基氯苯(DNCB)对中型大鼠造模,观察中型大鼠对DNCB的耐受性,探索佳的DNCB用药浓度、剂量和作用时间.
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环境中野生动物免疫毒理学研究概况
环境化学物对人体免疫功能不良影响的研究通常都在实验室条件下用啮齿类动物进行.实验室动物研究可以对环境化学物污染对人群的危险性提供有价值的评价,同时也为外源化学物的免疫毒理学机制研究提供了必要的手段.但是,环境中广泛存在的野生动物因长时间处于受化学物污染的条件下生活,开展野生动物免疫毒理学研究将更有利于探讨环境化学物对生物群体免疫毒性的潜在影响,从而对环境污染危害人群健康的可能性做出评价和预测.此外,野生生物免疫毒理学研究还可以直接反映出环境化学污染物对不同种属野生动物自身免疫功能的损害,为保护野生动物提供科学依据.本文就近年来国外已开展的野生动物免疫毒理学调查研究概况及其流行病学调查要点做一综述.
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Myostatin基因疫苗动物免疫效果的初步研究
目的:检测Myostatin基因疫苗的免疫效果,观察其对免疫动物的影响,为Myostatin基因疫苗的应用提供实验研究.方法:以Myostatin基因疫苗pVAC-TT-Ms免疫小鼠,ELISA法测定其免疫小鼠血清的抗体滴度,通过全自动生化分析仪检测血清指标.以组织化学染色(HE)染色检测Myostatin基因疫苗对免疫小鼠骨骼肌的影响.利用Scion Image 4.02 分析Myostatin基因疫苗对免疫小鼠肌纤维横截面积的影响.结果:基因疫苗Myostatin能够诱导小鼠产生针对Myostatin的抗血清.与正常对照组比较,基因疫苗pVAC-TT-Ms免疫的动物平均体重增加了9.8%,股四头肌、腓肠肌和胸大肌分别增加了24.1%、10.9%和20.3%.结论:基因疫苗Myostatin能够诱导小鼠产生针对Myostatin的特异性中和抗体.Myostatin基因疫苗免疫的动物体重增加,肌细胞有肥大现象,肌肉质量明显增加.
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牙龈卟啉单胞菌基因疫苗pcDNA3.1(+)/kgpcd免疫原性研究
目的:研究重组质粒pcDNA3.1(+)/kgp cd免疫原性,并观察目的基因编码的蛋白在小鼠肌肉及颌下腺组织中的原位表达情况.方法:重组质粒pcDNA3.1(+)/ kgp cd经肌肉注射和颌下腺区注射免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA方法检测免疫后BALB/c小鼠血清中IgG和唾液中sIgA抗体水平;用免疫组织化学染色观察目的基因编码的蛋白在小鼠组织中的表达.结果:重组质粒经肌肉注射免疫可产生高水平的特异性血清IgG抗体,颌下腺区注射可同时诱导高水平的唾液中sIgA和血清中IgG抗体;骨骼肌、颌下腺导管内、腺泡腔内可见阳性着色.结论:重组质粒pcDNA3.1(+)/kgp cd经颌下腺注射可同时诱导黏膜免疫和全身免疫应答,可作为有效免疫原,这为免疫牙周炎模型定菌鼠实验提供了依据.
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MRSA-PBP2a蛋白的体外诱导、抗体制备及鉴定
目的:探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant staphylococcus aureus, MRSA)蛋白的体外诱导;抗MRSA-PBP2a(pencillin binding protein 2a, PBP2a)蛋白抗体的制备及效价鉴定. 方法:采用NCCLS推荐的琼脂板稀释法和PCR法筛选MRSA,以β-内酰胺抗生素作为诱导剂,进行体外诱导产生PBP2a蛋白. 免疫家兔后产生抗MRSA-PBP2a蛋白抗体,采全血分离血清, 用改良双向免疫扩散法进行抗体滴度测定. 结果:11株临床分离的金葡菌采用二种方法均检测出2株MRSA,SDS-PAGE和Western blot结果均显示从MRSA菌株中均能诱导出了PBP2a蛋白;免疫后均能产生较高的效价抗体,分别为1: 32和1: 64. 结论:成功诱导出产生耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a蛋白菌株,并制备获得PBP2a蛋白,以及制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a蛋白抗体,为研究MRSA-PBP2a蛋白活性、MRSA的免疫治疗和MRSA快速鉴定方法学的建立奠定基础.
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日本脑炎病毒内影像组抗独特型单克隆抗体的制备及初步鉴定
目的 制备具有内影像作用的分泌日本脑炎病毒(JEV)抗独特型单 克隆抗体(AId mAb)杂交瘤细胞系. 方法 以传统免疫法和硝酸纤维素膜 (NC膜)皮下包埋免疫法，用具有高中和 活性的抗JEV mAb 2H4和2F2分别免疫BALB/c小鼠，按常规方法融合，经多种ELISA、表面 等 离子共振和动物免疫实验筛选并鉴定具有内影像作用的AId mAb. 结果 获 得了3株可分泌AId mAb的杂交瘤细胞系. 结论 所获AId mAb均以能模拟JE V抗原，为JEV受体的分离、纯化提供了条件.
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人兽共患病疫苗--“一体化健康”模式
本综述着重于描述动物免疫作为预防人类疾病（人兽共患病）的一种方法。描述了所用疫苗的三种类型，所举例子有成功例子也有失败例子。Ⅰ类疫苗用于保护人和有经济价值的动物，这二者在病原体传播循环中都不起什么作用。讨论了开发Ⅰ类疫苗过程中，动物健康产业和人健康产业与管理机构之间合作的好处，描述了在动物和人中都能使用的疫苗的唯一例子（西尼罗病毒疫苗）。Ⅱ类疫苗是用于家养动物的疫苗，以免疫家养动物作为预防动物和人疾病的方法。Ⅱ类疫苗所涉及的病原体直接或间接（譬如通过节肢动物媒介）由动物传染给人。列举了一些使用Ⅱ类疫苗的例子，如抗布氏病、大肠杆菌 O157、狂犬病、裂谷热、委内瑞拉马脑炎和亨德拉病毒等。Ⅲ类疫苗是用于免疫野生动物作为预防病原体传染给人和家养动物的方法。例子有靶向传染源的口服诱饵狂犬疫苗、牛分支杆菌疫苗和莱姆病疫苗。如果兽用疫苗开发速度快、成本低，那么，基于动物免疫的一些干预措施可导致公共健康快速且费用相对低廉的进展。重点强调了以疫苗为基础方法预防新发人兽共患病的机会，这些疾病把兽用与人用医学统合成一个整体（One Health para-digm，“一体化健康”模式）。
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鼠疫F1单克隆抗体建株过程中的动物免疫
目的探讨在建立抗鼠疫F1抗原的单克隆抗体杂交瘤株的过程中抗原免疫的剂量及免疫方法.方法采用F1抗原常规免疫、改良的F1抗原脾内注射免疫以及EV菌免疫3种方法免疫6～8周龄,体重为10～20g,健康的雌性BALB/c小鼠,并用间接ELISA法检测尾血中的抗体. 结果在常规免疫中,200μg 组和100μg组免疫效果优于50μg组,而200μg组和100μg组免疫效果基本一致;改良的F1抗原脾内注射免疫,血中抗体效价较高;EV菌免疫的效果不理想. 结论用F1抗原常规免疫小鼠,免疫剂量用100μg/只较为合适;若要缩短免疫时间,采用改良的脾内注射免疫法是理想的选择.
