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中药注射剂溶血度测定的3种方法比较
体外溶血试验是中草药注射剂特别是供静脉使用的中药注射剂的必要检查项目之一.经典的常规的体外溶血试验试管观察法,是用肉眼来观察判断溶血情况[1～3],主观误差较大,曾有作者探讨了利用仪器测定溶血度的方法[4,5],但仪器测定法与经典的试管肉眼观察法是否能建立一定的联系,以建立更为客观的体外溶血度试验法,未见报道,本文采用同一种类同一批次的中药注射剂对3种溶血试验法进行了比较.报道如下.
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雪莲花醇提物对大鼠组织和红细胞的抗氧化活性
目的研究雪莲花醇提物(ESLHM)的抗氧化活性.方法用·HO生成系统Fe2++维生素C诱导大鼠心、肝、肾组织匀浆脂质过氧化,用TBA比色法测定MDA含量;用NBT还原法测酵母多糖A刺激大鼠中性粒细胞产生的O2-;用分光光度法测H2O2诱发的大鼠红细胞溶血度.结果对照组大鼠心、肝、肾匀浆经Fe2++维生素C溶液诱发后MDA含量较空白组升高(P＜0.01),中性粒细胞受酵母多糖A刺激后O2-生成较空白组升高(P＜0.01),红细胞经H2O2诱发后溶血度较空白组升高(P＜0.01).而6.3,12.5,50,50,100,200μg·L-1ESLHM能不同程度抑制Fe2++维生素C诱导的大鼠心、肝、肾脂质过氧化产物MDA生成,其抑制心、肝、肾MDA生成的IC50分别为29.4,32.9,31.4ug·L-1,其量效关系均呈负相关,相关系数分别为-0.905,-0.912,-0.908,相关性检验P值均＜0.01;能不同程度抑制酵母多糖A刺激中性粒细胞生成O2-,其抑制中性粒细胞生成O2-的IC50为24.6μg·L-1,其量效关系呈负相关,相关系数为-0.887(P＜0.01);能不同程度抑制H2O2诱发的红细胞氧化溶血,其抑制红细胞氧化溶血的IC50为57.6μg·L-1,其量效关系呈负相关,相关系数为-0.905(P＜0.01).结论雪莲花醇提物通过清除·HO,O2-及H2O2发挥抗氧化活性.
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溶血标本对生化检验准确性的影响
目的 探究溶血标本对生化检验结果 准确性的影响.方法 选取2014年4月—2016年12月在我院健康体检中心接受体检的健康人200例作为研究对象,所有研究对象均抽取两份血液标本进行生化检验,一份为未溶血标本,一份为人工溶血处理的溶血标本;收集两种标本的生化检验结果 .结果 溶血组的AST、CK、CK-MB、TP、K+均高于未溶血组,且Na+低于未溶血组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组的ALB、UA、Scr、TG、HDL对比,差异不具有统计学意义(P>0.05);随着溶血浓度的增加,AST、CK、CK-MB、TP、Na+、K+的变化值也明显增大,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 血液标本的溶血性会对部分生化检验指标的结果 产生影响,而检验结果 的变化情况与溶血标本的Hb有关,可以通过溶血标本的Hb浓度校正生化检验结果 .
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维生素E、C和β-胡萝卜素对老年人细胞氧化损伤影响的研究
目的:探讨不同剂量天然抗氧化β-胡萝卜素(β-C)联合维生素E(VE)和维生素C(VC)干预,对老年机体淋巴细胞增殖活性、红细胞溶血度、红细胞膜流动性和尿中DNA烷化损伤代谢产物O6-甲基鸟嘌呤(O6-MeG)的影响.方法:选择300名60～75岁老年人,经知情后同意参加,随机分为5组:1组至3组每天补充VE 200 mg+VC 300 mg的同时再分别补充16.7 mg、8.4 mg和5.6 mg天然β-C,4组(VE 200 mg/ d+VC 300 mg/d);5组(对照组)VE 5 mg/d;饭后1次口服,连服16 w.6补充前后分别用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测淋巴细胞增殖活性;H 2O2诱导溶血法测红细胞溶血度;荧光偏振法测红细胞膜流动性;高效毛细管电泳法测O6-MeG.结果:干预后1组至4组淋巴细胞增殖活性增高,显著高于其干预前,也明显高于干预后第5组,且干预后第1组显著高于第4组;干预后1组至4组红细胞溶血度均显著低于其干预前,也明显低于干预后第5组;干预后1组至4组红细胞膜荧光偏振度ρ值和微粘度η值均明显低于干预前;干预后1组至4组O6-MeG浓度低于其干预前,也低于干预后第5组.结论:天然抗氧化β-C联合VE、VC干预可提高老年机体淋巴细胞增殖活性,改善红细胞功能,降低DNA的烷化损伤,提高老年机体细胞的抗氧化功能.
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牛磺酸对S180移植瘤小鼠抗氧化作用
目的 观察牛磺酸对S180移植瘤小鼠抗氧化能力的影响.方法 60只昆明小鼠随机分为牛磺酸低(A)、中(B)、高(C)剂量组(分别在饮水中添加0.5%,1.0%,1.5%的牛磺酸),环磷酰胺阳性对照组(D),肿瘤阴性对照组(E).各组小鼠左前肢腋窝皮下均接种S180细胞悬液0.2 ml.24 h后,阳性对照组腹腔注射环磷酰胺20 mg/(kg·bw).1周后处死小鼠,测定血浆、肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力、丙二醛(MDA)含量;采用H2O2诱发氧化溶血实验检测红细胞的溶血度;采用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术测定血淋巴细胞的DNA断裂情况.结果 (1)与阴性对照组比较,牛磺酸各剂量组小鼠血浆中MDA含量降低(P<0.01),血浆、肝脏的SOD和GSH-Px活力增强(P<0.05或P<0.01).(2)牛磺酸低、高剂量组溶血度与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).(3)用5,10和25 μmol/L H2O2处理血淋巴细胞后,牛磺酸各剂量组的DNA损伤较阴性对照组低,其中10 μmol/L H2O2处理的牛磺酸中、高剂量组和25 μmol/L,H2O2处理的牛磺酸高剂量组的DNA损伤与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 牛磺酸能提高S180移植瘤小鼠的抗氧化能力,可能与提高机体抗氧化酶活力,减少脂质过氧化物含量,保护红细胞膜,拮抗DNA氧化损伤有关.
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人参皂苷溶血测定的实验条件研究
目的:确定人参皂苷溶血测定中优的实验条件.方法:用紫外分光光度法测定溶血度,分别对比了离心速度和时间、水浴时间、灭菌和非灭菌缓冲盐溶液及生理盐水溶液、不同酸碱度环境下的检测波长对实验结果的影响.结果:确定优的实验条件为:用生理盐水做溶剂;溶血测定中溶液的水浴条件为37℃水浴2h;离心条存为转速3000r/min离心10min;在575nm处用紫外分光光度计测定其吸光度,并计算溶血度.结论:该方法稳定性和重现性均较好,适用于人参皂苷的溶血测定.
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紫外分光光度法测定中草药注射液的溶血度
根据红细胞破裂释放出来的血红素在57nm波长处有大吸收的原理,采用紫外分光光度法精确测定中草药注射剂的溶血程度.具有操作简便,稳定性好,能消除常规试管观察法带来的主观误差等优点,是一种值得推广的方法.
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侧柏叶中黄酮类化合物对H2O2诱导的人红细胞氧化作用的影响
目的:观察侧柏叶中黄酮类化合物对H2O2诱导的人红细胞氧化作用的影响.方法:用健康成人静脉血制成1%RBC悬液,分为H2O2损伤组、损伤加不同浓度的黄酮组、损伤加不同浓度的丹参组(阳性对照),孵育后测定RBC溶血度和RBC悬液中丙二醛(MDA)浓度.结果:加药组的溶血度及MDA的含量分别下降,并与药物浓度相关.结论:黄酮类化合物具有抑制H2O2引起的人红细胞溶血和红细胞脂质过氧化作用.
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中药祛癍方醇提物对大鼠组织和红细胞的抗氧化活性
目的:研究中药祛癍方醇提物(ECMH)的抗氧化活性.方法:用·OH生成系统Fe2++抗坏血酸诱导大鼠心、肝、肾组织匀浆脂质过氧化,用硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定丙二醛(MDA)含量;用氯化硝基四氮唑蓝(NBT)还原法测酵母多糖A刺激大鼠中性白细胞产生的O-2;用分光光度法测H2O2诱发的大鼠红细胞溶血度.结果:中药祛癍方醇提物抑制MDA及O-2生成;对抗溶血反应.结论:中药祛癍方醇提物通过清除·OH,O-2及H2O2发挥抗氧化活性.
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羊脱细胞真皮基质的体内外毒性实验
目的:利用溶血反应、热原反应和细胞毒性反应实验了解羊脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)在动物体内外的毒性反应强度.方法:溶血反应:分别制作交联型和非交联型羊ADM的浸提液,为交联组和非交联组;并设置阳性对照组10mL灭菌注射用水,阴性对照组10 mL 0.9％氯化钠溶液.将新鲜抗凝稀释兔血加入实验组和对照组试管中,离心后取上清液测量吸光度值,计算溶血度.热原实验:按照条件入选16只新西兰兔,分为初试A,B两组各3只和复试C,D两组各5只.分别将交联与未交联的两种ADM浸提液注射人两组新西兰兔体内,注射后每隔0.5 h测量一次体温,共测量6次,以6次中高一次减去正常体温即为该兔的体温升高度数.据此判断是否符合生物制品热原实验的评价标准.MTT实验:收集对数期的小鼠成纤维细胞细胞,种植于含有不同浓度羊ADM浸提液的培养基,测量吸光度值进行细胞活力测定.结果:实验A,B组溶血度均小于5％,热原反应测得新西兰兔体温升高之和低于1.8℃.MTT实验显示10％～90％羊ADM浸提液培养基对体外细胞的毒性为1级,100％的羊浸提液对体外细胞的毒性为2级,交联型与非交联型组的浸提液对体外细胞的毒性的无显著性差异(P＞0.05).均对体外细胞的增殖影响轻微.结论:羊DM植入新西兰兔体内引起的溶血反应和热原反应在评价标准之内,在体外对细胞的增殖和活力影响不明显.
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利巴韦林注射液对不同人群血红细胞溶血的影响
[目的]通过测定三种不同浓度利巴韦林注射液对健康成人、儿童和呼吸系统疾病患者各30例血中红细胞的溶血度,探讨该药经血管内给药是否直接导致溶血,以及三种不同浓度对三组人群的溶血机率,为临床安全用药提供参考依据.[方法]用肉眼观察法和可见分光光度法测定利巴韦林注射液对三组人群血红细胞的溶血情况.[结果]肉眼观察三种不同浓度的利巴韦林注射液对三组人群的人血红细胞均无溶血作用,可见分光光度法测得溶血度均在20%以下.[结论]利巴韦林注射液(0.5～1.5mg/ml)对人血红细胞的溶血度符合静脉用药要求.
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水红花子醇提物抑制大鼠组织脂质过氧化反应的体外作用研究
目的 研究水红花子醇提物的抗氧化活性.方法 用·OH生成系统Fe2++抗坏血酸诱导大鼠心、肝、肾组织匀浆脂质过氧化,用TBA比色法测定MDA含量;用NBT还原法测酵母多糖A刺激大鼠中性白细胞产生的O-2;用分光光度法测H2O2诱发的大鼠红细胞溶血度.结果 6.3、12.5、25、50、100、200 μg/L EFPO能不同程度抑制Fe2++抗坏血酸诱导的大鼠心、肝、肾脂质过氧化产物MDA生成,其抑制心、肝、肾MDA生成的IC50分别为31.8、32.5、40.2 μg/L,量效关系均呈负相关,r分别为-0.886、-0.874及-0.918(P＜0.01);能不同程度抑制酵母多糖A刺激中性粒细胞生成O-2,IC50为31.9μg/L,量效关系呈负相关,r为-0.873(P＜0.01);能不同程度抑制H2O2诱发的红细胞氧化溶血,IC50为56.2μg/L,量效关系呈负相关,r为-0.888(P＜0.01).结论 水红花子醇提物通过清除·OH、O-2及H2O2发挥抗氧化活性.
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紫外分光光度法测定吐温80对人红细胞和兔红细胞的溶血度
目的:寻找一种客观评价吐温80溶血性的方法.方法:在414nm波长处,采用紫外分光光度法进行测定.结果:实验选用的TW浓度在0.5%时,对人红细胞和兔红细胞均无溶血作用;吐温浓度在1.0%以上时,对2种红细胞表现出不同程度的溶血作用;常规目测方法观察到溶血的吐温起始浓度为1.5%.结论:紫外分光光度法可以作为筛选注射剂所使用吐温的客观评价方法.
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太子参醇提物对大鼠组织和红细胞的抗氧化活性
目的:研究太子参醇提物的抗氧化活性及其机制. 方法:用(·)HO生成系统Fe2++抗坏血酸诱导大鼠心、肝、肾组织匀浆脂质过氧化,TBA比色法测定MDA含量;NBT还原法测酵母多糖A刺激大鼠中性粒细胞产生的O2-;分光光度法测H2O2诱发的大鼠红细胞溶血度. 结果:6.7, 13.4, 26.8, 53.5, 107.0和214.0 μg/L 太子参醇提物不同程度抑制Fe2++抗坏血酸诱导的大鼠心、肝、肾MDA生成,其抑制心、肝、肾MDA生成的IC50分别为57.0, 51.5及53.2 μg/L, 其量效关系均呈负相关,相关系数分别为-0.891, -0.883, -0.893 (P均<0.001);不同程度抑制酵母多糖A刺激大鼠中性粒细胞生成O2-及红细胞氧化溶血,IC50分别为83.1和86.5 μg/L,其量效关系均呈负相关,相关系数分别为-0.894和-0.901 (P均<0.001). 结论:太子参醇提物通过清除(·)HO, O2-及H2O2而发挥抗氧化活性.
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鸡血藤醇提物清除氧自由基的实验研究
目的研究鸡血藤醇提物的抗脂质过氧化作用及其机制.方法用Fenton反应产生的羟自由基(·OH)诱发大鼠心、肝、肾组织匀浆产生脂质过氧化,用TBA比色法测定丙二醛(MDA).用酵母多糖A刺激中性白细胞产生超氧阴离子自由基(O2-),用NBT还原法测定O2-.用H2O2诱发红细胞氧化溶血,用比色法测定溶血度.结果13.6～217.0μg·L-1鸡血藤醇提物(ESSD)可浓度依赖性抑制(Fe2++抗坏血酸)诱导的大鼠心、肝、肾MDA生成,其抑制心、肝、肾MDA生成的IC50分别为42.3 μg·L-1,43.0μg·L-1及44.0μg·L-1;浓度依赖性抑制酵母多糖A刺激大鼠中性白细胞生成O2-,其IC50为36.5μg·L-1;对H2O2诱发大鼠红细胞氧化溶血具有浓度依赖性抑制作用,其IC50为72.9μg·L-1.结论ESSD通过清除·OH、O2-及H2O2发挥抗氧化作用.
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半支莲的抗氧化活性研究
目的研究半支莲醇提物的抗氧化活性.方法用Fenton反应产生的OH-诱发大鼠肝、肾组织匀浆产生脂质过氧化,用TBA比色法测定MDA.用酵母多糖A刺激中性白细胞产生O2-,用NBT还原法测定O2-.用H2O2诱发红细胞氧化溶血,用比色法测定溶血度.结果75～600nmol·L-1EHSB能够浓度依赖性抑制Fe2++抗坏血酸诱导的大鼠肝、肾MDA生成,浓度依赖性抑制酵母多糖A刺激大鼠中性白细胞生成O2-,对H2O2诱发大鼠红细胞氧化溶血具有浓度依赖性作用.结论EHSB是一种有效的自由基清除剂及抗氧化剂.
