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逆灸对力竭运动大鼠心肌组织中AMPK、mTOR的影响
目的:观测逆灸对力竭运动大鼠心肌组织中一磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的影响,探讨逆灸抗力竭运动心肌损伤的作用机制.方法:将18只雄性SD大鼠随机分为空白组、力竭组和逆灸组,每组6只.空白组大鼠每天被操作者用手轻按于操作台上,套上特制鼠套,保持5 min,不进行任何干预;力竭组大鼠前10 d不做处理, 逆灸组取"足三里""关元"进行干预,每穴每日灸5壮,连续10 d,第11 d力竭组和逆灸组大鼠力竭游泳后取材,并记录两组大鼠达到力竭所用时间.采用HE染色观察各组大鼠心肌组织炎性反应;比色法检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;免疫抑制法检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性;Elisa检测血清中肌钙蛋白T(cTnT)含量;Western blot测定心肌组织中一磷酸腺苷活化的蛋白激酶α2(AMPKα2)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达.结果:逆灸组较力竭组到力竭状态所需时间延长[(4 831.17±689.88) s vs (3 509.50±1 232.49) s,P<0.05],心肌组织结构清楚,炎细胞浸润减轻;与空白组比较,力竭组血清LDH、CK-MB、cTnT升高(均P<0.05);MDA含量升高,SOD活性下降(均P<0.05);心肌组织AMPKα2表达升高、mTOR下降(均P<0.05).与力竭组比较,逆灸组血清LDH、CK-MB、cTnT下降(均P<0.05);MDA含量下降,SOD活性升高(均P<0.05);心肌组织AMPKα2表达升高、mTOR下降(均P<0.05);AMPKα2与mTOR呈负相关(r=-0.764,P<0.05).结论:逆灸可能通过调控AMPK/mTOR表达诱导相应的信号级联反应对抗一次性力竭运动大鼠心肌组织损伤.
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乳腺癌组织中mTOR/p70S6K信号通路表达及临床意义
目的：分析哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/70 kDa核糖体蛋白S6激酶（mTOR/p70S6K）信号通路在乳腺癌组织中的表达水平，并初步探究其在乳腺癌发生、发展中的作用及临床意义。方法选取2013年1月至2016年1月滨州医学院附属滨州市中心医院手术切除的新鲜乳腺癌标本40例，均取相应癌旁组织40例作对照，和32例非乳腺癌乳腺组织，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，免疫组织化学技术检测40例乳腺癌患者癌组织、癌旁乳腺组织及32例正常乳腺组织中mTOR及P70S6K的表达情况，分析mTOR及p70S6K mRNA的表达与相关临床参数的关系。结果 mTOR mRNA在乳腺癌组织中的表达水平（0.611±0.098）显著高于在癌旁乳腺组织（0.419±0.101）和正常乳腺组织（0.381±0.043）中的表达水平，p70S6K mRNA在乳腺癌组织中的表达水平（0.625±0.109）显著高于在癌旁乳腺组织（0.471±0.129）和正常乳腺组织（0.441±0.130）中的表达水平，差异均有统计学意义（均P<0.05）。mTOR和p70S6K在乳腺癌组织中的表达呈正相关（γ=0.491，P=0.019）。mTOR及p70S6K mRNA在乳腺癌组织中的表达水平与病理分期、有无淋巴结转移等明显相关，而与肿瘤直径、年龄等无明显关系。结论 mTOR/p70S6K信号通路在乳腺癌组织中特异性激活，mTOR/P70S6K信号通路可能在乳腺癌的发生、发展中发挥重要作用。
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慈菇多糖通过mTOR信号通路提高巨噬细胞功能
目的 探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在慈菇多糖提高RAW 264.7巨噬细胞功能中的作用.方法 体外培养RAW 264.7巨噬细胞,分别用ELISA和Griess法检测不同剂量慈菇多糖(5、50、500 μg/mL)和香菇多糖(100μg/mL)对巨噬细胞分泌白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)的影响;用RT-PCR和Western blot检测各组巨噬细胞mTOR/第10染色体缺失与张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN) mRNA和蛋白表达变化.结果 与对照组比较,慈菇多糖低、中、高剂量组,香菇多糖组巨噬细胞内IL-2含量[分别为(68.216±1.609)、(70.850±6.669)、(89.634±8.399)、(84.367±8.165)pg/mL]上升;慈菇多糖中、高剂量组,香菇多糖组巨噬细胞内TNF-α含量[分别为(46.989 ±7.895)、(70.739±7.452)、(48.125±6.757)pg/mL]上升,慈菇多糖高剂量组巨噬细胞内NO值[为(7.199±1.242)μmol/L]上升,差异均有统计学意义(均P＜0.01);慈菇多糖中、高剂量组RAW 264.7细胞mTORmRNA表达低于对照组(P＜0.05);慈菇多糖高剂量组、香菇多糖组mTOR蛋白表达低于对照组(P＜0.05).结论 慈菇多糖可能通过mTOR相关信号通路提高巨噬细胞功能.
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p53与细胞衰老关系的研究进展
细胞衰老作为一种细胞应激反应,可使细胞脱离细胞周期,并丧失应对生长因子或有丝分裂原的增殖能力[1].衰老细胞表现出细胞扁平、胀大等形态学改变,同时衰老相关β-半乳糖苷酶活性增加,复制能力下降,细胞周期阻滞,p53和p21、p16等细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子表达增多,衰老相关异染色质灶形成等[2].细胞衰老历来被视为永久的生长停滞状态,细胞不能重新进入细胞周期.但近相关研究表明,在某种条件下,细胞停滞状态是可逆的.持续抑制p53可使衰老的成纤维细胞快速恢复细胞周期,并可无限增殖,提示p53在细胞衰老的启动和维持中起着重要作用.细胞衰老在促进个体衰老和抑制肿瘤中均发挥关键作用[3],故对其机制的研究也日益成为新热点.
关键词： 细胞衰老 P53 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 活性氧簇(ROS) 自噬 -
雷帕霉素靶蛋白抑制剂在移植后新发肿瘤中的应用
随着外科技术的改进和新免疫抑制剂的应用,器官移植的存活率已明显提高,但恶性肿瘤仍是影响移植物长期存活的主要因素之一.以西罗莫司为代表的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂除了具有强有力的免疫抑制作用外,其对恶性肿瘤的靶向治疗作用近年逐步得到确认,并在临床得到推广.本文探讨该类药物在器官移植后新发肿瘤中的应用,包括其作用机理、临床疗效和不良反应,以期为临床移植后肿瘤的治疗提供新的途径.
关键词： 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) mTOR抑制剂 西罗莫司 器官移植 恶性肿瘤 -
转染microRNA-330-5p对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响
[目的]探讨miR-330-5p表达对肺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力等生物学行为的影响,揭示miR-330-5p的作用机制.[方法]分析非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系95C和95D的miRNA表达谱芯片中miR-330-5p的表达情况并用靶标软件预测其靶基因;转染miR-330-5p类似物(mimics)至95D、转染miR-330-5p抑制剂(inhibitor)至95C中,应用CCK-8法、transwell小室法检测miR-330-5p对肺癌细胞增殖、侵袭迁移等生物学行为的影响;应用Western blot法检测miR-330-5p表达对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达水平的影响.[结果]miRNA表达谱芯片显示miR-330-5p在95D中表达明显低于95C;靶标预测软件预测mTOR mRNA可能是miR-330-5p的靶基因;转染miR-330-5p mimics后95D细胞增殖能力显著降低,其24h侵袭穿膜细胞数明显低于对照组,mTOR蛋白表达明显下调(P ＜0.01);而转染miR-330-5p inhibitor后95C细胞的增殖能力增强,其24h侵袭穿膜细胞数较对照组明显增加,mTOR蛋白表达上调(P＜0.01).[结论]提高miR-330-5p表达能够明显抑制肺癌细胞的增殖、侵袭与迁移能力,mTOR mRNA可能是其重要的靶基因.
关键词： miR-330-5p 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 肺肿瘤 侵袭 增殖 -
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白抑制药的心血管作用研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种非典型的丝氨酸/苏氨酸激酶,属于磷酯酰肌醇3激酶相关激酶(phosphatidylinositol kinase-related ki-nases,PIKKs)家族.
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mTOR信号在KA诱导幼鼠(癎)性发作后的表达变化研究
目的:研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号在幼鼠(癎)性发作后的表达变化.方法:海人藻酸(KA)诱导幼鼠(癎)性发作,根据(癎)性发作后不同的时间点(1h、3h、16 h、24 h、3d、5d、1 w、2 w、6 w)进行取材,从大脑中分离KA注射侧海马组织,提取全蛋白进行western blot检测观察(癎)性发作后mTOR信号通路活化的标志物核糖体蛋白56(p-S6)蛋白的表达变化.免疫组织化学检测海马区p-S6免疫阳性细胞的表达.结果:KA海马内注射1h、3h、16h、24 h,3d,5d,1 w,2 w,6 w大鼠海马组织进行western blot检测,发现在急性期p-S6的表达量呈现持续升高的表达变化.KA致(癎)1W后,海马区p-S6阳性细胞表达相对于手术对照组明显增高(76±12 vs25±5).在大鼠大脑皮层神经元亦可见到致(癎)后大量表达的p-S6阳性神经元(88±13 vs 15±3).结论:mTOR信号活化标志物p-S6蛋白在KA诱导幼鼠(癎)性发作后表达明显增加,抑制mTOR信号的异常活化或许成为预防癫(癎)形成的新靶点.
关键词： 癫(癎) 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) p-S6蛋白 幼鼠 -
高三尖杉酯碱阻断mTOR信号通路抑制HT29人结直肠肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡
目的 探讨高三尖杉酯碱(HHT)对HT29人结直肠肿瘤细胞增殖和凋亡调控的分子机制.方法 用(0、0.0078125、0.015625、0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8)μg/mL HHT分别处理HT29细胞24、48、72 h.CCK-8法检测HT29细胞的增殖,集落形成实验检测细胞的集落形成能力;Hoechst33258染色观察染色质凝集情况,流式细胞术检测细胞凋亡;实时定量PCR检测BAX、Bcl2、胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丙酮酸脱氢酶激酶(PDK1)、蛋白激酶B(AKT)、雷帕霉素靶蛋白调节相关蛋白(raptor)、雷帕霉素不敏感的伴侣蛋白(rictor)的mRNA水平;Western blot法检测BAX、Bcl2、胱天蛋白酶3前体(pro-caspase-3)、裂解型caspase-3(c-caspase-3)、pro-caspase-9、裂解型caspase-9(c-caspase-9)、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、裂解型PARP(c-PARP)、mTOR、raptor、rictor、PI3K、PDK1、AKT、p-AKT的蛋白水平.结果 与对照组相比,HHT能抑制HT29细胞增殖,诱导细胞核破裂,染色质凝聚,凋亡小体形成;同时,HHT处理能够提高HT29细胞中BAX/Bcl2比值、caspase-3、caspase-9、raptor的mRNA水平,降低PI3K、AKT、rictor的mRNA水平;并上调HT29细胞中c-caspase-3、c-caspase-9、c-PARP、BAX、raptor蛋白水平,下调pro-caspase-3、pro-caspase-9、PARP、PDK、PDK1、AKT、mTOR、rictor蛋白水平.结论 HHT能够通过阻断mTOR信号通路,进而抑制HT29人结直肠肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡.
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IL-37通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化而诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡和自噬
目的 观察白细胞介素37(IL-37)诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡和自噬的机制.方法 体外培养SMMC-7721细胞,SMMC-7721细胞分为处理组和对照组,处理组分别予以不同剂量(50、100、200)ng/mL的重组人IL-37(rhIL-37).CCK-8法检测SMMC-7721细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测凋亡和自噬相关蛋白Bax、Bcl-2、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和beclin 1及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的水平,透射电子显微镜观察自噬体的形成情况.结果 IL-37可抑制SMMC-7721肝细胞癌细胞的增殖、诱导SMMC-7721细胞凋亡和自噬;IL-37处理组Bax、LC3和beclin 1水平增加,Bcl-2水平降低,mTOR的磷酸化被抑制;可见明显自噬体形成.结论 IL-37可诱导肝细胞癌SMMC-7721细胞发生凋亡和自噬,可能与mTOR的磷酸化有关.
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黄角颗粒通过刺激PI3K/AKT/mTOR信号通路减轻脑缺血再灌注大鼠的脑损伤
目的 探讨黄角颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠的作用及对磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PDK/AKT/mTOR)信号通路的影响.方法 采用线栓法构建大鼠脑缺血再灌注损伤模型,采用黄角颗粒进行处理.ZeaLonga评分法进行大鼠神经功能评分、氯化三苯四唑(TTC)染色检测脑梗死百分比、HE染色观察脑组织病变情况、ELISA检测脑组织中白细胞介素10(IL-10)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,Western blot法检测PI3K、AKT、磷酸化的AKT(p-AKT)、mTOR和磷酸化的mTOR(p-mTOR)蛋白水平.结果 黄角颗粒可显著减轻模型大鼠的神经功能缺损程度,减少脑梗死百分比,减轻脑组织病理损伤,显著上调脑组织中IL-10、PI3K、p-AKT和p-mTOR的水平,显著下调IL-1 β和TNF-α的水平.结论 黄角颗粒对脑缺血再灌注损伤的保护作用可能与促进PBK/AKT/mTOR信号通路的激活相关.
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间歇性低氧激活脑缺血大鼠海马区自噬通路并引起学习记忆功能降低
目的 探讨不同时间间歇性低氧对脑缺血大鼠海马区自噬通路及学习记忆的影响.方法 100只雄性Wistar大鼠采用数字随机法随机分成假手术组(SO组)、单纯脑缺血再灌注组(I/R组)、间歇性低氧7d脑缺血组(IH7-I/R组)、间歇性低氧14 d脑缺血组(IH14-I/R组)、间歇性低氧21 d脑缺血组(IH21-I/R组),每组20只.IH7-I/R组、IH14-I/R组、IH21-I/R组分别给予间歇性低氧7、14、21 d后制作脑缺血模型.采用改良的Pulsinelli四血管阻断法制备脑缺血模型,HE染色观察海马区神经细胞形态变化,实时定量PCR检测大鼠脑组织海马区哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、beclin 1 mRNA水平,免疫组织化学法检测海马区mTOR、beclin 1的分布,Morris水迷宫测试检测大鼠学习记忆功能.结果 与SO组比较,I/R组大鼠神经元损伤,存活神经细胞数量减少,mTOR、beclin 1表达增强,大鼠的学习记忆功能下降.与I/R组比较,间歇性低氧脑缺血各组大鼠在各时间点神经元损伤加重,存活神经细胞数量减少,mTOR、beclin 1表达增强,大鼠的学习记忆功能下降.且随间歇性低氧时间的延长而逐渐加重.结论 间歇性低氧可加重脑缺血大鼠学习记忆功能障碍并随缺氧时间延长而加重,与mTOR-beclin 1自噬通路活化,神经细胞死亡增加有关.
关键词： 间歇性低氧 脑缺血 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 自噬 -
雷帕霉素及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在免疫调节中的作用研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是丝氨酸苏氨酸蛋白酶,由雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)和mTORC2组成,具有调节细胞生长、代谢、增殖、存活功能.mTOR及其相关信号通道在多种疾病的病理生理过程中具有重要的调节作用,如自身免疫性疾病系统性红斑狼疮(SLE)、移植排斥反应及肿瘤等.雷帕霉素是mTOR敏感性抑制剂,具有免疫抑制作用,现已用于mTOR相关的多种疾病治疗,我们主要总结了雷帕霉素及mTOR参与疾病免疫调节的作用及机制.
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宫颈癌分子靶向药物的研究进展
晚期及复发性宫颈癌预后差,尚缺乏有效的治疗手段.许多研究以宫颈癌形成过程中的各种信号转导环节为靶向,寻找新药物和治疗策略,包括靶向抑制肿瘤血管生成、表皮生长因子、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、环氧合酶-2、组蛋白去乙酰化酶等.虽然还没有任何药物被准予临床应用,但有关贝伐单抗的临床试验结果显示出靶向肿瘤血管生成通路是颇具吸引力的宫颈癌治疗策略.随着宫颈癌成因机制的明了,分子靶向药物的产生及应用将会为宫颈癌的治疗开辟新的途径.
