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芪玉三龙方调节Wnt/β-catenin通路下游靶基因表达抑制荷瘤小鼠肺癌生长
目的:探讨芪玉三龙方对荷肺癌小鼠的抑瘤效果和对Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因c-myc、 cyclinD1、Axin2表达的影响.方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组,芪玉三龙方低、中、高剂量组,化疗组,联合组,每组8只;造模第2天开始予以芪玉三龙方低、中、高剂量组小鼠分别按20.12、40.24、80.48g·kg-1·d-1灌胃给药,化疗组按照0.4mL顺铂腹腔注射给药,联合组以高剂量中药灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组按照等量0.9％氯化钠溶液给药,连续给药21d;称取瘤质量,计算抑瘤率; RT-qPCR检测肿瘤组织c-myc、cyclinD1、Axin2 mRNA的转录水平.结果:与模型组和低剂量组比较,芪玉三龙方中、高剂量组和化疗组c-myc mRNA表达显著降低(P＜0.01).与模型组比较,各用药组cyclinD1 mRNA表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01);与低剂量组比较,中剂量组、化疗组表达显著降低(P＜0.01).与模型组比较,各用药组Axin2 mRNA表达显著降低(P＜0.01);与低剂量组、化疗组比较,芪玉三龙方中、高剂量组表达显著降低(P＜0.01).结论:芪玉三龙方对肺癌移植瘤具有一定的抑制作用,其抑瘤机制可能与芪玉三龙方调节肺癌组织c-myc mRNA、cyclinD1 mRNA、Axin2 mRNA的转录水平有关.芪玉三龙方高剂量抑瘤效应较优,量效关系明显,其与化疗药合用具有协同效应.
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AXIN2基因单核苷酸多态性与多数牙缺失的相关性研究
目的:寻找AXIN2基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与中国人群多数牙缺失的关系.方法:收集97例单纯型多数牙缺失先天牙齿缺失患者和200例正常对照者.从静脉血或者颊黏膜拭子提取DNA,利用PCR技术对AXIN2基因上3个SNP位点(rs2240308,rs145353986和rs139209450)进行基因分型检测.结果:发现AXIN2基因的rs145353986位点的基因型和等位基因型的出现频率在患者和正常对照组中的分布,差异有统计学意义(P=0.011),等位基因“C”在患者组中出现频率更高(P=0.002).结论:AXIN2基因的rs145353986位点的多态性与中国人群的先天牙齿缺失存在明显相关性,AXIN2基因可以作为先天牙齿缺失研究的重点关注基因之一.
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Axin2在胰腺癌细胞中的表达及意义
目的 探讨Axin2在胰腺癌细胞中的表达情况及其对人胰腺癌细胞(PANC-1)增殖、侵袭及迁移能力的影响.方法 采用实时荧光定量核酸扩增检测系统(QPCR)检测不同侵袭能力的胰腺癌细胞株(PANC-1、Mia PaCa-2、BxPC-3)和永生化正常胰腺细胞(H6C7)中Axin2表达情况;过表达Axin2质粒瞬时转染低表达的PANC-1细胞株,采用MTT法、Transwell法及划痕实验分别检测转染过表达Axin2后细胞增殖、侵袭及迁移能力变化.多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验.结果 Axin2在PANC-1、BxPC-3、Mia PaCa-2及H6C7细胞中相对表达量分别为0.13 ±0.01、0.42±0.05、0.24±0.011和1.00±0.00,其中PANC-1细胞中表达水平低,与其他组比较差异均有统计学意义(P值均＜0.05);过表达Axin2载体转染PANC-1细胞后,过表达组细胞中Axin2相对表达量与空白、阴性对照组相比,其表达量显著升高,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);与未转染组和空白对照组相比,过表达组的PANC-1细胞增殖、侵袭及迁移能力均明显减弱.结论 Axin2在胰腺癌细胞株较正常胰腺细胞表达下调,在侵袭能力越高的癌细胞株中表达越低,提示起抑癌基因作用;Axin2高表达能减弱PANC-1细胞的增殖、迁移及侵袭能力.
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ITGA3、TP53INP2和AXIN2基因多态性与甲状腺乳头状癌发病的关联性分析
目的:探讨ITGA3、TP53INP2和AXIN2基因多态性与甲状腺乳头状癌(PTC)的关联性,为防治PTC提供依据.方法:收集56例PTC患者(病例组)的血液,同时取50例甲状腺正常人(对照组)血样.应用激光解析电离飞行时间质谱技术检测ITGA3、TP53INP2和AXIN2基因共14个tag SNPs的基因型,比较病例组和对照组各位点基因型频数和等位基因频数分布差异,采用UNPHASED3.1.4软件分析2个及2个以上位点组成的单倍体型与PTC的关系.结果:Hardy-Weinberg平衡定律检验,14个位点在2组研究对象中的基因型频数分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P＞0.05).AXIN2基因的rs11655966、rs3923086和rs7591位点在病例组和对照组各等位基因频数分布差异有统计学意义(x2=6.029,df=1,P=0.014;x 2=4.518,df=1,P=0.034;x2=4.674,df=1,P=0.031),TP53INP2基因上rs910870位点在病例组和对照组的各等位基因频数分布差异有统计学意义(x2=4.583,df=1,P=0.032),ITGA3基因上5个tag SNPs基因型在病例组和对照组各位点基因型频数和等位基因频数分布差异无统计学意义(P＞0.05).多位点联合分析,rs7210356-rs7591-rs4074947-rs11655966-rs3923086-rs4791169-rs224030单倍体系统在病例组和对照组中的分布差异有统计学意义(P＜0.05).结论:AXIN2基因的rs11655966、rs3923086和rs7591位点可能与PTC发病有关联,AXIN2基因中多个位点组成的单倍体型可能与PTC发病有关联;TP53INP2基因的rs910870位点可能与PTC发病有关联,ITGA3可能与PTC发病无关联.
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抑癌因子SOX7在乳腺癌中的表达及其与AXIN2表达的相关性
目的 研究SOX7及AXIN2在乳腺癌中的表达及其相关性.方法 采用免疫组织化学SP法检测104例乳房切片中,SOX7、AXIN2及β-catenin的表达情况,其中74例肿瘤组织,30例正常组织作对照.结果 SOX7在乳腺癌中低表达,且与AXIN2的表达具有正相关性(P=0.001),与β-catenin的表达具有负相关性(P =0.006);SOX7的下调与乳腺癌的分期和分化程度具有相关性(P=0.072;P=0.085),与激素受体和生物标记物无相关性(P =0.059;P =0.438).结论 本研究证实了SOX7在乳腺癌的发生发展中表现为抑癌因子作用,同时也提出了SOX7与AXIN2在乳腺癌中协同表达的现象,并指出SOX7可以作为一种独立预测乳腺癌预后的生物标记物.
关键词： 乳腺癌 SOX7 Axin2 Wnt/β-catenin -
一个单纯性先天缺牙家系的临床表现及PAX9、MSX1、AXIN2基因突变分析
目的 对一个单纯性先天缺牙家系进行缺牙临床表型的分析及PAX9、MSX1及AXIN2基因突变检测,探讨单纯性先天缺牙的可能发病机制.方法 收集一个单纯性先天缺牙家系的临床资料(包括口腔检查和影像学资料)和静脉血标本,提取DNA,采用PCR分段扩增PAX9基因的1-4号外显子,MSX1基因的1、2外显子及AXIN2基因的1-10号外显子,通过基因测序,分析该家系PAX9、MSX1及AXIN2基因是否存在突变、突变方式及位点,并进行可疑致病突变的验证分析.结果 该家系中单纯性先天缺牙患者的缺失牙位数目多为第二前磨牙和尖牙,均占该家系缺牙数目的41.2％.基因检测发现PAX9基因2个SNP位点:c.717C＞T、c.718G＞C;MSX1基因未检测到突变;AXIN2基因发现3个SNP:c.432.T＞C、c.1365.A＞G、c.2062.C＞T.结论 该家系的单纯性先天缺牙可能是由AXIN2基因c.2062.C＞T改变和PAX9基因c.717C＞T、c.718G＞C改变共同作用下形成的.
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结直肠癌组织中突变型Axin2对Wnt信号转导系统的调控及其机制
背景与目的:Axin2是近期发现的Wnt信号转导系统的新基因,其在结直肠癌中主要的突变形式为羧基端缺失突变(mutant-type Axin2,mtAxin2).本研究的目的在于探索mtAxin2对Wnt信号转导系统的调控作用及其相关机制.方法:采用免疫组化的方法检测大肠癌组织中β-catenin的表达;构建pCMV-Flag-wtAxin2 和pCMV-Flag-mtAxin2质粒转染293细胞,采用免疫沉淀(co-immunoprecipitation,IP)和Western印迹杂交研究mtAxin2与Wnt信号转导系统中其它关键蛋白的作用;应用TNT T3/T7体外转录翻译系统体外合成mtAxin2 蛋白,用于mtAxin2的体外聚合实验:使用Dual-Luciferase 报告检测系统检测Firefly和Renilla荧光酶活性;构建视网膜受体(retinoid receptor,RR)与蜕皮素受体(ecdysone receptor,ECR)质粒,用于恢复mtAxin2的DIX功能区对mtAxin2功能影响的研究.结果:免疫组化检测显示在有Axin突变的结直肠癌标本中β-catenin蛋白在核内积聚,而无Axin突变者在胞浆内.Westem印迹杂交显示mtAxin2仍具有与GSK-3β、APC、β-catenin、DVL-1和PP2A形成复合体的功能.将Flag-wtAxin2和Flag-mtAxin2共转染293细胞后,mtAxin2与wtAxin2可竞争性地与β-catenin结合.在TNT T3/T7体外转录翻译实验中.wtAxin2与Flag-wtAxin2结合,而与Flag-mtAxin2不结合,mtAxin2不能形成二聚体或多聚体.pCMV-Flag-mtAxin2-RXR质粒转染293细胞后可降低T细胞转录因子报告基因(T-cell factor,TCF)活性,pCMV-Flag-mtAxin2-ECR质粒转染后TCF活性升高;pCMV-Flag-mtAxin2-RXR和pCMV-Flag-mtAxin2-ECR共转染,TCF活性也下降,显示mtAxin2与RXR融合后,融合蛋白可形成二聚体,恢复了Axin2的功能.致TCF报告基因的活性下降.结论:因为缺失DIX区,mtAxin2不能形成二聚体,干扰了β-catenin的降解,引起β-catenin在核内的积聚进而激活Wnt信号转导系统.
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单纯性多数牙缺失家系的AXIN2基因突变分析
目的：通过对AXIN2基因多态性与单纯性多数牙先天缺失关系的探讨，寻找该病发病的可能基因因素。方法对单纯性多数牙先天缺失家系中患者进行临床和实验室相关检查；而后提取基因组DNA ，通过RT?PCR方法对AXIN2基因的外显子进行扩增、测序，同时分析基因突变类型。结果 DNA测序显示，在AXIN2基因的3号外显子及附近的内含子区2例患者出现3个相同类型的基因突变，分别是：c.1365A>G（p.Pro455=），c.956+16A>G（Ⅱ?1：纯合型；Ⅲ?1：杂合型），c.1200+71A>G（纯合型），同时先证者的母亲（Ⅱ?2）出现c.1365A>G和c.1200+71A>G的杂合突变类型。经生物信息软件分析认为均是多态性位点。结论 AXIN2基因的c.956+16A>G，c.1365A>G和c.1200+71A>G突变可能与该家系的单纯性多数牙齿缺失密切相关，但AXIN2在多数牙缺失发生发展各阶段的确切作用还需要进一步的研究。
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Axin1和Axin2基因在急性白血病中的表达及临床意义
目的:探讨Axin1和Axin2基因的表达与急性白血病发生发展的关系及其临床意义.方法:通过实时定量PCR技术检测36例急性白血病患者及15例对照组骨髓单个核细胞中Axin1和Axin2 mRNA的表达情况.结果:Axin1在初诊组、缓解组和未缓解组中的表达量均低于对照组(P<0.05),初诊组与缓解组、初诊组与未缓解组的表达量均无明显差异(P>0.05),缓解组与未缓解组初诊时Axin1的表达无明显差异(P>0.05);Axin2 在缓解组中的表达量比对照组明显减低(P<0.05),未缓解组比缓解组初诊时Axin2的表达明显增高(P<0.05),初诊组与对照组、初诊组与未缓解组的表达均无明显差异(P>0.05).结论:Axin1与急性白血病的发生诊断相关,Axin2则可以作为急性白血病的一个预后指标.
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AXIN2在人脑血管母细胞瘤中的表达及临床意义
目的：AXIN2在正常人脑组织和人脑血管母细胞瘤中的表达，以了解其在血管母细胞瘤发病机制中所起的作用。方法：应用免疫组织化学（S‐P法）对30例人脑血管母细胞瘤、10例正常脑组织中AXIN2的表达进行检测和统计学分析。结果：脑血管母细胞瘤组织中AXIN2的表达水平明显低于高于正常脑组织中（P＜0．05）。结论：AXIN2的表达与人脑血管母细胞瘤的发生具有明显的负相关性，AXIN2的检测和干预有可能为人脑血管母细胞瘤机制研究及临床治疗提供新的思路。
关键词： 血管母细胞瘤/病理学 基因 肿瘤抑制/代谢 免疫组织化学 Axin2 -
结直肠癌中Axin2和Smad4的表达与上皮间质转化的关系
目的：检测结直肠癌、腺瘤及正常组织中Axin2和Smad4的表达情况，并分析其在上皮间质转化中的作用机制及其预后判断价值。方法：应用免疫组织化学方法检测140例结直肠癌患者，41例结直肠腺瘤患者，134例癌旁无瘤组织中Axin2和Smad4的表达水平，研究二者在不同组织中的表达与临床病理特征的联系。结果：Axin2的阳性表达率在结直肠癌组织中明显低于腺瘤组织和癌旁正常组织（P＜0．05），Axin2蛋白的表达与淋巴结转移及病理分期密切相关（P＜0．05）；Smad4蛋白的阳性表达率在结直肠癌组织中明显低于腺瘤组织和癌旁正常组织（P＜0．05），Smad4蛋白的表达与肿瘤的分化程度及淋巴结转移有关（P＜0．05）。结论：Axin2和Smad信号传导通路介导的上皮间质转化与结直肠癌的浸润转移有密切关系，结直肠癌组织中Axin2和Smad4表达减低与结直肠癌进展有关，可能有望成为结直肠癌的生物学标志物。
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Notch和Wnt在人子宫内膜癌组织中的表达与临床意义
目的 探讨Notch和Wnt信号和其下游信号分子Hesl和Axin2在人子宫内膜癌中的表达及其相关性.方法 检测37例正常人子宫内膜、内膜增生和子宫内膜癌中Notch1和Wnt信号的表达以及Hesl和Axin2的表达情况.结果 内膜增生组和癌组Notch1和Wnt的表达均强于正常组(P<0.05).Hesl表达在正常组和子宫内膜增生组类似,在癌组中表达升高;Axin2的表达在三组中类似,都较低,差异不显著.HES1则在癌组中表达升高.结论 Notch1和wnt的表达均与子宫内膜癌的发生密切相关,HES1主要参与了子宫内膜癌的进展变化.
