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基于代谢组学分析不同蒸制次数熟地黄中糖类成分的变化规律
目的:基于代谢组学技术研究不同蒸制次数的熟地黄中糖类成分的变化规律.方法:收集采用传统方法加工的第1蒸至第9蒸熟地黄样品,分别对其水提液进行1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生及LC-MS测定.采用SIMCA-P 13.0软件进行主成分分析(PCA)和正交偏小二乘法-判别分析(OPLS-DA),得到差异标记物,通过多级质谱离子碎片及对照品比较对差异标记物进行鉴定.结果:经OPLS-DA共鉴定了6种糖类化合物,分别为甘露三糖、蜜二糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖;其中甘露三糖和蜜二糖逐渐降低,在第9蒸熟地黄中相对峰面积低,分别为0.60和0.52;阿拉伯糖逐渐升高,在第9蒸熟地黄中相对峰面积达到4.74;甘露糖先升高后降低,其相对峰面积在第5蒸熟地黄中高,达3.33;而葡萄糖和半乳糖基本上处于稳定状态.PCA结果显示第1蒸至第9蒸熟地黄沿着PC1轴逐渐改变,糖类代谢物发生着显著变化.结论:不同蒸制次数的熟地黄样品中糖类成分差异较大,可为九蒸九晒熟地黄的质量评价提供实验依据.
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中药水提液中还原糖衍生化测定方法研究
目的:建立1一苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生高效液相色谱法测定中药水提液中还原糖种类及含量的方法.方法:以7种还原糖作为标准物,通过PMP柱前衍生化,利用反相高效液相色谱法,分析其衍生产物.以PMP衍生产物峰面积大小为指标,分别对衍生反应的反应时间、反应温度、PMP和NaOH用量、后处理使用的萃取试剂、萃取次数进行考察,得到了佳衍生化条件.并将该方法用于7味中药水提液中还原糖类成分种类及含量的分析.结果:葡萄糖是本研究所检测7味中药中普遍存在的一类成分,且含量较高,除标准糖外,还含有未知还原糖类成分.D+(葡萄糖)、D+(半乳糖)、D+(甘露糖)、D+(麦芽糖)和D+(乳糖)、D+(阿拉伯糖)和D+(木糖)的线性范围分别为0.72-36μ g/mL (r=0.9997)、0.72-36μg/mL(r=0.9998)、0.72-36μg/mL(r=0.9995)、1.44-72μg/mL(r=0.9995)、0.6-30μg/mL(r=0.9995).结论:本方法简便、灵敏、重复性好,可用于中药水提液中还原糖类成份种类及含量的分析.
关键词： 中药 还原糖 柱前衍生化 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 高效液相色谱 -
柱前衍生化HPLC法测定疏血通注射液及其原药材中糖的含量
目的:测定疏血通注射液及其原药材水蛭、地龙中游离糖和多糖的含量.方法:采用PMP柱前衍生化法,对疏血通注射液及水蛭、地龙药材进行分析,色谱柱为Phenomenex Prodigy ODS-3 (250 mm×4.6 mm,5μm)；流动相为20 mmol·L-1醋酸铵-乙腈,梯度洗脱；检测波长为254nm；流速为1.2 mL·min-1.结果:在确定的分析条件下,葡萄糖、甘露糖和半乳糖在测定范围内都有良好的线性,甘露糖的平均回收率为101％,葡萄糖的平均回收率为96.8％,半乳糖的平均回收率为97.3％.结论:该方法简便、准确、稳定,适合用于疏血通注射液及原药材中游离糖和多糖含量的测定.
关键词： 疏血通注射液 水蛭 地龙 柱前衍生化 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 -
龙牙楤木多糖在大鼠体内的药代动力学研究
目的：研究龙牙楤木多糖在大鼠体内的药代动力学。方法大鼠单次口服龙牙楤木多糖后，采用高效液相色谱与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生方法测定大鼠血浆中的龙牙楤木多糖。色谱柱为Agilent Zorbax XDB-C18柱（5μm，150 mm×4.6 mm），流动相为0.1mol/L磷酸盐溶液（pH6.7）：乙腈=83：17。结果血清样品中，龙牙楤木多糖的线性范围为5.0～100.0μg/ml（r=0.9988）；高、中、低3种不同浓度的日内RSD值分别为4.12%、6.28%、6.93%；日间RSD值分别为4.07%，6.50%，6.85%；相对回收率分别为88.0%、93.6%、95.07%。单剂量给药后，大鼠体内的药代动力学过程符合开放2室模型，主要药代动力学参数分别为Cmax：61.15μg/ml，tmax：94.57 min，AUC：20421.60 min/（μg·ml），t1/2ka：34.37，t1/2ke：149.17。结论高效液相色谱与PMP柱前衍生法测定大鼠血浆中的龙牙楤木多糖的方法专属性强，结果可靠。
关键词： 高效液相色谱 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 龙牙楤木多糖 大鼠 血浆 -
虫草多糖中单糖组成的柱前衍生化HPLC分析
建立了柱前衍生化HPLC法测定虫草多糖中单糖的组成及摩尔比.采用C18柱,以0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.7)-乙腈(83:17)为流动相,榆测波长254 nm.衍生化试剂为1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮.所测3批样品中虫草多糖由甘露糖、葡萄糖、半乳糖3种单糖组成,单糖的摩尔比约为2:2:1.平均回收率分别为101.0%、98.6%和 99.2%,RSD分别为1.9%、1.6%和1.2%.
关键词： 虫草多糖 单糖 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 高效液相色谱 测定 -
高效液相色谱法测定血清葡萄糖
目的 建立一种测定血清葡萄糖(glucose,Glu)的高效液相色谱法(HPLC),探讨其能否作为血清Glu测定的参考方法.方法 以D-半乳糖(D-galactose)为内标物,用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白质,在pH9.1条件下与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)反应,用HPLC测定血清Glu衍生产物、D-半乳糖衍生产物,用标准曲线法定量；对建立的方法进行方法学评价.结果 本法测定血清Glu的批内变异系数(CV)为0.33％～ 0.67％,平均0.51％；批间CV为0.02％～ 0.85％,平均0.38％；总CV为0.47％～ 1.03％,平均0.68％.回收率为98.22％ ～ 101.96％.分析Glu的参考物质SRM 965a,测定结果与认定值的偏差为-0.928％～0.347％,平均偏差为- 0.072％.结论初步建立了测定血清Glu的HPLC法；该法准确、精密,有望作为血清Glu测定的候选参考方法.
关键词： 葡萄糖 高效液相色谱 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 -
柱前衍生化HPLC分析蒲公英多糖的单糖组成
目的 合理优化衍生方法测定蒲公英多糖中单糖的组成及摩尔比.方法 采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生,用反相高效液相色谱法进行测定.色谱条件为:ZORBAX-C_(18)柱;流动相:0.1 mol·L~(-1)的磷酸盐缓冲液(pH6.7)-乙腈(83:17);流速:1 mL·min~(-1);检测波长:245 nm;进样量:20 μL;柱温:室温.结果 蒲公英多糖由D-鼠李糖、葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖和D-阿拉伯糖组成,以不同方法提取的单糖含量的摩尔比为:水提取法,Rha:Glc:Gal:Ara=0.088:0.500:0.190:0.340;超声提取法,Rha:Glc:Gal:Ara=0.050:0.350:0.080:0.320;酶提取法,Rha:Glc:Gal:Ara=0.270:0.630:0.330:0.460;超声协提取同酶法,Rha:Glc:Gal:Ara=0.078:0.550:0.130:0.170.结论 改进后的衍生化方法和等度洗脱的色谱方法具有操作简单、快速、重复性好等特点,可用于蒲公英多糖中单糖组成和摩尔比的测定.
关键词： 柱前衍生化 高效液相色谱法 单糖 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 -
HPLC分析大蒜多糖中的单糖
目的 建立一种反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分析大蒜多糖中的单糖组成及摩尔比.方法 大蒜多糖样品经2mol·L-1硫酸降解为单糖后,经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化,采用Shimadzu VP-ODS柱(150 min×4.6 mm,5 μm)分离,以乙腈-醋酸铵缓冲溶液(取醋酸铵7.708 g加水溶解并稀释至1 000 mL,用醋酸调pH 5.5(22:78)为流动相,流速为0.8 mL·min-1,在245 am处检测单糖的衍生化产物.结果 大蒜多糖中甘露糖(Man)、鼠李糖(Rha)、葡萄糖醛酸(GlcuA)半乳糖醛酸(GalUA)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、阿拉伯糖(Arab)7种单糖的摩尔比为4.31:4.23:4.19:9.13:27.4:4.99:3.81.结论 本方法 灵敏度高,结果 准确可靠,可用于大蒜多糖的单糖组成测定及质量控制.
关键词： 大蒜多糖 衍生化 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 反相高效液相色谱法 -
大蒜多糖中单糖组分的毛细管电泳研究
目的 建立高效毛细管电泳法(HPCE)分析大蒜多糖中的单糖组成及摩尔比.方法 大蒜多糖样品经2 mol/L硫酸降解为单糖后,经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮( PMP)衍生化,用毛细管区带电泳(CZE)法测定单糖组成.结果 大蒜多糖中葡萄糖(Glc)、半乳糖醛酸(GalUA)、鼠李糖(Rha)、甘露糖(Man)、阿拉伯糖(Arab)、葡萄糖醛酸(GlcUA)、半乳糖(Gal)的摩尔比为18.4∶6.99∶4.21∶4.38∶3.15∶7.21∶4.99.结论 该方法灵敏度高,结果准确可靠,可用于大蒜多糖的单糖组成测定及质量控制.
关键词： 大蒜多糖 衍生化 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 毛细管电泳法 -
1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮糖衍生物在反相高效液相色谱法分离中保留行为的探讨
本文针对反相HPLC分离中,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)先于PMP糖衍生物(PMP-SD)出峰的现象,通过控制降解β-环糊精得到系列寡糖,PMP衍生后采用HPLC法对其保留行为进行考察,并结合相关文献以及不同条件下PMP和PMP-SD的结构进行讨论,来说明其极性变化的原因.结果表明,吡唑啉酮环为烯醇结构时是PMP的优势构象,烯醇基解离使PMP极性显著增大.衍生糖上顺式结构的C-2、C-3位羟基仅可与一个PMP吡唑啉酮环上的酮基通过氢键环合,抑制酮基向烯醇基的转变,使衍生糖上的PMP极性降低.衍生糖上反式结构的C-2、C-3位羟基可与2个PMP上的酮基通过氢键环合,使衍生糖上PMP的极性进一步降低.在使用高盐浓度的流动相对PMP-SD的洗脱中,糖链的高极性基本不发挥作用.本文为糖类成分反相HPLC分离时色谱柱的选择和更有针对性的条件优化提供参考.
关键词： 糖 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 衍生物 反相高效液相色谱 极性 -
复方南板蓝根颗粒中多糖的含量测定及单糖组成分析
目的:测定复方南板蓝根颗粒中多糖的含量及其单糖组成.方法:采用硫酸-苯酚法测定多糖含量;测定条件:5％苯酚溶液1 mL,硫酸5 mL,检测波长490 nm.设计正交试验对该制剂中多糖全降解条件进行优化;以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为衍生试剂,采用毛细管区带电泳法,分析其单糖组成;电泳条件:未涂层弹性石英毛细管柱(52 cm×50 μm,有效长度43 cm),运行缓冲液40 mmol· L-1硼砂缓冲液(pH 10.1),检测波长245 nm,运行电压12 kV,进样量8cm×10s.结果:测得该制剂中多糖含量为1.708％～1.828％;多糖全降解的优条件为硫酸浓度0.75 mol·L-1,温度100℃,时间5h;其单糖组成为木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸.对所建立的毛细管区带电泳法进行方法学验证,结果显示其精密度RSD≤3.8％,重复性RSD≤5.5％,并且稳定性满足要求,回收率结果显示:半乳糖和半乳糖醛酸的平均回收率分别为99.7％～106.9％和94.8％～102.5％,其RSD分别为2.4％～4.9％和1.7％～4.6％.结论:本文为复方南板蓝根颗粒中多糖的测定及其质量标准的完善提供参考.
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HPLC法建立人参糖肽注射液特征图谱的研究
目的:建立人参糖肽注射液特征图谱.方法:通过对人参糖肽注射液中多糖1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化,采用高效液相色谱法进行组成糖分析.结果:人参糖肽注射液特定特征图谱由6个共有峰组成,为甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖.结论:高效液相色谱法建立多糖的特征图谱,操作方法简便,分离度高,重复性及稳定性良好,该结果可有效控制人参糖肽注射液的内在质量,同时可作为酸性杂多糖组成糖的测定方法.
